茯苓傳統湯劑與配方顆粒湯劑化學成分的對比研究

岳佑凇，張 璐，謝夢迪，王柯涵，張 璞，張慧杰，王艷麗，桂新景, 3, 4，施鈞瀚, 3, 4，姚 靜, 3, 4，劉瑞新, 3, 4*，李學林, 3, 4*

茯苓傳統湯劑與配方顆粒湯劑化學成分的對比研究

岳佑凇1，張 璐2，謝夢迪1，王柯涵2，張 璞1，張慧杰1，王艷麗2，桂新景2, 3, 4，施鈞瀚2, 3, 4，姚 靜2, 3, 4，劉瑞新2, 3, 4*，李學林2, 3, 4*

1. 河南中醫藥大學，河南 鄭州 450008 2. 河南中醫藥大學第一附屬醫院 藥學部，河南 鄭州 450000 3. 河南省中藥飲片臨床應用現代化工程研究中心，河南 鄭州 450000 4. 河南中醫藥大學 呼吸疾病中醫藥防治省部共建協同創新中心，河南 鄭州 450000

以茯苓為研究對象，進行其飲片傳統湯劑與配方顆粒湯劑化學成分上的對比研究，為茯苓配方顆粒的臨床合理應用提供依據。選擇15批不同產地或批次的茯苓飲片及5個廠家各3批配方顆粒，基于HPLC法建立二者湯劑指紋圖譜，從三萜類化學成分種類、三萜類指標性成分含量、所有峰峰面積總和3個方面進行評價，并使用主成分分析（PCA）法對數據進行統計分析。三萜類化學成分種類：茯苓飲片傳統湯劑中未檢測到三萜類指標性成分，而多數廠家配方顆粒湯劑中有3個以上的三萜類指標性成分；1個廠家與傳統湯劑類似，未檢測到上述成分；三萜類指標性成分含量：各廠家茯苓配方顆粒湯劑在三萜類指標性成分含量方面差異較大；A、C、D、E 4個含有指標性成分的配方顆粒廠家產品中，D廠和E廠的多數成分相對較高，A廠各成分相對均衡，而C廠部分指標性成分缺失；所有峰峰面積總和：將D廠配方顆粒湯劑中所有峰峰面積總和定為100%，相較于D廠，傳統湯劑為3.90%、A廠12.38%、B廠1.97%、C廠10.47%、E廠8.57%；主成分分析結果表明，同一廠家不同批次間質量不一，C廠最為集中，A廠相對集中，D、E廠3個批次間分布最分散。茯苓飲片傳統湯劑與配方顆粒湯劑在三萜類成分種類上具有非常明顯的差異，各廠家茯苓配方顆粒湯劑中三萜類成分的種類、含量和批次間穩定性也不盡一致，提示各廠家配方顆粒制備工藝不盡相同，應進一步深入探討茯苓配方顆粒的制備工藝及其合理應用，同時對茯苓飲片的合理使用也應進一步深入研究。

茯苓；傳統湯劑；配方顆粒；HPLC；三萜；主成分分析

中藥傳統湯劑（traditional decoction，TD）具有隨證加減的優勢，是我國應用最早、最廣泛的劑型[1]。中藥配方顆粒（dispensing granule of Chinese medicine，DGCM）是應用現代制藥技術將傳統中藥飲片經過提取、濃縮、干燥、制粒、包裝而成的顆粒狀物質，臨方調配成湯劑后即成中藥配方顆粒湯劑（dispensing granule decoction，DGD）[2]。它在保證了傳統湯劑隨證加減的基礎上，規避了傳統湯劑攜帶不便、服用量大等缺點，一定程度上推動了劑型改革創新的進程，促進了中醫藥事業的發展。自1987年提出改革和研究，到2019年《關于中藥配方顆粒品種試點統一標準的公示》（以下簡稱為《公示》）的發布，涉及生產配方顆粒的藥企幾十家，歷經30余年發展，足以彰顯其重要程度[3]。2021年國家衛生健康委員會國家醫保局發布了關于結束中藥配方顆粒試點工作的公告，該公告自2021年11月1日起施行，預示著配方顆粒的生產應用將得到進一步發展。

