腎陽虛證動物模型建立方法及評定標準研究進展

★ 李威 王順譜 楊鳳云（.江西中醫(yī)藥大學(xué)研究生院 南昌 330004；.江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 南昌 330006）

腎陽虛是指腎陽氣虧虛，溫煦功能下降而導(dǎo)致的腰膝酸軟、畏寒肢冷、精神不振、舌淡胖苔白、脈沉弱無力為主要表現(xiàn)的證候。鄺安堃［1］等開創(chuàng)了動物腎陽虛模型的先河，模擬了最原始的腎陽虛模型，首次將中醫(yī)學(xué)證型與現(xiàn)當代實驗方法進行結(jié)合，隨著后續(xù)研究的深入，常用的造模方法也逐漸增多，與此同時評定標準也不斷改進，造模方法主要包括中醫(yī)傳統(tǒng)病因造模、藥物造模及手術(shù)造模法，評價標準包括中醫(yī)辨證標準和生化標準，現(xiàn)對目前情況作如下綜述。

1 造模方法

1.1 中醫(yī)傳統(tǒng)病因造模 主要有三種，見表1。

表1 中醫(yī)傳統(tǒng)病因造模方法

1.1.1 恐傷腎造模 此模型根據(jù)中醫(yī)理論中五行學(xué)說，腎主恐，腎臟對應(yīng)七情當中的恐，當恐太過則會傷及相應(yīng)臟腑。劉宏等［2］通過讓老鼠觀看貓吃鼠，使老鼠受驚嚇，連續(xù)14d，建立腎陽虛模型，馮新玲等［3］使用貓來恐嚇孕鼠，導(dǎo)致其仔鼠腦發(fā)育不完善，導(dǎo)致仔鼠的腎陽虛。

1.1.2 房勞造模 中醫(yī)學(xué)認為房勞過度會傷及腎臟，導(dǎo)致腎虛。李震等［4］通過迫使雄鼠每天與動情期雌鼠過度交配，每天更換不同的雌鼠，同時每天讓大鼠游泳半個小時耗損其體力，連續(xù)一個月后大鼠出現(xiàn)了腎陽虛證型的相關(guān)癥狀。

1.1.3 年老動物自然造模 不對動物進行干預(yù)，正常飼養(yǎng)，飼養(yǎng)一年以后，密切關(guān)注大鼠的各項指標，當出現(xiàn)腎陽虛的癥狀體征表示造模成功。姚建平等［5-6］通過對正常大鼠飼養(yǎng)15個月后，發(fā)現(xiàn)腎陽虛造模成功。

中醫(yī)傳統(tǒng)病因造模方法這種造模方法較符合中醫(yī)理論，不會因為外力而導(dǎo)致的不確切的影響，但造模效果不夠穩(wěn)定，比較浪費實驗資源，造模時間偏長，影響因素較多，公認性較低。

1.2 藥物造模 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)腎陽虛的發(fā)生主要與下丘腦－垂體－靶腺軸功能的紊亂有關(guān)［7］，主要包括下丘腦－垂體－腎上腺軸（Hypothalamic pituitary gonadal axis，HPA）、下丘腦－垂體－性腺軸（Hypothalamic pituitary gonadal axis，HPG） 和下丘腦－垂體－甲狀腺軸（Hypothalamus pituitary thyroid axis，HPT）三種，而造模也是針對不同的軸使用相應(yīng)的藥物破壞其正常功能，從而導(dǎo)致腎陽虛的發(fā)生。見表2。

