離子色譜法測定特殊醫學用途配方食品中肌醇

毛 璉，張 斌，王清波，郭美娟，王利平，張蘭天,*，史國華,*

（1.河北省食品檢驗研究院，河北省食品安全重點實驗室，河北 石家莊 050200；2.瑞士萬通中國有限公司，北京 100080）

特殊醫學用途配方食品是我國的一類特殊食品，是指為滿足進食受限、消化吸收障礙、代謝紊亂或特定疾病狀態人群對營養素或膳食的特殊需要，專門加工配制而成的配方食品，包括適用于0～12 月齡嬰兒的特殊醫學用途嬰兒配方食品和適用于1 歲以上人群的特殊醫學用途配方食品，該類產品需在醫生或臨床營養師指導下使用。特殊醫學用途配方食品依據產品標準[1-2]可以添加多種營養成分，其中包括肌醇，依據相關國家標準[1-2]規定，肌醇在特殊醫學用途配方食品中的添加量應為1.0～9.5 mg/100 kJ。肌醇又名肌糖、環己六醇，為B族維生素的一種[3]，外觀為白色或類白色結晶性粉末，無臭、味甜，易溶于水[4]，是合成許多生物分子，如肌醇磷脂、膜磷脂、鞘磷脂的前體，也是人體不可缺少的營養成分之一[5]。

目前食品中肌醇的測定方法主要有氣相色譜法[6-9]、氣相色譜-質譜法[10-11]、微生物法[12-13]、液相色譜法[14]、液相色譜-質譜法[15-17]、離子色譜法[18-19]等。但是特殊醫學用途配方食品中肌醇的檢測方法研究較少，國內文獻鮮有報道。本研究建立離子色譜法檢測特殊醫學用途配方食品中肌醇的方法，對于肌醇檢測方法的完善具有一定意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

市場采購17 種特殊醫學用途配方食品，包括乳蛋白部分水解配方（樣品編號1、2、3、4）、乳蛋白深度水解配方（樣品編號5、6、7）、氨基酸配方（樣品編號8、9）、全營養配方（樣品編號10、11）、早產/低出生體質量嬰兒配方乳粉（樣品編號12、13、14）、早產/低出生體質量嬰兒配方液態乳（樣品編號15）、無乳糖配方（樣品編號16、17）等不同基質。

質控樣品：嬰兒配方乳粉QC-IP-707，肌醇含量參考值為131.1 mg/100 g，肌醇含量參考值范圍為110.2～152.0 mg/100 g。

超純水（電阻率＞18.2 MΩ·cm） 實驗室自制；乙酸鈉、氫氧化鈉（色譜純） 德國Merck公司；鹽酸（優級純） 天津市光復精細化工研究所；標準品：肌醇（純度≥99%） 北京曼哈格生物科技有限公司。

1.2 儀器與設備

930離子色譜儀（配安培檢測器，金工作電極）、Metrosep Carb 2-150/4.0分離柱 瑞士萬通中國有限公司；Quintix124-1CN萬分之一電子天平 北京賽多利斯公司；PHS-3C pH計 上海儀電科學儀器股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 標準溶液配制

準確稱取0.050 0 g肌醇標準品，在（105±1） ℃烘干2 h，用超純水溶解后轉移到50 mL容量瓶中并定容，配制成肌醇質量濃度為1 000 mg/L的標準儲備液。將儲備液用超純水逐級稀釋，配制質量濃度分別為0.000、0.025、0.050、0.100、0.250、0.500、1.000、2.000、5.000、10.000、20.000、40.000 mg/L的標準使用液，現用現配。

1.3.2 樣品前處理

準確稱取31.25 g樣品，用超純水溶解并定容至250 mL容量瓶中，搖勻。移取8 mL樣品溶液于100 mL容量瓶中，加超純水2 mL，用體積分數0.5%鹽酸調節溶液pH值為4.5±0.2，靜置至少2 min，用超純水稀釋至刻度，混勻。用定性濾紙過濾，棄去最初10 mL濾液，取后續濾液用0.22 μm針式過濾器過濾至自動進樣器樣品瓶中進行測定。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：Metrosep Carb 2-150/4.0mm分離柱或同等性能的色譜柱；淋洗液：100 mmol/L NaOH＋10 mmol/L CH3COONa（體積比1∶1），流速0.5 mL/min；進樣量20 μL；柱溫30 ℃；運行時間45 min；檢測器溫度35 ℃；檢測器時間程序為300 ms、0.05 V，50 ms、0.55 V，200 ms、－0.1 V。

1.3.4 肌醇含量的計算

肌醇含量按下式計算。

式中：X1為由標準曲線查得的測試液中肌醇含量/（mg/L）；31.25為稱樣量/g；250為樣品定容體積/mL；8為移取的樣品測試液體積/mL；100為移取的樣品測試液定容體積/mL；10和10 000均為單位換算系數。

2 結果與分析

2.1 線性范圍、檢出限和定量限

繪制肌醇含量-峰面積標準曲線，得出回歸方程及相關系數。結果顯示，在0.025～40.000 mg/L范圍內，肌醇含量與峰面積呈良好的線性關系，線性方程為y=141.4x－2.8（R2=0.999 9）。

配制一定質量濃度的肌醇標準溶液逐級稀釋，其中質量濃度0.012 5 mg/L的肌醇溶液測試結果滿足測定10 個樣品時檢出率為50%的要求，根據1.3.4節公式得出該方法檢出限為0.125 mg/100 g。定量限一般為3～5 倍檢出限，即為0.5 mg/100 g。

2.2 準確度實驗

將質控樣品按照所建立的方法測定肌醇含量，計算平均值與參考值的偏差。由表1可知，該質控樣品的測定值與參考值的偏差為3.5%，滿足GB/T 27404—2008《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》[20]中對準確度的要求。

表1 質控樣品的準確度實驗結果（n=3）Table 1 Accuracy of ion chromatography for quality control sample (n = 3)

2.3 精密度實驗

將17 種樣品按照所建立的方法測定肌醇含量，計算相對標準偏差。由表2可知，不同基質、不同肌醇含量的特殊醫學用途配方食品肌醇含量測定結果的相對標準偏差均滿足GB/T 27404—2008[20]要求（＜5%），說明本方法的測定重復性滿足實驗要求。

表2 肌醇的精密度實驗結果（n=6）Table 2 Precision of ion chromatography for inositol determination (n = 6)

2.4 加標回收率實驗

取8 mL、4 種基質類型（樣品編號見表3）樣品溶液，進行加標回收率實驗，參考GB/T 27404—2008[20]中的要求并結合樣品肌醇的本底值確定加標水平（分別做3 次平行），驗證方法在不同特殊醫學用途配方食品基質中的回收率。

表3 肌醇的加標回收率實驗結果（n=3）Table 3 Spiked recovery of inositol (n = 3)

續表3

由表3可知，不同基質樣品離子色譜法測得的回收率為83.1%～102.9%。除樣品8外，其他3 個樣品不是所有加標量的回收率均滿足GB/T 27404—2008[20]中的要求（95%～105%），說明不同樣品基質的方法適用性可能存在差異。

3 結 論

采用離子色譜法測定不同基質特殊醫學用途配方食品中游離肌醇含量，建立特殊醫學用途配方食品中肌醇的定量分析方法，方法的精密度、準確度、加標回收率、曲線的線性范圍等均符合分析要求，且操作過程簡單、快速、分析時間短、可行性好，適用于特殊醫學用途配方食品中游離肌醇含量的測定。