但目前因中藥成分復雜，大多數中藥仍缺乏科學、統一的質量標準，生產企業各自為政，按照自己制定的標準執行，其成分及藥效是否穩定，是否與傳統湯劑藥效保持一致，依然是亟待深入研究的重點方向。國家食品藥品監督管理局在綜合了生產單位、臨床使用單位、醫生、患者的意見反饋后先后于2015年12月30日、2020年1月4日下發了《中藥配方顆粒管理辦法（征求意見稿）》[4]。而本課題組前期也對黃連、黃柏單味飲片，當歸補血湯等[5-7]經典藥對及復方的傳統湯劑及其配方顆粒湯劑進行了基于HPLC指紋圖譜的對比研究，獲取了單味飲片及復方的傳統湯劑及其配方顆粒湯劑間的差異規律，指導臨床合理用藥并初見成效，但對菌類、礦物、動物、毒物、貴重等特殊類別的單味中藥配方顆粒的研究還涉及較少，且就整體研究領域而言較少檢索到有關于上述特殊類別的單味中藥配方顆粒的研究內容，國家藥典委員會下發的《公示》中，160個中藥品種僅涉及一種菌類中藥靈芝，因此本實驗先從菌類中藥著手，以茯苓為研究對象，開展配方顆粒湯劑與傳統湯劑間的對比研究。

茯苓被稱為“四時神藥”[8]，在《神農本草經》上被列為上品，為多孔菌科真菌茯苓(Schw.) Wolf的干燥菌核，是臨床應用最為廣泛的中藥之一，有“十方九苓”之說[9]，具有利水滲濕、健脾、寧心的功效，可用于水腫尿少、脾虛食少、心神不安等[10]?，F代藥理學研究表明，茯苓具有利尿、抗炎、抗癌、腫瘤抑制及增強免疫的作用[11-13]。茯苓中的三萜類及多糖是其主要活性物質[14-15]，其中茯苓三萜類具有較強的利水、抗癌和調節免疫作用[16-17]。為深入對菌類中藥傳統湯劑與配方顆粒湯劑間的對比研究，研究組將收集到的各15批次的茯苓飲片及茯苓配方顆粒，采用HPLC法建立指紋圖譜，對比茯苓傳統湯劑與配方顆粒湯劑的異同。旨在為特殊類別中藥配方顆粒的一致性評價以及臨床合理用藥，提供更科學、合理的數據參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

FA2004B萬分之一電子天平，上海精科天美科學儀器有限公司；CP225D十萬分之一電子天平，德國Sartorius公司；Agilent1260高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；Agilent G4212-60008外檢測ChemstationA.01.04色譜數據處理系統；TDL-5-A離心機，上海安亭科技儀器廠）；KQ5200DE數控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；MP-201隔膜真空泵，鄭州長城科工貿有限公司。

1.2 試藥

對照品茯苓新酸A（批號CHB190211）、茯苓新酸B（批號CHB180731）、去氫茯苓酸（批號CHB180109）、松苓新酸（批號CHB190216）均來源于成都克洛瑪生物科技有限公司，質量分數均≥98%；對照品去氫土莫酸，批號Z25J10S93909，質量分數≥95%，上海源葉生物科技有限公司；對照品豬苓酸C，批號ST20170205，質量分數≥95%，上海詩丹德標準技術服務有限公司。甲醇、乙腈、磷酸均為色譜純，德國默克股份兩合公司；娃哈哈純凈水。

1.3 樣品

15批茯苓飲片分別購自于鄭州5家中醫院和3家藥店，經河南中醫藥大學第一附屬醫院陳天朝主任藥師鑒定均為(Schw.) Wolf的干燥菌核的炮制品。茯苓配方顆粒分別購自于四川新綠色藥業科技發展有限公司、華潤三九醫藥股份有限公司、江陰天江藥業有限公司、北京康仁堂藥業有限公司、廣東一方制藥有限公司5個生產企業，以下用A、B、C、D、E廠代表，茯苓飲片及配方顆粒信息見表1。

2 方法與結果

2.1 茯苓飲片與茯苓配方顆粒指紋圖譜的建立

2.1.1 色譜條件 色譜柱為Agilent 5 HC-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫：0～20 min，45%～52%乙腈；20～40 min，52%～55%乙腈；40～60 min，55%～70%乙腈；60～70 min，70%～100%乙腈；70～80 min，100%乙腈；80.01～90 min，45%乙腈；體積流量0.8 mL/min；柱溫40 ℃；檢測波長242 nm；進樣量20 μL；理論塔板數以去氫茯苓酸的峰面積計算≥6 000。

