ELISA聯合TRUST在梅毒螺旋體感染患者中的診斷效果及效能ROC曲線研究

職建軍

(安陽市疾病預防控制中心 人事科，河南 安陽 455000)

梅毒是由梅毒螺旋體感染所引起的性傳染疾病，可引起人體多系統損害，破壞正常組織功能，嚴重威脅著患者的生命安全[1]。梅毒血清學檢查對梅毒早期診斷、控制梅毒傳播具有重要作用。因此，全面認識和了解梅毒抗體檢測對指導臨床診斷和療效觀察具有重要意義[2]。臨床主要有兩類檢驗方法，即非梅毒螺旋體血清學實驗和梅毒螺旋體血清學試驗[3]。甲基胺紅不加熱血清試驗(TRUST) 檢測屬于非梅毒螺旋體血清學實驗，試驗結果的特異性相對較差，易出現假陽性結果。酶聯免疫吸附法(ELISA) 屬于梅毒螺旋體血清學試驗。為提高臨床檢測的準確性，本研究以梅毒螺旋體感染患者為對象，探討ELISA 聯合TRUS 對梅毒螺旋體感染的診斷價值。報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2019年1月至2019年10月疑似梅毒螺旋感染患者50例作為研究對象，其中男28例，女22例；年齡25 ～65 歲，平均(32.25±5.53) 歲；病情分期：15例Ⅰ期患者、24例Ⅱ期患者、8例Ⅲ期患者，3例潛伏期患者。所有患者均進行TRUST、ELISA 和TPPA 檢驗。本研究經醫院倫理委員會批準，患者均知情同意。

1.2 方法

疑似梅毒螺旋體感染患者，均經TRUST、ELISE 及聯合檢測，并以梅毒旋體明膠顆粒檢測(TPPA) 作為金標準，確診前患者均行ELISA 和TRUST 檢測，具體方法如下。

ELISA：(1) 儀器與設備。ELISA 試劑盒來源于上海恒遠生化試劑有限公司，采用雙抗體夾心法檢測，為降低檢測結果出現的誤差，嚴格按照試劑盒說明操作。(2)檢測方法。①檢測前患者需空腹8 h 以上，于次日清晨抽取外周靜脈血2 mL，采用血液離心儀將標本血液分離10 min，轉速為3 000 r/min，取最上層血清備用；②將0.05 mL 的碳酸鹽包被緩沖液(pH 值為9.6) 加入血清中稀釋；③將稀釋后的血液標本置入聚苯乙烯板的反應孔中孵化，每個反應孔中置入0.1 mL 樣本并用保鮮膜密封好，在-4℃的環境下進行孵育；④孵育后，取出聚苯乙烯板，清除溶液，用緩沖液反復清洗3 遍，將待檢標本置入反應孔中，在37℃恒溫箱中孵育60 min，孵育結束后，反復沖洗3 遍；⑤制作陽性及陰性對照孔，將0.1 mL酶標抗體置入反應孔中，進行孵育60 min，孵育后清洗，將0.1 mL TMB 溶液進行孵育30 min，孵育結束后，將0.05 mL 2M 硫酸加入反應孔中進行觀察。

檢驗完畢后進行TRUST 檢測，TRUST 試劑盒來源于上海浩然生物技術有限公司。

TPPA 檢測：抽取患者清晨空腹外周血2 mL，血清分離后，采用TPPA 試劑盒檢測，試劑盒來源于上海浩然生物技術有限公司。

1.3 觀察指標

以TPPA 檢測結果作為金標準， 對比ELISA、TRUST 及聯合檢測結果的診斷符合率。比較ELISA 和TRUST 及聯合檢測的靈敏性、特異性。

1.4 統計分析

采用SPSS 18.0 軟件處理，計數資料采用n(%)表示，行χ2檢驗；計量資料采用±s表示，行t檢驗；繪制ROC 曲線，分析ELISA、TRUST 在梅毒螺旋體感染患者中的診斷效能，P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 ELISA 檢測、TRUST 檢測及二者聯合檢測結果的診斷符合率比較

