高密度懸浮轉染方式高效獲得重組桿狀病毒

尹坤，王同燕，宋歡歡，白露露，李勝強，譚菲菲，田克恭,3*

(1. 國家獸用藥品工程技術研究中心，河南 洛陽 471003；2. 普萊柯生物工程股份有限公司，河南 洛陽 471003；3. 洛陽普泰生物技術有限公司，河南 洛陽 471003)

桿狀病毒表達載體系統(tǒng)(Baculovirus expression vector system, BEVS)是近年來被廣泛用于高效表達外源蛋白的載體系統(tǒng)，為重組蛋白單體、多聚體蛋白復合物、病毒樣顆粒、膜蛋白以及對哺乳動物細胞有毒的蛋白提供了通用的表達平臺，廣泛應用于醫(yī)學、農(nóng)學和獸醫(yī)學等各個領域[1]。相對于原核、酵母和CHO等表達系統(tǒng)，BEVS具有一定優(yōu)勢：桿狀病毒專一寄生于無脊椎動物，安全性高；可對重組蛋白進行正確折疊和翻譯后修飾，獲得具有生物活性的蛋白；適應于多基因表達如病毒樣顆粒 (virus-like particle) 的復雜設計；適用于大規(guī)模無血清培養(yǎng)等[2-6]。在實際生產(chǎn)過程中，貼壁轉染獲得的P0代重組病毒滴度低，需要進一步病毒擴繁來獲得高滴度的重組病毒，但由于重組桿狀病毒在傳代過程中基因組存在不穩(wěn)定性，在重組病毒擴繁中會導致目的基因片段的丟失，成為重組桿狀病毒產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)化過程中的限制因素之一[7-8]。將傳統(tǒng)貼壁轉染方式獲得的P0代重組病毒傳代放大，使重組病毒滴度與外源蛋白表達均達到最優(yōu)，此過程需要12～20 d傳代周期[9]。

本研究利用ExpiFectamineTMSf Transfection Reagent和ExpiSf9對重組Bacmid進行高密度懸浮轉染，可在6～10 d內獲得足量、高病毒滴度和高表達量的低代次重組桿狀病毒，為利用重組桿狀病毒表達外源蛋白的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供了一條可行的路徑。……