不同劑型艾速平對乙醇致小鼠急性胃潰瘍出血模型的保護作用#

巫瑤 劉丹陽 于洋 陳雪棽 劉琳玲 萬莉紅 朱玲△ 易智慧

（1四川大學華西基礎醫學與法醫學院藥理學教研室，四川 成都 610041；2 四川大學華西醫院神經外科，四川 成都 610041；3 四川大學華西基礎醫學與法醫學院2015級基礎醫學，四川 成都 610041；4 四川大學華西醫院消化內科，四川 成都 610041）

消化系統潰瘍是臨床常見疾病，尤其以胃、十二指腸潰瘍最為常見，主要由各種應激、藥物因素誘發，具有病程長、易復發等特點[1]。目前關于消化系統潰瘍形成機制的公認理論是胃黏膜的攻擊因子與保護因子水平失衡，其中胃酸、胃蛋白酶增多以及幽門螺桿菌（Helicobacterpylori，HP）感染是導致胃粘膜損傷的主要因素[2]。因此臨床對于消化系統潰瘍的常規治療是抑制胃酸分泌與抗幽門螺桿菌感染聯合。

國產艾司奧美拉唑鈉（艾速平）屬于質子泵抑制劑（Proton pump inhibitor，PPI），是消化系統潰瘍的一線治療藥物，可持續抑制胃酸分泌，減少消化性潰瘍活動性出血[3]。最近臨床研究表明，艾速平注射液與進口奧美拉唑鈉制劑——耐信在相同劑量（40 mg）治療下的抑酸效果相當[4]。近期艾速平腸溶膠囊獲批上市，該口服制劑質量穩定、療效確切且價格低廉，為消化系統潰瘍治療提供了更多的用藥選擇。為探究艾速平注射液與腸溶膠囊對消化系統潰瘍的療效差異，本文以無水乙醇灌胃建立小鼠急性胃潰瘍出血模型，評價不同劑型艾速平對胃酸、胃蛋白酶以及潰瘍形成的影響，以期為臨床選擇適當的治療藥物劑型提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物與試劑

艾速平注射液購自正大天晴藥業集團，40 mg，201230148；艾速平腸溶膠囊購自正大天晴藥業集團，20 mg，19062501；無水乙醇（分析純）購自成都金山化學試劑有限公司，2500 mL，20200602；氯化鈉注射液購自四川科倫藥業股份有限公司，250 mL：2.25 g，N20122707A；胃蛋白酶活性檢測試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司，100T/48S，20210125；BCA蛋白濃度測定試劑盒（增強型）購自上海碧云天生物技術有限公司，500次，112720210126；pH精密試紙購自上海三愛思試劑有限公司，2.7-4.7，20200907。

1.1.2 動物

清潔級雌性昆明小鼠，6-8周齡，購自成都達碩動物有限公司，飼養于室溫22-24℃、相對濕度50-60%、12 h晝夜循環交替照明環境中，所有小鼠自由攝食飲水并保持籠舍清潔。適應性飼養5 d后進行試驗。

1.2 方法

1.2.1 急性胃潰瘍小鼠模型建立及分組

將30只雌性昆明小鼠隨機分為對照組、胃潰瘍模型組、高、低劑量艾速平注射液組（6.06 mg?kg-1、3.03 mg?kg-1，腹腔注射）、高、低劑量艾速平腸溶膠囊組（6.06 mg?kg-1、3.03 mg?kg-1，灌胃）（n=5）。除對照組外，所有小鼠按相應給藥途徑及劑量預防性給藥5 d；末次給藥后2 h，無水乙醇0.2 mL灌胃建立急性胃潰瘍模型。對照組小鼠灌胃等量生理鹽水，所有小鼠均于1 h后處死。

1.2.2 胃液pH值測定

用1 mL注射器沿著胃大彎側部抽取胃液，用pH試紙測定胃液pH值。

1.2.3 胃潰瘍形成情況觀察及胃潰瘍指數測定

沿胃大彎側部剖開小鼠胃腔，去除胃內殘雜后用5 mL蒸餾水沖洗胃腔。將各組小鼠洗凈后的全胃自然展開，胃內面朝上平鋪于白色潔凈濾紙上，肉眼觀察胃黏膜面潰瘍形成情況，并采用解剖顯微鏡（10倍）拍照并計算胃潰瘍指數。潰瘍指數計算方法：解剖顯微鏡下觀察胃黏膜出血、潰瘍面的多少、大小及其分布部位，測量各個潰瘍面的長徑，長徑≤1 mm者計為1分；>1～2 mm者計為2分；>2～3 mm者計為3分；>3～4 mm者計為4分；>4 mm者計為5分，各潰瘍面計分之和即為潰瘍指數。

1.2.4 胃蛋白酶活力測定

稱取約0.1 g 胃組織加入1 mL胃蛋白酶活性測定試劑盒中的提取液冰浴勻漿后，4 °C條件下、10000 rpm離心10 min取上清，采用BCA試劑盒在562 nm處測定其蛋白濃度Cpr。采用紫外分光光度法使用胃蛋白酶活性檢測試劑盒，測定所有樣本在275 nm處測定吸光度，并計算胃蛋白酶酶活性（U·mg prot-1）=1.31×（A測定-A對照）/Cpr

