激光多普勒血流儀評價鹿茸對于動脈硬化大鼠的影響

李子娟 韓杰 王雁彬 李廷荃

摘要：目的 利用激光多普勒血流儀評價鹿茸對于動脈硬化大鼠的療效。方法 肢體缺血手術、高脂飼料喂養制作大鼠下肢動脈硬化閉塞癥模型。分別在給藥后0、7、14、28d對各組大鼠進行多普勒檢測，觀察各時期大鼠血流灌注恢復程度;同時進行體溫的監測。結果 各給藥組各時期下肢溫度及LDPI指數均有不同程度的升高（P<0.05），差異均有統計學意義，其中同時期對比鹿茸高劑量組升高最為顯著，其次為鹿茸中劑量組，再次為鹿茸低劑量組，其之間差異有統計學意義（P<0.05）。結論 根據激光多普勒血流儀顯示鹿茸促進了動脈硬化大鼠的血流恢復，且與給藥濃度具有一定相關性。

關鍵詞：激光多普勒;動脈硬化;鹿茸;血流恢復

中圖分類號：R285?? 文獻標志碼：A?? 文章編號：1007-2349（2021）07-0072-04

Evaluation of the Effect of Velvet Antler on Arteriosclerosis Ratsby Laser Doppler Blood Flow Meter

LI Zi-juan1， HAN Jie1， WANG Yan-bin2， LI Ting-quan2

（1. Shanxi University of Traditional Chinese Medicine， Taiyuan 030024， China;2. The Affiliated Hospital of Shanxi University of Traditional Chinese Medicine， Taiyuan 030024， China）

【Abstract】Objective： To evaluate the curative effect of velvet antler on arteriosclerosis rats by using laser Doppler blood flow meter. Methods： Limb ischemia surgery and high-fat feed were used to make a rat model of lower extremity arteriosclerosis obliterans. Doppler detection was performed on the rats in each group at the 0， 7th， 14th and 28th day after the administration to observe the recovery degree of the blood perfusion of the rats in each period and at the same time， the body temperature was monitored. Results： The lower extremity temperature and LDPI index increased to different degrees in each period of each administration group （P<0.05）， and the differences were statistically significant. The increase was the most significant in the high-dose velvet antler group during the same period， followed by the middle-dose velvet antler group and again by the low-dose velvet antler group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion： According to the display of the laser Doppler blood flow meter， the velvet antler can promote the recovery of blood flow in arteriosclerotic rats， and is related to the concentration of administration.

【Key words】Laser Doppler; Arteriosclerosis; Velvet Antler; Blood Flow Recovery

動脈硬化性閉塞癥（arteriosclerosis obliterans，ASO）是指由于動脈硬化造成的內膜增厚、管腔狹窄或閉塞，導致相應區域供血不足的一系列疾病。表現在下肢則為下肢動脈硬化閉塞癥（arteriosclerosis obliterans of the lower extremities，ASOLE），臨床癥狀有下肢皮溫降低、間歇性跛行、疼痛，易引起肢體末端壞疽，甚至有截肢死亡的風險[1-2]。據統計，75 歲以上人群中ASO的發病率高達15%～20%，普通人群發病率為3%～10%，以老年男性患者居多，給患者帶來極大痛苦的，也給家庭及社會帶來巨大負擔[3]。隨著中醫藥事業的發展，中醫中藥在對本病的治療上取得的顯著成效，許多研究前期表明，激光多普勒技術能較為客觀的反應藥物對于動脈硬化的療效[4]，遂本項目則用激光多普勒技術結合對大鼠下肢溫度的監測來初步評價鹿茸對于動脈硬化大鼠的療效。

1 材料

1.1 動物 SPF級雄性SD大鼠36只，2月齡，體重250～300 g，由山西省中醫藥研究院提供，實驗動物質量合格證號：1103221911003889。

1.2 飼料制備 高脂飼料（80.3%基礎飼料、15%豬油、0.5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、4%膽固醇）

1.3 藥物與試劑 鹿茸采用馬鹿茸，購自北京同仁堂（集團）有限責任公司，用普通粉碎機粗粉后再用氣流超微粉碎機制成微粉（粒徑小于10μm），溫水調，攪拌均勻，即用即配。維生素D3針劑（哈爾濱摩天農科獸藥有限責任公司）。

1.4 主要儀器 電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司 CPA）;多普勒（HADECO公司 日本 ES-100V3）;離心機（Beckman Coulter公司 美國 Microfuge 20R）。