表1 茯苓飲片及配方顆粒樣品信息

2.1.2 對照品溶液的制備

（1）去氫茯苓酸對照品溶液：精密稱取去氫茯苓酸對照品適量，用甲醇溶解，分別制得含去氫茯苓酸0.354、0.177 mg/mL的對照品溶液，備用。

（2）混合對照品溶液：分別精密稱量茯苓酸A、茯苓酸B、去氫茯苓酸、去氫土莫酸、豬苓酸C、松苓新酸對照品，加甲醇溶解，配制成含有茯苓酸A 0.112 mg/mL、茯苓酸B 0.109 mg/mL、去氫茯苓酸0.101 mg/mL、去氫土莫酸0.105 mg/mL、豬苓酸C 0.108 mg/mL、松苓新酸0.110 mg/mL的混合對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備

（1）茯苓飲片醇提供試品溶液：分別精密稱量f1～f15茯苓飲片粉末（過四號篩）各5 g，加25 mL 95%乙醇至錐形瓶中，精密稱定，超聲45 min，后放置至室溫并補足減失的質量，混勻，濾過，量取濾液15 mL并蒸干，用95%乙醇溶解并定容至5 mL量瓶中，過0.45 μm微孔濾膜，即得茯苓飲片醇提供試品溶液，分別標記為S1～S15。

（2）茯苓配方顆粒醇提供試品溶液：依次稱量各廠家配方顆粒294.1、500.0、500.0、2 994.0、250.0 mg（均相當于茯苓飲片5 g），按照上述方法制備茯苓配方顆粒醇提供試品溶液，分別標記為DGCM1～DGCM15。

2.1.4 方法學驗證

（1）精密度試驗：精密吸取S1樣品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件連續進樣6次，結果各共有特征峰的相對保留時間RSD值在0.05%～0.20%，相對峰面積RSD在0.85%～2.15%；去氫茯苓酸保留時間的RSD為0.07%，峰面積RSD為0.91%，結果表明儀器精密度良好。

（2）穩定性試驗：精密吸取S1供試品溶液，分別于0、3、6、9、12、48 h按“2.1.1”項下色譜條件進樣。結果各共有特征峰的相對保留時間RSD值在0.06%～0.21%，相對峰面積RSD在0.86%～1.95%；去氫茯苓酸保留時間的RSD為0.07%，峰面積RSD為0.86%，結果表明供試品溶液在48 h內穩定。

（3）重復性試驗：取同一批樣品（f1），按照按“2.1.3”項下方法制備6份供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件進樣分析。結果各共有特征峰的相對保留時間RSD在0.06%～0.21%，相對峰面積RSD在1.10%～1.70%；去氫茯苓酸保留時間的RSD為0.07%，質量分數的RSD為0.86%，表明該方法重復性良好。

（4）加樣回收率試驗：精密量取已測定指標成分含量的S1樣品6份，每份2.5 g，精密加入去氫茯苓酸0.632 mg/mL對照品溶液1 mL，按照“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件進行測定，計算回收率，結果去氫茯苓酸的平均回收率為102.94%，RSD為0.13%。

（5）線性關系考察：精密吸取去氫茯苓酸對照品溶液，制得質量濃度分別為354、177、44、11、2.8、0.17 μg/mL的對照品溶液。取上述系列對照品溶液，依次進樣20 μL，以對照品溶液的質量濃度為橫坐標（），色譜峰峰面積為縱坐標（），進行線性回歸，得回歸方程為＝31 979＋6.310 5，＝0.999 9，結果表明去氫茯苓酸在0.17～354 μg/mL與其峰面積呈良好線性關系。

2.1.5 茯苓飲片與配方顆粒HPLC指紋圖譜建立

（1）對照品HPLC色譜圖：吸取“2.1.2”項下的混合對照品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件進行測定，混合對照品的HPLC色譜圖見圖1-a。

（2）茯苓飲片HPLC指紋圖譜：取“2.1.3”項下15批茯苓飲片醇提供試品，按“2.1.2”項下色譜條件測定，記錄色譜圖，構建HPLC指紋圖譜。共有19個共有峰，結果見圖1-b。

（3）茯苓配方顆粒HPLC指紋圖譜：取“2.1.3”項下15批茯苓配方顆粒醇提供試品溶液，按“2.1.1”色譜條件檢測，記錄色譜圖，構建HPLC指紋圖譜。因產自B廠的編號為4～6批次的配方顆粒醇提供試品未檢出特征峰，因此構建指紋圖譜時將該3個批次剔除，其他13個批次色譜圖構建指紋圖譜，共有4個共有峰，結果見圖1-c。