表2 藥物造模方法

1.2.1 糖皮質(zhì)類激素造模 糖皮質(zhì)類激素造模中最常用的就是氫化可的松，此類藥主要是作用于HPA，可以抑制垂體分泌促腎上腺激素（ACTH）的分泌，抑制HPA軸，使得腎上腺分泌腎上腺素受抑制，出現(xiàn)近似腎陽虛癥狀。茍小軍等［8］以25 μg/（g·d）的量，用氫化可的松肌注大鼠雙側(cè)后肢，持續(xù)15 d，何書芬等［9-10］同樣用氫化可的松對大鼠雙側(cè)后肢肌注造模，以15 mg/（kg·d）的量，持續(xù)造模21 d，造模大鼠都會表現(xiàn)有體重下降、畏縮抱團、畏寒肢冷及毛發(fā)稀疏等典型腎陽虛的表現(xiàn)，造模明顯成功。此類造模方法是最早使用，也是目前使用率最高的造模方法。

1.2.2 腺嘌呤造模 由于腺嘌呤的過度攝入導(dǎo)致其過量的代謝產(chǎn)物會影響腎臟的功能，此法主要作用于HPG軸，導(dǎo)致功能紊亂，從而形成腎陽虛模型。王家輝等［11］通過給雄性大鼠腺嘌呤灌胃，以200 mg/（100 g·d）的量持續(xù)灌胃28 d，對大鼠生殖系統(tǒng)進行檢測發(fā)現(xiàn)其受損嚴重，且灌胃中期就開始出現(xiàn)了腎陽虛。腺嘌呤造模也比較常用，僅次于氫化可的松造模。

1.2.3 抗甲狀腺藥物造模 常用的藥物有甲巰咪唑和丙硫氧嘧啶，此類藥物能夠抑制HPT軸，抑制甲狀腺中甲狀腺激素的合成和分泌，導(dǎo)致該軸的紊亂。翟旭峰等［12］以10 mg/（kg·d）劑量的甲巰咪唑給大鼠進行灌胃，連續(xù)灌胃15d，對大鼠血清中甲狀腺激素檢測發(fā)現(xiàn)含量下降，再結(jié)合癥狀表明造模成功。王曉英等［13］使用丙硫氧嘧啶對大鼠進行灌胃，持續(xù)21 d，也可以造出腎陽虛模型。

1.2.4 其他藥物造模 除以上常用的藥物造模方法外，還有部分應(yīng)用不太廣泛的藥物造模方法，如羥基脲、卡那霉素、雷公藤多甙及利血平等藥物造模［14-15］，這些藥物不屬于以上三類，但也有其作用的機制，也可以建立腎陽虛模型。

藥物造模方法具有一定的優(yōu)勢，目前使用率最高，造模時間短，效果明顯，但藥物造模會對造模動物產(chǎn)生不同程度的病理損害，需酌情選擇。

1.3 手術(shù)造模 手術(shù)造模的原理與藥物造模的大同小異，只是造模的方式不同，手術(shù)造模比藥物造模的程度更重，常用的造模方法如下，見表3。

表3 手術(shù)造模方法

1.3.1 去勢造模 指切除雌性大鼠的卵巢和雄性大鼠的雙側(cè)睪丸，切除了大鼠的性腺會直接抑制HPG軸，導(dǎo)致雌激素或雄激素的停止分泌，引起該軸的功能紊亂。史宏等［16］切除雄性大鼠的雙側(cè)睪丸進行造模，大鼠很快出現(xiàn)腎陽虛。肖誠等［17］通過切除大鼠性腺進行造模，手術(shù)28 d后，腎陽虛模型建立成功。

1.3.2 甲狀腺切除造模 是指切除大鼠的甲狀腺，干擾甲狀腺的分泌，導(dǎo)致HPT軸的功能紊亂，因此建立腎陽虛模型。盧德趙等［18］切除大鼠雙側(cè)甲狀腺，術(shù)后正常飼養(yǎng)，7 d后出現(xiàn)畏寒肢冷、活動減少、體重減少及大便糖稀等陽虛癥狀，造模成功。