2 方法

2.1 分組 采用隨機數字表法分為6組：正常組、模型組、假手術組、鹿茸低劑量組、鹿茸中劑量組、鹿茸高劑量組，每組6只。

2.2 下肢動脈硬化閉塞癥模型制作 （1）將SPF級SD雄性大鼠以5%水合氯醛溶液（7mL/kg）腹腔麻醉，隨后取平臥位，固定于手術臺，左側腹股溝備皮。（2）碘伏消毒左側腹股溝區域后，于此處行一長約1.5cm縱切口，暴露血管鞘，分離股動脈及其分支，齒鑷沿股動脈走形鉗夾約30s，分別結扎并離斷左側股動脈的分支。（3）用0號線縫合皮下組織及皮膚，背部皮下注射生理鹽水10mL補液抗休克治療，觀察大鼠各項生命體征平穩后放回鼠籠。（4）給予30萬單位青霉素肌肉注射3天，以預防感染。（5）高脂飼料喂養12周;⑥予維生素D3（30萬u/kg）右下肢肌肉注射，1個月1次。

2.3 給藥方法 鹿茸低、中、高計量組灌胃給藥（0.143 g·kg-1·d-1、 0.286 g·kg-1·d-1、0.572 g·kg-1·d-1）。LY294002 組腹腔注射（1 mg·kg-1·d-1）;正常組、模型組及假手術組給予等容量蒸餾水。

2.4 檢測指標

2.4.1 一般狀態 觀察大鼠一般狀態，包括精神狀態，毛色，活動靈敏度等。

2.4.2 下肢溫度 分別在用藥0、7、14、28 d監測大鼠下肢溫度。

2.4.3 下肢血流灌注恢復程度 用藥0、7、14、28 d，以5%水合氯醛溶液（7 mL/kg）對實驗大鼠行腹腔麻醉，用激光多普勒血流儀測定下肢血流灌注。操作時探頭盡量與下肢皮膚貼合，施力方向盡量與皮膚垂直，被檢測的下肢皮膚組織受壓應盡量保持著力均勻。LDPI 指數（LDPI index）=缺血下肢血流/未缺血下肢血流。

2.5 統計學方法 用SPSS 25.0進行統計學分析，數據用（x±s）表示。2組間比較采用獨立樣本t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 各組大鼠一般狀態 空白組、假手術組大鼠精神良好，毛色光澤，活動靈敏;模型組、給藥組大鼠在最初1個月增長迅速，后增長速度減緩，其精神萎靡，活動欠靈敏，毛色暗淡。

3.2 鹿茸干預下各時期各組大鼠下肢溫度 見表1。縱向相比，給藥0d時模型組及各給藥組之間溫度無明顯差異（P>0.05），均顯著低于空白組及假手術組（P<0.05）;給藥7d時，給藥組溫度均有所上升，顯著高于模型組（P<0.05），顯著低于空白組及假手術組（P<0.05），其中鹿茸高劑量組上升最多，其次為鹿茸中劑量組，再次為鹿茸低劑量組，之間均有顯著差異（P<0.05）;給藥14d時，給藥組溫度較7d有所上升，顯著高于模型組（P<0.05），顯著低于空白組及假手術組（P<0.05），其中仍為鹿茸高劑量組上升最多，其次為鹿茸中劑量組，再次為鹿茸低劑量組，之間均有顯著差異（P<0.05）;給藥28d時，給藥組溫度較14d有所上升，顯著高于模型組（P<0.05），鹿茸高劑量組與空白組及假手術組無顯著差異（P>0.05），鹿茸中劑量組與鹿茸低劑量組仍顯著低于空白組及假手術組（P<0.05），鹿茸低劑量組顯著低于鹿茸中劑量組（P<0.05）。見圖1，橫向相比，空白組、假手術組、模型組各時期均無明顯差異（P>0.05），而給藥組溫度在逐步上升，且鹿茸高劑量組上升最為明顯，28d時可達到空白組及假手術組水平，其次為鹿茸中劑量組，最后為鹿茸低劑量組。

