名醫(yī)夏惠明教授平推法干預(yù)慢性腰肌損傷兔模型的研究

楊麗秋 夏惠明 龍?chǎng)? 汪昂 岳陽(yáng) 楊宇 楊陽(yáng) 楊永蘭

摘要：目的 明確夏教授辨證運(yùn)用平推法作用于慢性腰肌損傷的兔動(dòng)物模型后，柔和及滲透是手法的重要因素，為臨床推廣夏教授平推法的辨證學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)打下基礎(chǔ)。方法 取日本大耳白兔70只，隨機(jī)分為不用手法對(duì)照組、作用時(shí)間長(zhǎng)手法組、作用時(shí)間短手法組、頻率快手法組、頻率慢手法組、手下有壓力組、手下無(wú)壓力組，每組10只，采用人工固定家兔加桑枝擊打腰部肌肉造模，經(jīng)過(guò)周期治療對(duì)比，測(cè)定兔血清中免疫功能、血液流變學(xué)，處死后腰肌病理切片，觀察鏡下肌肉組織的變化，后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 有壓力且作用時(shí)間長(zhǎng)的平推法能提高慢性腰肌損傷的免疫力水平（P<0.05）;其余平推法組無(wú)顯著性差異（P>0.05）。結(jié)論 夏惠明教授平推法能提高慢性腰肌損傷的免疫力水平，改善血流變學(xué)，在治療慢性腰肌損傷手法的選擇有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

關(guān)鍵詞：慢性腰肌損傷;推拿療法;免疫功能

中圖分類號(hào)：R244.1?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B?? 文章編號(hào)：1007-2349（2021）07-0076-04

Research on Professor Xia Huiming's Flat Push Method on Intervention of theRabbit Model of Chronic Lumbar Muscle Injury

YANG Li-qiu， XIA Hui-ming， LONG Xin， WANG Ang， YUE Yang， YANG Yu， YANG Yang， YANG Yong-lan

（Yunnan Hospital of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650021， China）

【Abstract】Objective： To make sure that the softness and penetration were important factors of the method after Professor Xia Huiming's flat push method was used to treat the rabbit animal model of chronic lumbar muscle injury and to lay a foundation for the clinical application of Professor Xia's dialectical academic experience of the method. Methods： 70 Japanese white rabbits were randomly divided into non-manipulation control group， long-acting time manipulation group， short-acting time manipulation group， fast frequency manipulation group， slow frequency manipulation group， pressure group and no pressure group， 10 rabbits each group. The artificially fixed rabbits and mulberry sticks were used to hit the waist muscles to create a model. After periodic treatment and comparison， the immune function and hemorheology in the rabbit serum were measured. The rats were sacrificed to make the pathological sections of the psoas muscles and the muscle tissues changes were observed under the microscope and then the statistical analysis was made. Results： The flat push method with pressure and long acting time can raise the immunity level of chronic psoas muscle injury （P<0.05）. There is no significant difference in the other flat push groups （P>0.05）. Conclusion： Professor Xia Huiming's flat push method can raise the immunity level of chronic psoas muscle injury and improve blood rheology and has higher clinical application value in the choice of treatment for chronic psoas muscle injury.

【Key words】Chronic Psoas Muscle Injury; Massage Therapy; Immune Function

慢性腰肌損傷是臨床見疾病，是由于經(jīng)常的反復(fù)的積累性輕微損傷（勞損）可引起肌肉附著點(diǎn)、骨膜、韌帶等組織的充血，水腫滲液纖維組織增生和粘連等病理改變刺激和壓迫神經(jīng)末稍導(dǎo)致腰部的慢性疾病。在臨床中證實(shí)，推拿治療慢性腰肌損傷療效明確有效，它是作為首選的治療方案。本研究慢性腰肌損傷的兔動(dòng)物模型，改良軟組織損傷兔模型（參照kami，周忠群等機(jī)械沖擊挫傷的造模方法用重錘整體打擊重量為2.9 kg，重復(fù)擊打目標(biāo)骨骼肌，造成目標(biāo)肌急性鈍挫傷）[1-2]以桑枝擊打腰部肌肉造模慢性腰肌損傷模型兔，經(jīng)過(guò)周期治療后，以IgA、IgM、IgE、C反應(yīng)蛋白、腰肌病理切片為檢測(cè)指標(biāo)，明確夏教授辨證運(yùn)用平推法作用于慢性腰肌損傷的兔動(dòng)物模型后，柔和及滲透是手法的重要因素，從分子水平探討平推法治療慢性腰肌損傷的作用機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康成年白兔70只，體重（2.2±0.3）kg，雌雄不限，重量分布均一（由動(dòng)物云南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），動(dòng)物實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)環(huán)境：室溫，自然光照，自由飲水，喂養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)飼料料（云南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 4%多聚甲醛固定液;伊紅染色液;中性樹膠檢測(cè)試劑盒（索萊寶公司，生產(chǎn)編號(hào)：P1110，G1105，G8590）。檸檬酸鹽緩沖液（中杉金橋，生產(chǎn)編號(hào)：ZLI-9065）。IgA、IgM、IgE、C反應(yīng)蛋白ELISA試劑盒（江蘇酶標(biāo)生物科技有限公司，生產(chǎn)編號(hào)：MB-3935B，MB-3939B，MB-3938B，MB-3837B）。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組與造模 改良慢性腰肌損傷白兔模型，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為7組，分別為不用手法對(duì)照組、作用時(shí)間長(zhǎng)手法組、作用時(shí)間短手法組、頻率快手法組、頻率慢手法組、手下有壓力組、手下無(wú)壓力組每組10只兔。