2.2 茯苓飲片TD與茯苓DGD指紋圖譜的建立

2.2.1 茯苓飲片TD與茯苓DGD的制備

（1）茯苓飲片TD的制備：為反映真實世界中傳統湯劑與配方顆粒的差距所在，經小組對傳統湯劑的制備指導原則的調研結果，特將本實驗中傳統湯劑的制備方法確定為由3位不同的實驗人員進行傳統湯劑的制備。分別取約200 g的茯苓飲片按照傳統的煎藥方法進行樣品的制備，合并兩次煎藥液，濾布濾過，放冷，定容至1000 mL，混勻，即得，備用。

（2）茯苓DGD的制備：依次精密稱量各廠家配方顆粒294.1、500.0、500.0、299.4、250.0 mg（均相當于茯苓飲片5 g），加20 mL熱水使溶解，放至冷卻，用水定容至25 mL，攪拌混勻使其全部溶解，放冷，即得，備用。

2.2.2 茯苓TD供試品溶液與茯苓DGD供試品溶液的制備

（1）茯苓TD供試品溶液的制備：精密量取10 mL“2.2.1”項下茯苓TD溶液至25 mL量瓶中，加無水乙醇定容至25 mL，混勻，靜置，取上清液過0.45 μm的微孔濾膜，即得，標記為TD1～TD15。

（2）茯苓DGD供試品溶液的制備：精密量取10 mL “2.2.1”項下制備所得茯苓DGD溶液至25 mL量瓶中，加無水乙醇定容至25 mL，混勻，靜置，取上清液過0.45 μm的微孔濾膜，即得，標記為DGD1～DGD15。

2.2.3 方法學驗證

（1）精密度試驗：精密量取DGD9供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件連續進樣6次測定。結果，各共有特征峰的相對保留時間無明顯變化，RSD集中在0.11%～0.32%；相對峰面積RSD集中在1.66%～3.88%；去氫茯苓酸保留時間的RSD值為0.11%，峰面積的RSD為2.72%，結果表明方法精密度良好。

6-茯苓酸B 8-茯苓酸A 9-去氫土莫酸 11-豬苓酸C 13-去氫茯苓酸 14-松苓新酸

（2）穩定性試驗：精密量取DGD9供試品溶液，分別于制備后0、3、6、9、12、24 h按“2.1.1”項下色譜條件進樣。結果，各共有特征峰的相對保留時間無明顯變化，RSD集中在0.11%～0.32%；相對峰面積RSD集中在1.66%～3.88%；去氫茯苓酸保留時間的RSD值為0.11%，峰面積的RSD為2.72%，結果表明供試品溶液至少于24 h以內穩定性良好。

（3）重復性試驗：精密量取DGD9茯苓配方顆粒粉末，按“2.2.2”項下方法制備6份，按“2.1.1”項下色譜條件進樣。結果，各共有特征峰的相對保留時間無明顯變化，RSD集中在0.11%～0.24%；相對峰面積RSD集中在1.22%～4.93%；去氫茯苓酸保留時間的RSD值為0.11%，峰面積RSD為1.22%，結果表明方法重復性良好。

（4）加樣回收率試驗：精密量取已知含量的DGD9茯苓配方顆粒粉末6份，每份相當于茯苓飲片2.5 g，精密加入去氫茯苓酸0.032 mg/mL對照品溶液1 mL，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液6份，按“2.2.1”項下色譜條件進行測定，并計算回收率。去氫茯苓酸對照品的平均加樣回收率為91.93%，RSD為2.57%。經《中國藥典》2020年版四部[11]可查，當樣品中待測成分含量低于0.01%時，回收率限度可適當放寬至85%～110%，因此該加樣回收率符合標準。

2.2.4 茯苓飲片TD與茯苓DGD指紋圖譜建立

（1）茯苓飲片TD指紋圖譜的建立：取“2.2.2”項下茯苓飲片TD供試品溶液共15批，按“2.1.1”項下色譜條件測定，記錄色譜圖，構建HPLC指紋圖譜（圖2）。結果顯示15批茯苓飲片TD供試品中除溶劑峰以外均未檢測出特征峰。

（2）茯苓DGD指紋圖譜的建立：按照“2.2.2”項下15批茯苓DGD供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件測定，記錄色譜圖，構建HPLC指紋圖譜。因產自B廠的編號為4～6批次的DGD供試品中未檢測出特征峰，因此構建指紋圖譜時將該3個批次剔除，其他13個批次色譜圖構建指紋圖譜，共有3個共有峰，結果見圖3。

