烏奴龍膽的揮發性成分分析*

頓珠次仁 裴歡歡 嚴志宏**

（1.西藏藏醫藥大學，西藏 拉薩 850000；2.江西中醫藥大學，江西 南昌 330004）

烏奴龍膽是龍膽科龍膽屬植物烏奴龍膽（Genti?anaurnulaH.Smith）的全草，別名岡噶瓊（藏名），主要分布于我國西藏、青海西南部等地。烏奴龍膽出處為《西藏常用中草藥》，收錄入《中藥大辭典》，其中記載烏奴龍膽原形態為多年生草本，高3cm～5cm。葉密集對生，似輪生狀；葉片扇形，全緣，無柄。花1～3 朵頂生，藍紫色，并帶有紫黑色條紋；萼管狀，常5 裂，裂片扇形；花冠鐘形，先端5 裂，裂片全緣；雄蕊5；子房上位。蒴果成熟時2瓣裂。

通過四種不同體系對烏奴龍膽乙醇提取物的各個極性部位體外抗氧化活性進行比較研究。結果表明，各極性部位對DPPH 自由基、羥基自由基和超氧陰離子自由基均有一定的清除作用，也具有一定的還原能力。[1]藏藥烏奴龍膽（GentianaurnulaH.Smith）（龍膽科）的全草中分離到5個新的環烯醚萜甙，命名為烏奴龍膽甙（gentioumoside）A-E。[2]

烏奴龍膽的性味為性寒，味苦，功能主治為清熱解毒，止瀉。治流感發燒，咽喉腫痛，黃疸，熱性腹瀉。用于血和赤巴合并癥，木布病，血管閉塞病，中毒性發燒，熱性腹瀉，流行性感冒，咽喉腫痛，黃疸病等。烏奴龍膽中含有多種化學成分，包括醛類、烯烴、酮類、酯類物質等化學成分。目前國內外對烏奴龍膽揮發性化學成分研究較少，在指導藏藥烏奴龍膽向中藥應用方面具有一定的指導意義。

目前對揮發性成分化學成分提取和分析的方法主要有水蒸氣蒸餾法、頂空固相微萃取（HS-SPME）、溶劑提取法、同時蒸餾萃取法、亞臨界流體、超臨界CO2萃取法等結合GC 或GC-MS。水蒸氣蒸餾和溶劑萃取法等結合GC 或GC-MS 是分析中草藥中揮發油的傳統方法。但是它需要相對大量的樣品，并且會造成部分分析物的損失，而HS-GC-MS的分析方法以分離和鑒定揮發油，此方法快速、準確，彌補了傳統方法的不足。其中頂空分析作為一種無有機溶劑萃取的樣品處理技術，通常與氣相色譜-質譜（GC-MS）技術結合用來分析復雜基質中的揮發性有機物，具有快速、高效、環保、靈敏度高等特點，在常規分析中發揮著重要作用，在中草藥中揮發油的分離和鑒定方面具有廣闊的前景。

本課題首次采用HS-GC-MS 分析烏奴龍膽揮發性成分，分析時將干燥粉碎的藥材裝入頂空樣品瓶中，經加熱平衡后，取揮發性氣體直接進入GC-MS 系統進行分析，減少了樣品預處理的復雜操作，即避免一些化學成分加熱分解、轉化的可能，又可快速分析烏奴龍膽揮發性成分，為烏奴龍膽揮發性成分的進一步研究和產品開發提供科學依據。

1 實驗儀器與藥材

1.1 實驗儀器

Agilent 7697A 自動頂空進樣器、7890A 型氣相色譜儀、5975C 單四極桿質譜儀（安捷倫公司，美國）；電子天平（型號YHC-11002B 瑞安市英衡電器有限公司監制）。20 ml頂空瓶（安捷倫公司，美國）。

1.2 藥材

烏奴龍膽藥材來自西藏。經西藏藏醫藥大學嘎務副教授鑒定為龍膽科龍膽屬植物烏奴龍膽（Genti?anaurnulaH.Smith）。

1.3 樣品制備

烏奴龍膽藥材經過簡單剪碎處理，再用分析稱精密稱取0.6g 的不同產地烏奴龍膽樣品分別裝入未使用過潔凈的20 mL頂空瓶中密封，待測。

2 方法

2.1 頂空進樣條件

樣品用量為0.60g；樣品瓶加熱溫度130℃；定量環溫度140℃；傳輸線150℃；樣品瓶加熱時間為20 min；樣品環平衡時間0.05 min；進樣時間1min。

2.2 氣相色譜條件

HP-5 毛細管柱型彈性色譜柱（0.25μm×250μm×30m）；載氣：高純氮氣，純度99.999%；柱流量1.0mL/min；分流進樣，分流5：1；進樣量1.0 mL，走兩針，進樣口溫度為250℃；溶劑延時為3min。程序升溫條件：初始溫度為40℃（保持3min），以10℃/min 的速度升溫至300℃（保持5min），

2.3 質譜條件

EI 離子源，電子能量70 e V；離子源溫度230℃；傳輸線溫度為280℃；四級桿溫度為150℃；全掃描模式；掃描范圍：m/z50～650。

2.4 數據處理

總離子流圖中的各個峰經質譜掃描后得到質譜圖，利用氣相色譜數據處理系統通過NIST11.L 譜庫檢索并結合相關文獻鑒定檢測出的成分，對檢出的峰按峰面積歸一化法計算各成分在總揮發性成分中的相對百分含量。

3 檢測結果

從烏奴龍膽中分離和鑒定出的成分個數為57種。總離子流圖見圖1，成分表見表1。

表1 烏奴龍膽中分離和鑒定的成分表

表1 （續）

圖1 烏奴龍膽總離子流圖

4 結論與討論

采用頂空氣相色譜-質譜聯用的方法檢測烏奴龍膽的揮發性成分，在檢測并鑒定出的揮發性成分中，均以烯烴類成分為主，含量最高的是（+）-檸檬烯（45.055%），其他含量較高的成分還有γ-松油烯、左旋-alpha-蒎烯、α-松油醇、左旋-beta-蒎烯、4-異丙基甲苯，由此可知這6 種成分可能是其揮發性成分中的主要成分。

本次還從烏奴龍膽中新發現了異戊醛、香葉醇、檸檬醛、芳樟醇、無水醋酸鈉、反式石竹烯、橙花醇、（Z）-3，7-dimethylocta-2，6-diena、germacreneD，1-meth?yl-5-methylene-8-（1-methylethyl）-1，6-cyclodecadi?ene、3-異丙基-6-亞甲基-1-環己烯、（E）-Β-羅勒烯、醋酸、松油烯、4-萜烯醇、羅勒烯等成分，為烏奴龍膽藥材的揮發性成分的進一步研究和產品開發提供數據支撐。