1.3.3 腎上腺切除造模 指切除大鼠腎上腺，此種手術(shù)方法較復(fù)雜，對實驗技術(shù)的掌握要求更高，腎上腺的摘除會直接影響HPA軸，導(dǎo)致全身興奮度下降，而體現(xiàn)出典型的腎陽虛癥狀。陳小野等［19］通過把大鼠腎上腺切除，術(shù)后5周對大鼠相關(guān)器官的病理情況進行觀察，發(fā)現(xiàn)相關(guān)器官損傷嚴重，且出現(xiàn)類似腎陽虛證型的癥狀。

手術(shù)造模主要就是以上幾種，同時腎切除加阿霉素造模也有學(xué)者使用過［20］，目前還處于探索階段，具體效果還需進一步深入研究。手術(shù)造模應(yīng)用也較廣泛，造模效果最為明顯，程度最深，但造模過程較復(fù)雜，需要一定的實驗技術(shù)，而且對實驗動物比較浪費。

2 評價標準

2.1 中醫(yī)辨證標準 指根據(jù)中醫(yī)診斷學(xué)理論中對患者腎陽虛證型的診斷標準，直接運用到造模動物上，典型的癥狀體征有畏寒肢冷、體溫下降、體重減輕、抱團蜷縮、毛發(fā)稀疏、大便稀溏及小便清長等［21］。這種評價標準對于動物來說不好觀察，容易產(chǎn)生偏差，可行性不高。

2.2 生化指標評價標準 應(yīng)用廣泛的生化指標主要有兩種，環(huán)磷酸腺苷（cAMP）和環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）的含量以及兩者的比值的變化常常作為特異性標準［22］，腎陽虛時血清中cAMP含量降低，而cGMP的含量升高，從而兩者的比值隨之降低。另外睪酮（T）與雌二醇（E2）的含量及其比值的變化也可以作為客觀標準［23］，這幾個指標的變化主要與造模動物的雌雄有關(guān)，雌性動物的腎陽虛血清中T含量升高，E2含量降低，T/E2隨之增大，雄性動物中T含量降低，E2含量升高，T/E2隨之減小。其他的指標如腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（corticotropin releasing hormone，CRH）、促腎上腺激素（adrenocorticotropic hormone，ACTH）和皮質(zhì)醇（cortisol，CORT）、三碘甲狀腺原氨酸（thyroxine，T3）及四碘甲狀腺原氨酸（thyroxine，T4）含量的降低也作為腎陽虛的客觀指標［24］，這些都是用來檢測下丘腦－垂體－靶腺軸功能的指標［25-27］，通過指標來反應(yīng)該軸功能的紊亂，剛好與造模原理相呼應(yīng)。

3 討論

腎陽虛本僅屬于中醫(yī)疾病中的一個證型，隨著科研和臨床對于腎陽虛的深入探究，慢慢的腎陽虛已經(jīng)和現(xiàn)代實驗方法結(jié)合了，已經(jīng)形成了具有科學(xué)意義的造模方法和評價標準，廣泛被科研人員所采用。其中造模動物的選擇一般是大鼠，飼養(yǎng)簡單，成本較低；造模方法最常用的就是氫化可的松肌注造模，效果明顯，時間較短而操作簡單，其次就是腺嘌呤喂養(yǎng)造模；造模的機理主要是導(dǎo)致下丘腦－垂體－靶腺軸功能的紊亂，進而導(dǎo)致激素水平的降低表現(xiàn)出近似腎陽虛的癥狀，方法多種需根據(jù)自身具體情況而選擇，挑選出最符合自身實驗技術(shù)水平及實驗要求的造模方法；而評價標準相對較統(tǒng)一且固定，主要就是cAMP、cGMP、T及E2等幾個指標的變化，比較公認的標準。

總之，目前造模方法種類雖多，但造模的效果多僅僅只是停留部分器官，依然不能滿足整體性的需要，還需深入探究，或許結(jié)合多種方法的造模方法可以達到更好的效果；另外評價標準依然沒有一個客觀量化的標準，說服力不強，中醫(yī)腎陽虛證型的辨證依據(jù)的癥狀體征對于動物來說可行性不高，建立一個完整的體系需要臨床和科研人員的不斷努力。