1.3 統計學方法

所有數據采用統計學軟件Prism 5.0進行統計處理，計量資料以均數±標準差（±SD）表示，采用t檢驗；P<0.05被認為有統計學差異。

2 結果

2.1 不同劑型艾速平對胃潰瘍小鼠胃液pH值、胃蛋白酶活力的影響

與對照組相比，胃潰瘍模型小鼠胃蛋白酶活性明顯升高（P<0.05），而胃液pH值未見明顯改變（P>0.05）；與胃潰瘍模型組相比，低劑量艾速平腸溶膠囊以及高、低劑量艾速平注射液治療均可明顯降低胃蛋白酶活性（P<0.05），而胃液pH 值仍未見明顯改變（P>0.05），見表1。

表1 胃潰瘍小鼠胃液pH值、胃蛋白酶活力（±SD，n=5）

表1 胃潰瘍小鼠胃液pH值、胃蛋白酶活力（±SD，n=5）

注：與對照組相比，*P<0.05；與模型組相比，#P<0.05。

組別 劑量（mg·kg-1） 胃液pH值 胃蛋白酶活力（U·mg prot-1） 對照組 - 1.9 ± 0.95 0.02737±0.00462 胃潰瘍模型組 - 3.1 ± 0.10 0.05762±0.00306* 高劑量艾速平注射液組 6.06 3.1 ± 1.09 0.02545±0.00574# 低劑量艾速平注射液組 3.03 3.0 ± 0.18 0.01745±0.01296# 高劑量艾速平腸溶膠囊組 6.06 3.4 ± 0.50 0.04264±0.01166 低劑量艾速平腸溶膠囊組 3.03 3.0 ± 0.25 0.02397±0.01404#

2.2 不同劑型艾速平對胃潰瘍小鼠胃潰瘍形成情況及潰瘍指數的影響

與對照組相比，胃潰瘍模型小鼠明顯出現胃粘膜潰瘍、出血，潰瘍指數與對照組相比明顯升高（P<0.05）；與胃潰瘍模型組相比，低劑量艾速平腸溶注射液治療明顯減輕小鼠胃粘膜潰瘍、出血，明顯降低潰瘍指數（P<0.05），見圖1，表2。

圖1 小鼠胃潰瘍形成情況

表2 胃潰瘍小鼠潰瘍指數（±SD，n=5）

表2 胃潰瘍小鼠潰瘍指數（±SD，n=5）

注：與對照組相比，*P<0.05；與模型組相比，#P<0.05。

組別 劑量（mg·kg-1） 潰瘍指數 對照組 - 0.0±0.00 胃潰瘍模型組 - 4.0±0.00* 高劑量艾速平注射液組 6.06 2.7±1.16 低劑量艾速平注射液組 3.03 1.5±1.58# 高劑量艾速平腸溶膠囊組 6.06 2.2±1.48 低劑量艾速平腸溶膠囊組 3.03 2.3±1.25

3 討論

乙醇是常見的致胃黏膜損傷的攻擊因子，對胃粘膜有極強的腐蝕性。乙醇通過代謝物乙醛與胃蛋白結合, 促進中性粒細胞浸潤、釋放氧自由基、髓過氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）等導致胃粘膜損傷[5]，因而是常用的復制急性胃潰瘍模型的手段。

質子泵即H+- K+-ATP酶，具有催化和轉運H+、K＋的功能，是胃酸分泌的最終環節。質子泵抑制劑（Proton pump inhibitor，PPI）能特異性抑制胃壁細胞中的H+- K+-ATP酶，發揮抑制胃酸分泌的作用[6]，是目前治療消化系統潰瘍的首選藥物。艾司奧美拉唑是奧美拉唑的S-異構體，與奧美拉唑相比首過消除更低、生物利用度高，且具有根除幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，HP）的作用，目前廣泛用于臨床治療胃、十二指腸潰瘍[7]，其作用機制主要包括抗酸以及抗氧化作用，對p38 MAPK和NF-κB信號通路具有明顯的抑制作用[7]。而臨床研究表明，艾司奧美拉唑晚餐前一次服用40 mg對夜間胃酸分泌的抑制作用明顯優于早餐前服用[8]。艾速平作為國產艾司奧美拉唑鈉，目前臨床使用的劑型包括針劑和腸溶膠囊。其中艾速平腸溶膠囊是最近上市的新劑型，以腸溶微丸充填膠囊、易于吞咽，尤其適合兒童、老年人、精神病患者和吞咽困難患者，可大幅提高患者的順應性，具有明顯的臨床優勢。

本研究通過以相同劑量的艾速平針劑和腸溶膠囊分別應用于小鼠急性胃潰瘍模型，通過胃酸、胃蛋白酶以及胃潰瘍形成評價不同劑型艾速平的療效差異，結果發現：低劑量艾速平腸溶膠囊（對應臨床等效劑量20 mg）、高劑量艾速平注射液（對應臨床等效劑量40 mg）、低劑量艾速平注射液（對應臨床等效劑量20 mg）對小鼠急性胃潰瘍模型具有較好的預防作用，主要體現為明顯抑制胃蛋白酶活性，減少胃潰瘍、出血形成。然而在該動物模型中，pH值未見明顯影響，這可能是由于本次小鼠模型采用的無水乙醇建立急性胃粘膜損傷，對pH值影響較小有關；也與pH值測定方法有關，本次實驗采取pH試紙進行測定，靈敏度不足。

綜上所述，低劑量艾速平腸溶膠囊（對應臨床等效劑量20 mg）、高劑量艾速平注射液（對應臨床等效劑量40 mg）、低劑量艾速平注射液（對應臨床等效劑量20 mg）對乙醇致小鼠急性胃潰瘍出血模型具有一定的保護作用，可減輕潰瘍形成、抑制胃蛋白酶活性。