2.3 茯苓飲片與配方顆粒的比較

2.3.1 已知峰含量測定及比較 采用外標法分別計算15批飲片及15批配方顆粒醇提供試品中去氫茯苓酸的含量，以去氫茯苓酸為內參物，計算茯苓酸B、茯苓酸A、去氫土莫酸、豬苓酸C、松苓新酸的相對校正因子（f/s），相對校正因子結果為茯苓酸B/去氫茯苓酸＝0.552，茯苓酸A/去氫茯苓酸＝0.852，去氫土莫酸/去氫茯苓酸＝2.604，豬苓酸C/去氫茯苓酸＝1.822，松苓新酸/去氫茯苓酸＝0.643，采用一測多評法[18]計算15批配方顆粒及15批飲片醇提供試品中茯苓酸B、茯苓酸A、去氫土莫酸、豬苓酸C、松苓新酸的含量，運用檢驗評價茯苓配方顆粒不同供試品中已知峰含量與茯苓飲片的差異，其中B廠未檢測出三萜類指標性成分，結果見表2。結果表明，茯苓飲片中已知成分含量較5個廠家配方顆粒的高，各廠家間已知成分含量間具有顯著差異（＜0.05）。

圖2 茯苓TD1供試品色譜圖

圖3 茯苓DGD供試品指紋圖譜

表2 茯苓飲片與配方顆粒醇提供試品中茯苓酸B、茯苓酸A、去氫土莫酸、豬苓酸C、去氫茯苓酸、松苓新酸含量比較()

與飲片比較：*＜0.05**＜0.01

*< 0.05，**< 0.01decoction pieces

2.3.2 所有峰及已知峰總峰面積比較 將15批飲片醇提供試品色譜圖中所有峰及已知峰總峰面積的均值定為1（100%），采用歸一化法求得5個廠家配方顆粒醇提供試品所有峰及已知峰總峰面積的相對值。結果顯示，A、B、C、D、E廠配方顆粒醇提供試品中總成分含量的相對總和比值分別為4.71%、0.49%、4.52%、49.58%、3.41%，已知成分含量的相對總和比值分別為5.99%、0.00%、6.03%、51.69%、4.31%，說明A、B、C、D、E廠配方顆粒醇提供試品中總成分含量及已知成分含量均低于飲片醇提供試品。

2.3.3 校正分析 以茯苓飲片醇提供試品信息為標準，以指標成分及所有成分分別采用峰面積加和法[5]計算5個廠家配方顆粒臨床推薦當量的校正系數（當量即為使用劑量）。

采用峰面積加和法，以4個指標成分（去氫土莫酸、豬苓酸C、去氫茯苓酸、松苓新酸）進行校正系數的計算。首先計算得各廠家4個指標成分峰面積之和的平均值，后求得其與飲片醇提供試品中4個指標成分峰面積之和均值的比值，即校正系數，后依次計算各廠實際當量，結果見表3。

采用峰面積加和法，以所有成分進行校正系數的計算。首先計算得各廠家所有峰峰面積之和的平均值，后求得其與飲片醇提供試品中所有峰峰面積均值的比值，即校正系數，各廠校正系數依次為A廠0.047，B廠0.005，C廠0.045，D廠0.496，E廠0.034，本實驗計算當量依次為：A廠1∶0.8，B廠1∶0.05，C廠1∶0.5，D廠1∶0.8，E廠1∶0.7，建議在臨床推薦當量上做相應調整。

表3 配方顆粒中4個指標成分校正系數(峰面積加和法)

2.4 茯苓TD與茯苓DGD比較

2.4.1 已知峰含量測定及比較 采用外標法分別計算15批配方顆粒DGD供試品中去氫茯苓酸的含量，以去氫茯苓酸為內參物同“2.3.1”項下一測多評法計算15批配方顆粒DGD供試品中茯苓酸B、茯苓酸A、去氫土莫酸、豬苓酸C、松苓新酸的含量，運用檢驗評價茯苓配方顆粒不同供試品中已知峰含量與茯苓飲片的差異，如表4所示，TD和B廠中未檢測出三萜類指標性成分，各廠家茯苓DGD供試品中三萜類指標性成分含量具有較大差異：含有指標性成分的A、C、D、E 4個配方顆粒廠家中，D廠、E廠的多數成分相對較高，A廠各成分相對均衡，而C廠部分指標性成分缺失。說明B廠配方顆粒制備工藝與傳統湯劑制備工藝相近，不同廠家配方顆粒質量參差不齊，可能與不同廠家所用飲片質量不一致有關，如藥材原產地、藥材采集時間、飲片炮制工藝以及飲片貯存方式的不同。茯苓DGD組與配方顆粒醇提組相比，說明兩種不同的供試品制備方法對三萜類成分的轉化率影響不大。

