禽腺病毒血清4型Fiber-2蛋白在大腸桿菌中可溶性表達及其免疫原性分析

耿笑林，王孟月，張翼，劉鵬，李可樂，杜東穎，逄文強，黃玉欣*，田克恭*

(1. 國家獸用藥品工程技術研究中心，河南 洛陽 471003；2. 普萊柯生物工程股份有限公司，河南 洛陽 471003)

雞肝炎-心包積液綜合征 (hepatitis-hydropericardium syndrome，HHS)是由禽腺病毒血清4型 (fowl adenovirus serotype 4，FAdV-4)引起的一種高度傳染性疾病，該病于1987年在巴基斯坦的安卡拉地區首次暴發，隨后在亞洲、歐洲和南美洲等地區流行[1-4]。2015年7月起，由FAdV-4中國流行株引起的HHS在我國山東、河南、安徽和江蘇等省份大面積流行[5]，死亡率最高可達80%以上，因為缺乏有效的疫苗進行針對性預防，給我國養禽業帶來嚴重的經濟損失。因此，FAdV-4的疫苗研制對防控該病尤為重要。

FAdV-4具有兩條纖突，一條長纖突(Fiber-1)和一條短纖突(Fiber-2)，其中Fiber-2蛋白主要是通過識別宿主細胞上的特異受體而使病毒吸附結合在宿主細胞上，對病毒增殖、組裝或擴散的某個階段是必需的，缺失Fiber-2則不能產生病毒粒子[6]，因此Fiber-2是疫苗研制的潛在抗原蛋白之一。

大腸桿菌由于其生長迅速，容易達到高細胞密度和低成本培養基的優勢[7]，無論在實驗室還是在工業規模上，成為許多重組蛋白(包括Fiber-2蛋白)的首選表達系統。然而，由于缺乏先進的翻譯后修飾和真核伴侶蛋白，外源蛋白易聚集以包涵體形態產生[8]。生物系統中存在的各種小分子可以在體外協助蛋白質折疊，以改善蛋白質在多種情況下的錯誤折疊和聚集，被稱為化學伴侶[9]。蛋白質折疊與伴侶蛋白介導的突變緩沖有關，一些化學物質如鹽、糖、氨基酸和多聚物被用來提高外源蛋白的可溶性表達[10]。……