三陰性乳腺癌組織中FOXJ1、SATB1的表達變化及臨床意義

付飛國 王憶麗 雷秋模

南昌市第三醫院乳腺外科，江西南昌 330009

乳腺癌的死亡率與發病率位居女性腫瘤疾病首 位，近幾年乳腺癌的發病率和死亡率呈逐年上升，嚴重影響女性的身心健康[1]。而三陰性乳腺癌在所有乳腺癌中死亡率最高，5 年預后生存率不足30%[2]。目前主要依賴TNM 分期對三陰性乳腺癌患者預后進行判定[3]。叉頭框蛋白J1（FOXJ1）是FOX 蛋白家族成員，是一種轉錄因子，在胚胎發育、免疫調節以及腫瘤發生發展中起重要作用[4-5]。核基質結合區結合蛋白質1（SATB1）在胰腺癌和前列腺癌等腫瘤中表達較高，參與基因轉錄及轉錄后修飾過程，在腫瘤轉移及侵襲調控中起重要作用[6-7]。有研究發現，FOXJ1 和SATB1 在胃癌中均出現表達，且共同參與胃癌的發生和發展過程[8]，然而目前臨床上關于三陰性乳腺癌FOXJ1 和SATB1 的研究報道較少，因此筆者進行此研究?，F報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014 年2 月—2015 年3 月南昌市第三醫院行三陰性乳腺癌根治術治療的98 例患者為研究對象。納入標準：①臨床資料完整；②病理學診斷確診為三陰性乳腺癌，符合三陰性乳腺癌的臨床診斷標準[9]。排除標準：①全身免疫性缺陷及肝腎功能障礙；②患者并發其他惡性腫瘤；③未行腫瘤根治術。本研究經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 試劑與方法

手術切除的腫瘤組織及相應的癌旁組織（距離腫瘤邊緣＞2 cm）先進行常規的中性甲醛（諸暨市和諧科技有限公司，產品編號：59400402551）固定，然后切取部分進行酒精梯度脫水，脫水結束后放于二甲苯中透明，然后用生物組織包埋機（北京伊萊爾醫療設備有限公司，型號：MB2271）對組織進行常規的石蠟包埋，制備組織切片。組織切片制備成功后先放于烘箱加熱脫蠟，然后放于二甲苯和梯度酒精進行脫蠟水化，將水化后的組織切片置于37℃濕盒中使用3%過氧化氫（廣東恒健制藥有限公司，批號：0299001）孵育20 min，將孵育完成的組織切片放于高壓鍋中進行抗原修復后在37℃封閉液中孵育30 min。孵育結束后在切片組織周圍用組化筆畫圈并在組織上滴加Anti-FOXJ1抗體或Anti-SATB1（德國ACAM 生物科技有限公司，貨 號：ab235445、ab109122）抗體，抗體加完后置于4℃冰箱過夜。次日清洗后滴加二抗，然后置于37℃恒溫箱孵育30 min，最后用二氨基聯苯胺法（四川海諾威科技有限公司，貨號：91-95-2）進行顯色，并用蘇木精（南京春秋生物工程有限公司，貨號：517-28-2）進行復染，最后對組織切片進行脫水、透明和固定。染色完成后將組織切片置于倒置生物顯微鏡（上海市德意曼醫療器械有限公司，型號：DYM-5100）下觀察染色結果。根據細胞陽性數可分為5 個等級，每個等級對應記0～4 分，陽性細胞比例≤5%記0 分，5%＜陽性細胞比例＜25%記1 分，25%≤陽性細胞比例＜50%記2 分，50%≤陽性細胞比例＜75%記3 分，陽性細胞比例≥75%記4 分。根據染色強度將切片分為4 個等級，無色記0 分，淡黃色記1 分，棕黃色記2 分，棕褐色記3 分，最后將陽性細胞數評分和染色強度評分相乘得到最終評分并按等級分為陰性和陽性，其中0～4 分為陰性、5～12 分為陽性[10]。

通過復查和電話對患者進行隨訪，隨訪截止時間為2020 年3 月，根據生存情況統計所有患者生存時間。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0 統計學軟件進行數據分析，計數資料用例數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；Kaplan-Meier 法進行生存分析，生存率比較采用Logrank 檢驗。FOXJ1 和SATB1 表達相關性用Pearson 法分析。以P <0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三陰性乳腺癌組織及癌旁組織中的SATB1 和FOXJ1 的表達

FOXJ1 主要表達在細胞核，SATB1 主要表達在細胞膜細胞外。免疫組化結果顯示，三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 陽性率為31.63%（31/98）低于癌旁組織的60.20%（59/98），差異有高度統計學意義（χ2=16.107，P <0.001），見圖1A～B。三陰性乳腺癌組織中SATB1陽性率為72.45%（71/98），高于癌旁組織的23.47%（23/98），差異高度有統計學意義（χ2=47.099，P <0.001），圖1C～D。

圖1 FOXJ1 和SATB1 在不同組織中的表達情況（免疫組化，400×）

2.2 三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 和SATB1 表達和臨床參數的關系

三陰性乳腺癌組織中，不同FOXJ1 表達與TNM分期及腫瘤分化程度有關（P<0.05 或P<0.01）；不同SATB1 表達與腫瘤浸潤深度、TNM 分期以及淋巴結是否轉移有關（P <0.05 或P <0.01）。見表1。