表4 茯苓TD與DGD供試品中茯苓酸B、茯苓酸A、去氫土莫酸、豬苓酸C、去氫茯苓酸、松苓新酸含量比較()

與TD比較：*＜0.05**＜0.01

*< 0.05**< 0.01TD

2.4.2 所有峰及已知峰總峰面積比較 將D廠3批DGD色譜圖中所有峰及已知峰總峰面積的均值分別定為1（100%），采用歸一化法求得TD及其他4個廠家DGD供試品中所有峰及已知峰總峰面積的相對值。結果顯示TD、A、B、C、E廠DGD中總成分含量的相對總和比值分別為3.90%、12.38%、1.97%、10.47%、8.57%，已知成分含量的相對總和比值分別為0.00%、12.08%、0.00%、9.00%、8.54%，說明TD、A、B、C、E廠DGD中總成分及已知成分含量總和均低于D廠。

2.4.3 各廠家配方顆粒質量比較 主成分分析（principal component analysis，PCA）可對復雜信息中的多變量進行快速提取、降維分析，通過降維可排除眾多化學信息中相互重疊的信息，生成新的綜合變量即主成分，經投影處理后，樣本最終落在主成分組成平面上的位置，即可表征不同樣本的總體信息[19-21]。本研究以15批茯苓配方顆粒DGD供試品中茯苓酸B、茯苓酸A、去氫土莫酸、豬苓酸C、去氫茯苓酸及松苓新酸的含量為變量，采用多元變量統計軟件SIMCA 14.1進行PCA。以15批茯苓配方顆粒DGD供試品中茯苓酸B、茯苓酸A、去氫土莫酸、豬苓酸C、去氫茯苓酸及松苓新酸的含量為坐標軸構建主成分平面，將樣本的多元變量通過降維的方式投影在二維平面上，以觀察樣本的整體分布情況和各變量對樣本分布的貢獻大小，結果見圖4。由圖4可看出，不同廠家樣品出現明顯的分類，D、E廠的3個批次間分布最分散，表明2廠不同批次配方顆粒原料藥材質量不一致或生產工藝不穩定，A廠相對集中，表明2個廠家的配方顆粒質量相對比較穩定，而C廠最為集中，說明該廠配方顆粒質量最穩定。

圖4 配方顆粒PCA分析散點圖

3 討論

3.1 傳統湯劑與配方顆粒湯劑對比時原料來源一致性探討

實驗所用載體為臨床處方用量較大、頻率較高的茯苓，旨在研究單味中藥茯苓傳統湯劑與配方顆粒湯劑二者之間的差異規律，包括二者成分上的異同或含量多少的差異。理論上，實驗所用飲片應與市售配方顆粒原材料保持一致；但本實驗設計初衷是基于對“真實世界”臨床用藥的考量，故選擇不做過多主觀人為干預，不刻意保持批號的對應和統一。原因在于：一方面，不同廠家所用飲片與在醫院、藥店所購得飲片其質量檔次上相差很大；另一方面，若選用自購飲片制備自制顆粒，則存在實驗室的制備過程與成型化的工業大生產間存在較大差距，得出的結論并不足以指導臨床。因此，本實驗選擇不同批次飲片和配方顆粒，目的是為了所得出的結論更能反應臨床實際。

