紫草中羥基萘醌總色素含量測定的穩定性研究

朱 勇，李懷國

（佛山市中醫院制劑中心，廣東 佛山 528000）

紫草是2020 版《中國藥典》中收載的中藥品種。紫草為紫草科紫草屬植物，以干燥的根入藥。中醫學認為，紫草性寒，味甘、咸，歸心經、肝經，具有涼血活血、解毒透疹之功效[1]。現代藥理學研究表明，紫草具有抗菌、消炎、抗病毒、抗腫瘤、鎮靜鎮痛、興奮平滑肌等作用，對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌等均有抑制作用，且能加速上皮細胞的生長，在治療燙傷方面有特效[2]。現階段的研究表明，紫草中的紫草素及乙酰紫草素是其能夠發揮抗炎作用的主要成分。2020 版《中國藥典》紫草項下羥基萘醌總色素含量的測定方法是：將紫草在50℃下干燥3 h，粉碎（過3 號篩），用95%的乙醇浸泡4 h 后震搖并稀釋，然后按照紫外-可見分光光度法（2020 版《中國藥典》四部通則0401）在516 nm 波長處測定其吸收度，羥基萘醌總色素的含量不得少于0.8%（按左旋紫草素計）[3]。我院自主研發的紫草油、傷科黃水、傷科黃油紗等均需要應用到紫草，我院對紫草藥材質量的要求較高，對紫草中羥基萘醌總色素含量的要求是《中國藥典》中規定的3 倍。本文主要是對紫草中羥基萘醌總色素含量測定的穩定性進行研究。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

紫草（批號：20200717，購自佛山馮了性藥材有限公司），經鑒定為紫草科紫草屬植物新疆紫草；左旋紫草素標準品（批號：110769-200405，購自中國生物制品有限公司）；L5s 紫外可見分光光度計（由上海分析儀器廠生產）；AE200 型電子天平（由瑞士METTLER 公司生產）；CT-C-I 型熱風循環烘箱（由常州益民干燥設備有限公司生產）；WIMER 3001 干粉激光粒度儀（由濟南微納儀器有限公司生產）。

1.2 方法

1.2.1 試驗方法 1）紫草中羥基萘醌總色素含量的測定。取紫草中藥材，按照2020 版《中國藥典》（四部通則0401）中收載的方法，測定其中羥基萘醌總色素的含量，具體的操作方法是：在50℃的環境下將紫草干燥3 h，粉碎（過3 號篩），用95%的乙醇浸泡4 h 后震搖并稀釋，然后按照紫外-可見分光光度法（2020 版《中國藥典》四部通則0401）在516 nm波長處測定其吸收度，明確其中羥基萘醌總色素的含量。2）精密度試驗。配置左旋紫草素（含量為3%）乙醇溶液標準品及空白樣品，按照2020 版《中國藥典》（四部通則0401）中收載的方法及檢測條件重復檢測6 次，測定其中羥基萘醌總色素的含量。3）穩定性考察。將同一批紫草粉碎成不同等級的細粉，在相同干燥時間、相同含水量下按照2020 版《中國藥典》（四部通則0401）中收載的方法及檢測條件測定羥基萘醌總色素的含量，考察該方法的穩定性。4）準確度試驗。取已知左旋紫草素含量為3%的紫草乙醇溶液6 份（每份5 mL），在其中加入左旋紫草素標準品（左旋紫草素的含量為3%）乙醇溶液6 份（每份5 mL）。將上述兩種溶液混合，得到供試品溶液。按照2020 版《中國藥典》（四部通則0401）中收載的方法及檢測條件測定羥基萘醌總色素的含量，計算加樣回收率。加樣回收率（%）=（測得量-已知量）/加入量×100%。1.2.2 L9（34）正交試驗 根據2020 版《中國藥典》中收載的紫草測定方法中的主要影響因素，以羥基萘醌總色素含量測定為指標進行L9（34）正交試驗，考察藥材的粉碎細度、干燥時間及含水量對測定結果的影響。L9（34）正交試驗的影響因素和水平詳見表1。

表1 L9（34）正交試驗的影響因素和水平

2 結果

2.1 精密度試驗結果

通過進行精密度試驗可知，左旋紫草素（含量為3%）乙醇溶液標準品及空白樣品的平均加樣回收率為101%，相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）為1.46。

表2 精密度試驗結果

2.2 穩定性考察結果

通過進行穩定性考察可知，在紫草藥材粉碎成極細粉的條件下測得羥基萘醌總色素的含量值較為穩定。詳見表3。

表3 紫草粉碎的粗細度對羥基萘醌總色素含量測定值的影響

2.3 L9（34）正交試驗結果

本研究中進行L9（34）正交試驗的結果詳見表4。

表4 L9（34）正交試驗結果

2.4 羥基萘醌總色素含量測定影響因素的方差分析結果

對本研究中影響紫草中羥基萘醌總色素含量測定的因素進行方差分析的結果顯示，藥粉細度是影響紫草中羥基萘醌總色素含量測定的主要因素，其次為藥粉干燥時間和藥粉含水量。詳見表5。

表5 羥基萘醌總色素含量測定影響因素的方差分析結果

2.5 測定紫草中羥基萘醌總色素含量的最佳條件

本研究中通過進行L9（34）正交試驗可知，將藥材粉碎成極細粉、在50℃下干燥3 h、將藥粉的水含量控制在9.0%左右是測定紫草中羥基萘醌總色素含量的最佳條件。

3 討論

紫草可涼血活血、解毒透疹，可用于治療血熱毒盛、麻疹、斑疹透發不暢諸證。現代藥理學研究表明，紫草中的羥基萘醌總色素是其主要藥理成分。通過對紫草中羥基萘醌總色素的含量進行測定有利于對其進行質量控制[4]。我們發現，按照2020 版《中國藥典》（四部通則0401）中收載的方法測定紫草中羥基萘醌總色素的含量時，對檢測條件的要求過于寬泛，測定條件不夠細化，因此導致測定結果存在較大差異。近年來，我們在測定紫草中羥基萘醌總色素的含量時細化了測定條件，提高了藥材含量測定的穩定性，有利于藥材的質量控制。

本研究的結果證實，藥粉細度是影響紫草中羥基萘醌總色素含量測定的主要因素，其次為藥粉干燥時間和藥粉含水量。將藥材粉碎成極細粉、在50℃下干燥3 h、將藥粉的含水量控制在9.0% 左右是測定紫草中羥基萘醌總色素含量的最佳條件。