1.4 造模方法 按照以上分組將白兔稱重編號(hào)后，用3%的戊巴比妥鈉1 ml/kg靜脈注射麻醉。白兔俯臥位。背腰部剃毛，人工固定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，將其脊柱置于平臺(tái)上，桑枝擊打腰部肌內(nèi)。作用于脊柱兩側(cè)50次，開放環(huán)境下飼養(yǎng)，15 d后形成慢性牧組織損傷模型。標(biāo)準(zhǔn)見參考文獻(xiàn)[2]進(jìn)行造模并取材，病理切片：肉眼觀組織無(wú)腫脹，有少量淤血消失和少量炎性滲出，病理學(xué)提示肌纖維斷裂，存在纖維增生，證明肌肉組織有損傷，并且進(jìn)入了慢性瘢痕增生修復(fù)期，說(shuō)明造模成功。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法 作用時(shí)間長(zhǎng)手法組：平推法操作15 min;作用時(shí)間短手法組：平推法操作5 min;頻率快手法組：操作頻率300次/min，操作10 min;頻率慢手法組：操作頻率100次/min，操作10 min;手下有壓力組：操作時(shí)壓住皮下有凹陷用力推，操作10 min;手下無(wú)壓力組：操作時(shí)手輕放皮上輕推，操作10 min。6組均為每天操作1次，手法維作周期10 d。對(duì)照組治療方法：不做手法治療，僅給飼料正常喂養(yǎng)。

1.6 取材和指標(biāo)檢測(cè) 血清采集：采空腹靜脈血6 mL注入含EDTA二鈉采血管中，4℃混勻，3000 r/min，離心10 min，分離血漿，分裝于2～3個(gè)試管，-2℃保存，測(cè)定前將樣本置于室溫中復(fù)融，再次4C3000 r/ min，離心5 min，取上清測(cè)定。用 1 ∶125 單位抗凝。取肝素抗凝的全血 0.8 mL于全自動(dòng)血液流變儀上測(cè)定全血黏度的高切、中切、低切值，紅細(xì)胞壓積。將剩余的全血離心（2500 rpm 離心 10 min，離心分離血清及血漿，-20℃保存?zhèn)溆茫?0.8mL 血漿于全自動(dòng)血液流變儀上測(cè)定血漿黏度;ELISA檢測(cè)IgA、IgM、IgE、C反應(yīng)蛋白相關(guān)指標(biāo)的蛋白表達(dá)情況，試劑盒按照說(shuō)明書操作進(jìn)行檢測(cè);病理制作取材：將各實(shí)驗(yàn)組白兔分別在治療后 10 d采用空氣栓塞法處死動(dòng)物，無(wú)菌操作下解剖分離腰部肌肉組織，肉眼觀察肌肉形態(tài)，生理鹽水清洗后立即投入冷凍的固定液中，4 ℃固定12～24 h后;在0.2 mol磷酸緩沖液中充分漂洗，經(jīng)常規(guī)的脫水、透明、浸蠟、包埋、連續(xù)切片、貼片、烤片后，HE染色石蠟切片，蘇木精-伊紅染色，顯微鏡下觀察病理變化。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用卡方檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果中的數(shù)值表示以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ELISA檢測(cè)結(jié)果 見表1。

2.2 病理組織結(jié)果 經(jīng)HE染色后，鏡下可見正常組：可見肌纖維排列緊密、規(guī)律，肌纖維膜中肌細(xì)胞核相對(duì)均勻排列，肌膜較完整，無(wú)壞死、出血及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。不用手法對(duì)照組：可見肌纖維大量斷裂，間寬，萎縮，肌細(xì)胞形狀、大小不規(guī)則，損傷部位出現(xiàn)新生肌纖維且直徑小，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，可見新生毛細(xì)血管。作用時(shí)間長(zhǎng)手法組：可見肌纖維排列紊亂，斷裂，間隙增寬，新生毛細(xì)血管，部分炎細(xì)胞浸潤(rùn)。作用時(shí)間短手法組：可見肌纖維部分?jǐn)嗔眩帕胁灰?guī)則，少量纖維組織增生。頻率快手法組：可見新生毛細(xì)血管、肌纖維，部分?jǐn)嗔鸭把准?xì)胞。頻率慢手法組：可見鈣化及少量出血，肌纖維間隔增寬、斷裂，肌纖維及毛細(xì)血管增生，炎細(xì)胞。手下有壓力組：可見肌纖維斷裂，排列不規(guī)則，炎細(xì)胞浸潤(rùn)。手下無(wú)壓力組：可見肌纖維斷裂，間隔增寬，出血及毛細(xì)血管新生，炎細(xì)胞浸潤(rùn)。見圖1。