3.2 茯苓TD與茯苓DGD的制備工藝比較

因三萜類成分本不溶于水[22]，15批TD供試品中未檢測到三萜類指標性成分，而12批DGD供試品中有3個三萜類指標性成分，DGD、配方顆粒醇提供試品中均檢測出含有三萜類成分，表明除B廠以外的4個配方顆粒生產企業采用了不同于傳統湯劑的提取工藝，以保證配方顆粒的質量，經現有茯苓配方顆粒專利查詢[23-27]可以預測這4個廠家在制備配方顆粒過程中，D廠各指標成分含量均較高，可能采用了區別于傳統湯劑制備所用的溶媒提取茯苓飲片得到了浸膏，并將浸膏與飲片原粉混合后制備得到配方顆粒；A廠及E廠指標成分含量相對均衡，可能是這兩廠在制備過程中采用飲片超微粉代替輔料與水提所得浸膏混合制粒；而C廠某些指標成分缺失，考慮其制備工藝與其他廠家存在差異，而B廠可能是在“遵古”的指導思想下，以水提物制粒，因此未檢測出三萜類指標性成分。PCA結果顯示C廠最為集中，A廠相對集中，D、E廠3個批次間分布最分散，表明同一廠家不同批次間配方顆粒質量不一，這可能與原藥材飲片質量不一致，配方顆粒生產廠家制備工藝不穩定有關。以上分析表明現代配方顆粒在制備工藝上并未完全遵古，不同配方顆粒生產廠家的制備工藝存在差異，這些對于保證臨床一致性是不利的，因此有關配方顆粒的制備工藝仍待進一步探討。

3.3 茯苓飲片及其配方顆粒用法芻議

《圣濟總錄》中茯苓散以溫酒調服治療男子小便余瀝不盡，《普濟方》中以桑螵蛸、龍骨、茯苓為末制得的鎖陽丹經米飲調服治療膀胱疾；《傷寒論》及《金匱要略》中含茯苓的方劑經統計歸納，共36首[28]，入湯劑22首，散劑7首，丸劑7首，其中散劑、丸劑多米飲、酒送服，取茯苓利水之功，湯劑水煎后去滓服用則多奏健脾、安神之效，表明茯苓的傳統用法與功效間存在一定的規律性，制法和用法不同，療效也不盡相同。另外，當茯苓與桂枝、干姜、澤瀉配伍時，多主利水，如五苓散；與白術、半夏配伍主健脾，如理中丸；與人參配伍主健脾安神，如茯苓四逆湯，表明在不同的用藥配伍中茯苓所主功效也有不同。

細野史郎等[29]匯總了近些年茯苓利尿作用的藥理實驗結果，發現家兔口服茯苓水性顆粒劑后無利尿作用，健康志愿者服用茯苓后利尿效果也不盡如人意，表明茯苓單煎的利水作用不強?，F代臨床試驗結果表明，茯苓貼敷神闕穴可顯著降低內痔術后尿潴留發生率[30]?，F代有實驗人員將茯苓打粉后加水回流提取、濾布過濾、濃縮得浸膏后，所得茯苓水提物粉末經甲醇超聲得供試品溶液，后采用UPLC法檢測到三萜類成分并建立了指紋圖譜[31]，但該供試品制備是將茯苓飲片打粉后制備，該操作可能會使茯苓粉末隨濾液通過濾布一同濾出，而本實驗目的是進行茯苓配方顆粒湯劑與茯苓傳統湯劑的對比研究，在最大程度上與傳統湯劑的制備保持一致，因此茯苓傳統湯劑以茯苓飲片直接加水進行煎煮，實驗結果茯苓傳統湯劑中未檢測到三萜類成分，而飲片醇提供試品中檢測到該類成分，實驗人員隨后對傳統湯劑煎煮后的藥渣進行處理，最終在藥渣醇提供試品中檢測到了三萜類成分，再次佐證了水提不能使茯苓中的三萜類成分溶出。結合傳統用法可推測：一方面，現代臨床使用茯苓飲片及配方顆粒時應依據病證，選擇合理劑型或能達到最佳用藥目的，例如將茯苓制散劑以水、米飲、溫酒送服或能使其利尿功效達到最佳；另一方面，茯苓單煎其三萜類成分不易溶出，但與其他藥物合煎，可能會使其溶出，此方面內容有待實驗進一步確認。

3.4 指標性成分種類的選擇探討

茯苓為利水滲濕藥，三萜類及多糖是其主要活性物質，其中茯苓三萜類具有較強的利水作用，針對其利水這一主要功效，研究其與利水功效相關的代表成分，更具針對性和研究意義，因此本實驗以三萜類化學成分為指標性成分進行茯苓配方顆粒湯劑和傳統湯劑間的比較。但茯苓所含多糖也是其主要活性物質[14-15]之一，具有調節機體免疫力、抗炎、抗氧化、抗腫瘤、保肝等藥理活性[32]，目前對于茯苓多糖的含量測定方法已十分成熟[33-35]，但對于茯苓傳統湯劑及配方顆粒湯劑的多糖測定涉及較少，如何消除配方顆粒中多糖類輔料對茯苓多糖測定的影響是開展茯苓傳統湯劑及配方顆粒湯劑多糖類化學成分對比研究需要重點關注的問題，本課題組后期將對這一問題進行深入的研究，旨在進一步為茯苓配方顆粒乃至茯苓飲片的合理應用提供更為系統和科學的依據。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Comparative study on chemical constituents oftraditional decoction and formula granule decoction