表1 三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 和SATB1 表達與臨床參數的關系（例）

2.3 三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 和SATB1 的表達相關性

三陰性乳腺癌中，FOXJ1 表達與SATB1 表達呈負相關（r=-0.625，P <0.05）。

2.4 三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 和SATB1 的表達和患者預后之間的關系

對數據進行Kaplan-Meier 生存曲線分析，結果顯示，SATB1 陽性患者5 年總生存率為35.2%（25/71）低于陰性患者的59.3%（16/27），差異有高度統計學意義（χ2=14.170，P ＜0.001），圖2A。FOXJ1 陽性患者5 年總生存率為64.5%（20/31），高于陰性患者的31.3%（21/67），差異有高度統計學意義（χ2=22.386，P ＜0.001），圖2B。

圖2 三陰性乳腺癌組織FOXJ1 和SATB1 表達與患者預后的關系

3 討論

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，并且其發病率有不斷升高的趨勢[11]。三陰性乳腺癌的發生發展不依賴于體內激素的表達，對靶向治療藥物的治療效果較差，只能通過放化療延長患者生存期，預后不佳[12-13]。乳腺癌的發生涉及多種癌基因的異常激活及抑癌基因的失活，引起腫瘤細胞的惡性增殖及轉移等[14-15]。尋找導致三陰性乳腺癌發生發展的關鍵驅動基因，有助于尋找新的治療藥物及治療方案。

FOXJ1 基因位于人類染色體17q25.1，該基因編碼蛋白屬于轉錄因子叉頭框家族的成員，具有調節控制纖毛產生及運動的生物學功能，參與調控腫瘤轉移、侵襲、增殖等惡性生物學過程[16-18]。本研究結果顯示，三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 表達下降，提示FOXJ1在三陰性乳腺癌中可能作為抑癌基因，參與三陰性乳腺癌的發生發展過程。有學者發現在MDA-MB-231、HCC1937 和HCC1806 等三陰性乳腺癌細胞系中FOXJ1 有表達下調的現象[19]，與本研究的結果一致。目前對于FOXJ1 表達下調的具體分子機制尚不清楚，可能與其他轉錄因子的轉錄調控和蛋白酶體降解有關。在胃癌的研究中發現，miR-6852 可以結合FOXJ1 的信使RNA，進而抑制FOXJ1 表達及功能，促進胃癌細胞的轉移和增殖[20]。同時，TNM 分期越高、腫瘤分化程度越差的三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 表達越低。其機制可能是腫瘤中FOXJ1 能夠下調細胞外信號調節激酶通路蛋白如絲裂原活化的蛋白激酶1等的表達，抑制細胞外信號調節激酶通路的活化，發揮抑癌基因的功能，FOXJ1 的表達下調激活細胞外信號調節激酶通路下游靶基因，如c-met、血管內皮生長因子的表達，促進腫瘤細胞的增殖浸潤及轉移，導致腫瘤進展[16]。FOXJ1 低水平能夠反映患者的不良預后，能夠成為新的三陰性乳腺癌預后相關標志物。其原因可能與FOXJ1 的低表達多發生在惡性程度較高的腫瘤當中，FOXJ1 表達降低導致對絲氨酸-蘇氨酸激酶信號通路活化抑制作用減弱，進而引發腫瘤細胞增殖及侵襲轉移，最終加快癌癥進展，縮短預后生存[21]。

SATB1 基因位于3p24.3，該基因編碼蛋白作為一種基質蛋白，參與募集染色質重塑因子以調節染色質結構。研究顯示，SATB1 在促進腫瘤上皮-間質轉化中起到重要的調節作用，并調控細胞氧化應激等病理生理過程[22]。本研究結果顯示，三陰性乳腺癌組織中SATB1 陽性占比高于癌旁組織（P <0.01），其機制可能與結合到SATB1 基因啟動子上的組蛋白乙酰化水平升高有關，如在結直腸癌當中，乙?；揎椀慕M蛋白結合到SATB1 基因啟動子區，促進其轉錄，進而起到促進腫瘤進展的作用[23]。此外，不同SATB1 表達與腫瘤浸潤深度、TNM 分期以及淋巴結是否轉移有關聯（P <0.05 或P <0.01），提示SATB1 能夠作為一種促癌基因，促進腫瘤的惡性進展。研究報道顯示，在乳腺癌中SATB1 能夠促進E 型鈣黏蛋白的表達，使得乳腺癌細胞易發生局部浸潤及淋巴結轉移，進而促進腫瘤發生發展[24]。此外，SATB1 高表達患者的預后較差，癌組織中SATB1 的表達程度可反映三陰性乳腺癌患者的預后生存情況。

本研究結果顯示，三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 和SATB1 表達呈負相關，提示在三陰性乳腺癌發生發展過程中FOXJ1 和SATB1 均起到一定調節作用。研究表明，喉鱗狀細胞癌中，FOXJ1 作為轉錄抑制因子，能夠與組蛋白結合并抑制其乙?；?，組蛋白乙?；较抡{而抑制SATB1 啟動子區轉錄起始復合物的形成，抑制SATB1 表達，進而抑制腫瘤進展[25]。但三陰性乳腺癌中SATB1 是否是FOXJ1 的靶基因以及二者在三陰性乳腺癌發生發展中是否發揮關鍵作用仍需進一步深入探究。

綜上所述，三陰性乳腺癌組織中FOXJ1 低表達，SATB1 高表達，共同參與三陰性乳腺癌的發生發展過程，并與三陰性乳腺癌患者的預后相關，有可能成為三陰性乳腺癌患者預后預測和治療的潛在標志物。