前胡提取方法比較

徐 廣，譚秋生，羅 敏，郭 瑀，楊 丹，鄧才富，楊永東，任星宇，傅 滟

(重慶市藥物種植研究所 中藥材生產(chǎn)質(zhì)量控制研究中心，重慶 408435)

前胡為傘形科植物白花前胡的干燥根，具有散風(fēng)清熱、降氣化痰的功效，常用于治療風(fēng)熱咳嗽、痰多、痰熱喘滿、咳痰黃稠等[1]。藥理研究表明，白花前胡具有鈣通道阻滯、降壓、抗腫瘤、抗病毒、抗炎及逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥等多種生物活性[2-4]。隨著經(jīng)濟的發(fā)展，前胡野生資源日漸枯竭，難以滿足需求。目前前胡藥材主要來源于栽培品種，然而栽培品和野生品的活性成分含量差異大[5-6]。前胡的栽培方式有助于提高其有效物質(zhì)的含量，同時活性物質(zhì)的提取方法也對于前胡的開發(fā)利用至關(guān)重要。本研究通過對比不同提取方法對白花前胡甲素和白花前胡乙素提取量的影響，為前胡藥材的質(zhì)量提升提供幫助。

1 材料與儀器

甲醇(色譜純)：重慶川東化工(集團)有限公司，批號20190901；三氯甲烷：重慶川東化工(集團)有限公司，批號20120702；水：均為臨用現(xiàn)制的超純水；白花前胡甲素、白花前胡乙素對照品：中國食品藥品檢定研究院，批號分別為111711-201904、111904-201804。

島津LC-20AT高效液相色譜儀，包括LCsolution色譜管理處理軟件、CTO-20A柱溫箱、SIL-20A自動進樣器、SPD-M20A二極管陣列檢測器、日本島津Shim-pack VP-ODS色譜柱(4.6 mm×0.5 μm×250 mm)、CBM-20Alite系統(tǒng)控制器；METTLER AL104型電子天平(感量：0.1 mg)，CPA225D型電子天平(感量：0.01 mg)；Molecular標(biāo)準(zhǔn)智能型純水機；KQ-1000DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DHG電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海龍躍儀器有限公司)；HH-8數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海汗諾儀器有限公司)；多功能微波合成萃取儀(UWav-2000，上海新儀微波化學(xué)科技有限公司)；LYZ恒溫?fù)u床(上海龍躍儀器設(shè)備有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取方法

2.1.1 按照 2015版藥典超聲提取法(S1) 取前胡樣品粉末(過三號篩)約0.5 g，精密稱定，置250 mL具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率400 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液5 mL，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.1.2 按照藥典改進法(S2、S3) 取前胡樣品粉末(過三號篩)約0.5 g，精密稱定，置250 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇或乙醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率400 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用相應(yīng)提取液補足減失的重量，搖勻，濾過，50 mL量瓶中定容，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.1.3 按照微波法(S4) 取前胡樣品粉末(過三號篩)約0.5 g，精密稱定，置250 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，微波處理(功率400 W，30 ℃)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，50 mL量瓶中定容，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.1.4 按照搖瓶法(S5) 取前胡樣品粉末(過三號篩)約0.5 g，精密稱定，置250 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，恒溫?fù)u床(30 ℃，120 rmp)搖瓶30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，50 mL量瓶中定容，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2 測定方法與結(jié)果

2.2.1 色譜條件 按《中國藥典》2015年版一部“前胡”標(biāo)準(zhǔn)項下“含量測定”規(guī)定進行測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(75∶25)為流動相；檢測波長為321 nm，理論板數(shù)按白花前胡甲素峰計算應(yīng)不低于3 000。

精密稱取白花前胡甲素、白花前胡乙素對照品適量，加甲醇制成每1 mL各含白花前胡甲素73.0 μg、白花前胡乙素79.8 μg的混合溶液，即得。白花前胡甲、乙素混合對照品色譜，見圖1。

注：1.白花前胡甲素；2.白花前胡乙素。

2.2.2 譜圖相似度 將色譜數(shù)據(jù)導(dǎo)出為AIA格式，然后導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》2012版，進行相似度分析，其色譜見圖2，相似度見表1。由圖2可知，4種提取方法所得色譜圖和藥典法均較為相似，提取物質(zhì)種類和出峰時間都和藥典提取法較為吻合。由表1可知，S5法和藥典提取法相似度最高，系數(shù)為1.000；S2、S3及S4和藥典提取法的相似系數(shù)均在0.96以上。由此可見，上述幾種方法都能很好地滿足藥典要求，進而替代藥典提取法。

表1 HPLC圖譜相似度系數(shù)

圖2 前胡不同提取方法的HPLC圖譜

2.2.3 提取量比較 不同提取方法所得白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量見表2。由表2可知，S2、S3、S4和S5均能提高白花前胡甲素和白花前胡乙素的提取量，增加其可檢測性。與藥典提取法相比白花前胡乙素的含量提高了12.61%～20.05%，白花前胡乙素的含量提高了11.23%～21.05%。同時，優(yōu)化的提取方法測得的白花前胡甲素和白花前胡乙素含量均高于藥典要求(大于0.9%和大于0.24%)。

表2 提取方法對白花前胡甲素、乙素的影響 (%)

3 討論

《中國藥典》2015版Ⅰ部前胡項下的HPLC測定方法，樣品提取方法繁瑣，操作過程多，且采用三氯甲烷為提取溶劑，該溶劑為二類有毒試劑，應(yīng)避免使用。故項目組對其提取方法進行優(yōu)化，首先將提取溶劑三氯甲烷替換為甲醇或乙醇，實驗結(jié)果表明甲醇更有利于白花前胡甲素和白花前胡乙素的提取，使其測得含量更高；在此基礎(chǔ)上，對比了微波提取和搖瓶提取的差異，搖瓶法對白花前胡乙素的提取有一定促進作用。搖瓶法所得HPLC圖譜和藥典法的HPLC圖譜相似度最為接近，系數(shù)為1.000；此法提取溶劑更安全，提取方式更溫和、安全、有效，且能同時提高白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量；該方法有望替代三氯甲烷超聲提取法。

通過對比前胡的提取方法，采用甲醇超聲提取法提取前胡的白花前胡甲素和白花前胡乙素，均能獲得較高的含量；而采用更為溫和的搖瓶法則更有利于白花前胡乙素的提取。在實際生產(chǎn)過程中，可以根據(jù)樣品的不同情況，選擇合適的提取方法，有利于提高生產(chǎn)效率。