YUE You-song1, ZHANG Lu2, XIE Meng-di1, WANG Ke-han2, ZHANG Pu1, ZHANG Hui-jie1, WANG Yan-li2, GUI Xin-jing2, 3, 4, SHI Jun-han2, 3, 4, YAO Jing2, 3, 4, LIU Rui-xin2, 3, 4, LI Xue-lin2, 3, 4

1. Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450008, China 2. Department of Pharmacy, The First Affiliated Hospital of Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450000, China 3. Henan Engineering Research Center for Modernization of Clinical Application of Chinese Herbal Pieces, Zhengzhou 450000, China 4. Collaborative Innovation Center for Prevention and Treatment of Respiratory Diseases with Traditional Chinese Medicine, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450000, China

Takingas the research object and to performs a comparative study on the chemical constituents in its traditional decoction and dispensing granule, so as to provide references for rational clinical application ofdispensing granule.Fifteen batches ofdecoction pieces from different producing areas or batches and three batches of dispensing granule from five manufacturers were selected. Then the HPLC fingerprints of decoction pieces and dispensing granule were established, which was used to be evaluated from three aspects: the kinds of chemical components of triterpenoid, the content of index components of triterpenoid and the sum of all peak areas. Moreover, the data was statistically analyzed by principal component analysis.The kinds of chemical components of triterpenoid: index components of triterpenoid were not detected in traditional decoction ofdecoction pieces while more than three kinds of index components of triterpenoids were found in the decoction of dispensing granule provided by most manufacturers. The above components were not detected in only one manufacturer which has the same situation like the traditional decoction ofdecoction pieces. The content of index components of triterpenoid: in terms of the content of index components of triterpenoid, there are great differences indispensing granule from the four manufacturers, namely, manufacture A, C, D, and E. Among them, manufacturer D and E have higher content in most components; Manufacturer A had relatively balanced content of each ingredient; While some index components were absent in manufacturer C. Sum of all peak areas: The sum of all peak areas of dispensing granule decoction in manufacturer D was set as 100%, compared with it, all the peak areas in traditional decoction were 3.90%, manufacturer A 12.38%, manufacturer B 1.97%, manufacturer C 10.47%, and manufacturer E 8.57%. The results of principal component analysis showed that the quality of different batches in the same manufacturer was different. The extent of quality in the three batches of plant C was mostly concentrated, plant A was relatively concentrated, and plant D and E were the most dispersed.There are obvious differences in the types of triterpenoids between the traditional decoction and dispensing granule decoction ofdecoction pieces. The kinds, content and batches stability of triterpenoids are also different among every manufacturer’sdispensing granule decoction, which suggests that the preparation process of dispensing granule is not identical in each manufacturer and the researchers should further discuss the preparation process and rational application ofdispensing granule andpieces.

(Schw.) Wolf; traditional decoction; dispensing granule; HPLC; triterpenes; principal components analysis

R283.6

A

0253 - 2670(2021)13 - 3852 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.13.009

2021-03-08

國家自然科學基金面上項目（81773892）；河南省首批自然科學基金面上項目（162300410187）；河南省高等學校重點科研項目（16A360021）；河南省中醫藥科學研究專項課題（2016ZY2055）；河南省中醫管理局國家中醫臨床研究基地科研專項（2018JDZX039）；河南省中醫藥拔尖人才培養項目資助（2019ZYBJ07）；河南省衛生健康中青年學科帶頭人專項（HNSWJW- 2020014）

岳佑?。?996—），女，碩士研究生，主要從事中藥飲片臨床應用現代化關鍵技術研究。Tel: (0371)66245142 E-mail: xuelinli450000@163.com

李學林（1960—），男，教授，博士生導師，主任藥師，主要從事中藥應用形式研究。Tel: (0371)66245142 E-mail: xuelinli450000@163.com

劉瑞新（1980—），男，博士，碩士研究生導師，主任藥師，從事中藥飲片臨床應用現代化關鍵技術研究。Tel: (0371)66233562 E-mail: liuruixin7@163.com

[責任編輯 鄭禮勝]