3.3 鹿茸干預下各時期各組大鼠的下肢血流灌注恢復程度 見表2，橫向相比，給藥0d時，與空白組及假手術組相比，模型組及給藥組患側血流術后立即減少，LDPI指數達到最低值（P<0.05）;給藥7d時，給藥組LDPI指數均有升高，其中鹿茸高劑量組升高做多，其次為鹿茸中劑量組，再次為鹿茸低劑量組，之間均有顯著差異（P<0.05）;給藥14d時，各給藥組較7d時LDPI指數有所上升，鹿茸高劑量組仍上升最多，其次為鹿茸中劑量組，再次為鹿茸低劑量組，之間均有顯著差異（P<0.05）;給藥28d時，各給藥組較14d時LDPI指數有所上升，鹿茸高劑量組可基本與空白組及假手術組持平，之間無顯著差異（P>0.05），其次為鹿茸中劑量組，再次為鹿茸低劑量組，各給藥組之間存在顯著差異（P<0.05）。見圖2，橫向相比，空白組、假手術組、模型組各時期均無明顯差異（P>0.05），而給藥組溫度在逐步上升，且鹿茸高劑量組上升最為明顯，28d時可達到空白組及假手術組水平，其次為鹿茸中劑量組，最后為鹿茸低劑量組。

4 討論

動脈硬化閉塞癥（ASO）是由于血管動脈粥樣硬化斑塊的不斷擴大和繼發血栓引起動脈管腔狹窄甚至閉塞，出現患肢慢性或急性的缺血癥狀[5]。因此，改善缺血區域血流灌注促進血管新生就成為治療的重要步驟之一。鹿茸具有補腎、填精、益髓的功效，可促進血液的生成和運行，而鹿茸的主要成分鹿茸多肽對表皮細胞及成纖維細胞有顯著的促進增殖作用，可以加速瘡面愈合，促進血管內皮細胞的增殖分化及遷移，促進病變部位的血管生成[6]。

近年來，微循環檢測方法在下肢動脈硬化閉塞癥的應用越來越被推崇，其中激光多普勒血流測定是一種無損傷性的快速組織血流測量方法，其可以連續、實時檢測組織微循環粗流量[7]，其中前期數名學者應用LDPI指數來觀察動脈硬化閉塞的治療療效，發現LDPI值較治療前增加顯著，同時臨床評分顯著下降[8]，從而證實的療法的療效。因此，激光多普勒LDPI指數在判斷下肢動脈硬化閉塞癥中的血流灌注恢復程度中有很好的實用價值，目前已較為廣泛的應用于臨床中。

本研究中，各給藥組在給藥7、14、28d LDPI指數均有顯著上升，其中鹿茸高劑量組上升程度最為顯著，在給藥28d時基本可達空白組及假手術組水平;而鹿茸中劑量組上升對比鹿茸高劑量組效果稍遜色，在給藥同時期，鹿茸中劑量組的LDPI指數均顯著低于鹿茸高劑量組;鹿茸低劑量組上升程度對比鹿茸中劑量組亦顯遜色，在給藥同時期，鹿茸低劑量組的LDPI指數均顯著低于鹿茸中劑量組。同時，下肢動脈硬化閉塞癥其中一個臨床表現為下肢皮溫的降低，本實驗同時監測大鼠各時期各組下肢溫度得出各組各時期變化與LDPI指數變化水平基本一致，從而得出結論：鹿茸對于下肢動脈硬化閉塞癥大鼠療效顯著，且其療效水平與給藥濃度密切相關，鹿茸高劑量組的療效優于鹿茸中劑量組及鹿茸低劑量組的療效，但具體鹿茸對于下肢動脈硬化閉塞大鼠的作用具體機制還需實驗后期對于關鍵蛋白檢測來進行探討驗證。

參考文獻：

[1]Zhang K，Song W，Li D，et al.The Association between Polymorphism of CARD8 rs2043211 and Susceptibility to Arteriosclerosis Obliterans in Chinese Han Male Population[J].Cell Physiol Biochem，2017，41（1）：173-180.

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[3]王繼雪，楊稀瑞，呂勃川，等.四妙勇安湯通過JAK/STAT信號通路治療下肢動脈硬化閉塞癥的機制研究[J/OL].海南：醫學院學報，1-20[2020-12-16].https：//doi.org/10.13210/j.cnki.jhmu.20201027.004.

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[7]Duval A，Helley D，Capron L，et al.Endothelial dysfunction in systemic lupus patients with low disease activity：evaluation by quantification and characterization of circulating endothelial microparticles，role of anti-endothelial cell antibodies[J].Rheumatology，2010，49（6）：1049-1055.

[8]劉亮，李小鷹，趙秀梅，等.激光多普勒血流圖像儀檢測老年下肢動脈硬化閉塞癥的臨床療效[J].中華老年心腦血管病雜志，2003（6）：368-370.

（收稿日期：2021-04-19）

基金項目：國家自然科學基金項目（81874474）

第一作者簡介：李子娟（1996-），女，在讀研究生，研究方向：中醫藥防治心血管系統疾病的研究。

通信作者：李廷荃，E-mail：ltqnsfc@163.com