疑似梅毒螺旋體感染患者均經TPPA 檢查確診，確診49例，確診率為98.00%。ELISA 檢測確診47例，診斷符合率為95.92%(P＞0.05)；TRUST 檢測確診41例，診斷符合率為83.67%(P＜0.05)；ELISA 聯合TRUS 檢測確診49例，與金標準診斷符合率為100.0%(P＞0.05)。見表1。

表1 ELISA檢測、TRUST檢測及其兩者聯合檢測診斷符合率與TPPA檢查結果比較[n(%)]

2.2 ELISA 檢測、TRUST 檢測及其兩者聯合檢測在梅毒螺旋體感染患者中的診斷效能

ROC 曲線結果( 見圖1) 表明：ELISA 聯合TRUST用于梅毒螺旋體感染患者中靈敏度、特異度均高于ELISA 和TRUST 單一檢測(χ2=5.392、6.782，P=0.021、0.018)。見表2。

表2 ELISA檢測、TRUST檢測及其兩者聯合檢測在梅毒螺旋體感染患者中診斷效能

圖 1 ELISA 檢測、TRUST 檢測及其兩者聯合檢測在梅毒螺旋體感染患者中診斷 ROC 曲線

3 討 論

梅毒是一種慢性性傳播疾病，可侵犯多個器官，如未及時治療可引起神經系統、心血管疾病，甚至危及患者生命。梅毒的病原體是梅青螺旋體，梅毒的傳染源是梅毒患者，主要傳染途徑是性傳播，其次是胎盤傳播、血液傳播[5]。梅毒的早期癥狀不明顯，具有藏匿性，因此需要實驗室檢驗進行診斷。早期診斷有利于控制病情的發展和傳播，提高治療效果及預后[6]。

目前，臨床對于梅毒的檢驗以TPPA 方法為主，TPPA 是梅毒血清學檢查的梅毒特異性抗體反應，在判定陽性的情況下，需結合其他的檢查結果以及臨床癥狀進行綜合判斷。臨床將TPPA 檢測結果作為診斷的金標準，但是該方法檢測周期較長，價格昂貴，不適合大量樣本的篩查[7]。ELISA 是一種新型檢測方法，近年來，被廣泛應用于臨床實驗室指標檢測中，檢測原理是將抗體與酶復合物結合，產生顯色反應，通過顯色情況判斷檢測的陽性或陰性結果[8]。該檢驗方法取樣少、便于操作，可實現樣本的自動化檢驗，適用于大量樣本的篩查，使用酶標儀做判斷可提高檢測結果的準確性[9]。ELISA檢測方法中雙抗體夾心法的臨床診斷準確性最高，雙抗體夾心法是用特異性抗原制作的酶結合物，具有很高的檢驗特異性，從而減少假陰性結果，提高臨床檢驗靈敏性。TRUST 檢測的靈敏性較低，不使用于早期梅毒的檢測中[10]。

本研究中，疑似梅毒螺旋體感染患者均經TPPA 檢查確診，確診49例，確診率為98.00%。ELISA 檢測確診47例，診斷符合率為95.92%(P＞0.05)；TRUST檢測確診41例，診斷符合率為83.67%(P＜0.05)；ELISA 聯合TRUS 檢測確診49例，與金標準診斷符合率為100.0%，ROC 曲線結果表明：ELISA 聯合TRUST 用于梅毒螺旋體感染患者中靈敏度、特異度均高于ELISA和TRUST 單一檢測(P＜0.05)，由此說明，ELISA、TRUST 用于梅毒螺旋體感染檢測中具有較高的價值，且二者聯合檢測可獲得較高的靈敏度及特異度。

綜上所述，ELISA 法聯合TRUST 用于梅毒螺旋體感染患者中能獲得較高的診斷符合率，二者聯合診斷能提高患者診斷效能，指導臨床診療，值得應用。