2.3 血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果 見表2。

3 討論

慢性腰肌勞屬于中醫(yī)“痹癥”“腰痛”“筋傷”等范疇。《素問(wèn)·宣明五氣篇》說(shuō)：“久視傷血，久臥傷氣，久坐傷肉，久立傷骨，久行傷筋，是謂五勞所傷。”說(shuō)明勞逸失常，會(huì)導(dǎo)致肉筋骨的損傷。腰部經(jīng)常的反復(fù)的積累性輕微損傷（勞損），使腰部肉筋骨損傷，日久形成慢性腰肌勞損。《醫(yī)宗金鑒·正骨心法要旨》中說(shuō)：“因跌撲閃失……氣血郁滯，為腫為痛，宜用按摩法。按其經(jīng)絡(luò)，以通郁閉之氣，摩其壅聚，以散瘀結(jié)之腫，其患可愈。”說(shuō)明推拿具有舒經(jīng)通絡(luò)，散瘀止痛，可治療慢性腰肌勞損。

手法基本要求有五點(diǎn)，持久、有力、均勻、柔和，以達(dá)到深透的目的，夏教授特別強(qiáng)調(diào)手法的柔和性，柔和、深透是推拿手法治病的關(guān)鍵。夏教授認(rèn)為柔和是指輕巧之力，并不是指力量弱，通過(guò)均勻有節(jié)律之操作，將手法技巧與力量完美結(jié)合，體現(xiàn)“輕而不浮，重而不滯”的道理，最終達(dá)到深透的目的，“柔中帶剛，剛?cè)嵯酀?jì)”直達(dá)病所。夏老師的平推法很講究，操作者腕關(guān)節(jié)，肘關(guān)節(jié)，肩關(guān)節(jié)都應(yīng)該放松，用身體腰部發(fā)力，并不是操作者于患者體表直接施于壓力，壓力不等同于滲透力，如果故意增加壓力，關(guān)節(jié)就都不會(huì)放松，作用力集中于表皮，那么滲透力就很小了。在《素問(wèn)·調(diào)經(jīng)論》中說(shuō)：“血?dú)庹撸矞囟鴲汉畡t泣而不能流，溫則消而去之。”夏老師認(rèn)為平推法的熱量滲透，順應(yīng)血?dú)獾奶匦裕苁箽庋獜?fù)歸于平衡從而達(dá)到治病目的。平推法是夏教授的特色手法，體現(xiàn)了夏教授手法的學(xué)術(shù)思想。平推法關(guān)鍵在于熱量的滲透，而滲透與否，主要在于施術(shù)者腕關(guān)節(jié)及上臂的放松操作[3]。

在本研究中手法治療后，發(fā)現(xiàn)作用時(shí)間長(zhǎng)對(duì)C-反應(yīng)蛋白明顯變化，病理切片提示有新生毛細(xì)血管，促進(jìn)肌肉修復(fù)，有壓力治療組對(duì)IgA及C-反應(yīng)蛋白有明顯變化，無(wú)壓力更有助于肌肉修復(fù)，說(shuō)明柔和深透是平推法產(chǎn)生療效的重要因素;而頻率的快慢在治療中對(duì)免疫功能無(wú)明顯差異;手法治療均對(duì)血流變都有明顯改善，作用時(shí)間長(zhǎng)短無(wú)明顯區(qū)別;頻率快可更快改變血流變學(xué)。進(jìn)一步說(shuō)明夏教授的平推法對(duì)慢性腰肌勞損有治療作用，為臨床推廣運(yùn)用夏惠明教授平推法提供了客觀的依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]Kami K，Masuhara M，Kashiba H，et a1.Changes of vinculin and extracellular matrix components following blunt trauma to rat skeletal muscle[J].Med Sci Spots Exerc，1993，25（4）：832-840.

[2]周忠群，盧振和，高崇榮.射頻熱凝治療兔慢性軟組織損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)疼痛醫(yī)學(xué)雜志.2008，14（5）：298-301.

[3]楊麗秋.夏惠明老師關(guān)于腰椎側(cè)彎調(diào)整三步法的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)[J].云南中醫(yī)中藥雜志.2013，9（34）：7-8.

（收稿日期：2021-03-20）

基金項(xiàng)目：云南省內(nèi)設(shè)廳級(jí)項(xiàng)目（2017NS147）

第一作者簡(jiǎn)介：楊麗秋（1976-），女，副主任醫(yī)師，研究方向：中醫(yī)推拿。