基于偏頭痛藥效優化青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑的成型工藝及其安全性評價

袁瑞芳，楊金輝，章津銘，賀亞男，任 涵，張定堃*，楊 明

基于偏頭痛藥效優化青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑的成型工藝及其安全性評價

袁瑞芳1，楊金輝2，章津銘1，賀亞男1，任 涵1，張定堃1*，楊 明3*

1. 成都中醫藥大學藥學院，西南特色中藥資源國家重點實驗室，四川 成都 611137 2. 四川百草精工生物科技有限公司，四川 成都 610000 3. 江西中醫藥大學，江西 南昌 330004

基于偏頭痛藥效研究優化青花椒超臨界提取部位熱熔壓敏膠貼劑成形工藝，并對貼劑安全性進行評價。以均勻性、涂展性、滲布程度、皮膚追隨性、剝離性、反復揭貼性、殘留量等感官評價及初黏力、持黏力、剝離強度為指標，采用單因素試驗與Box-Behnken設計-響應面法對熱熔壓敏膠基質配比進行篩選；采用在體動物評價法，以硝酸甘油型偏頭痛大鼠撓頭次數為指標篩選貼劑載藥量；另外采用小鼠急性毒性試驗、家兔皮膚刺激性試驗及豚鼠皮膚過敏性試驗評價青花椒超臨界提取部位熱熔壓敏膠貼劑的安全性。熱熔壓敏膠貼劑的最佳基質處方為苯乙烯-異戊二烯-苯乙烯（SIS）彈性體-氫化石油樹脂-液體石蠟4∶2∶5；青花椒超臨界提取部位貼劑可明顯減少硝酸甘油型偏頭痛大鼠的撓頭次數，70 mg/貼載藥量組在30～60 min可將大鼠撓頭次數降低81.75%，優選為最佳載藥量；該貼劑對小鼠無急性毒性，對新西蘭兔完整皮膚和破損皮膚有輕微刺激性，6 h內自行消除，對豚鼠無過敏性。該工藝制備的青花椒超臨界提取部位熱熔壓敏膠貼劑感官性能好，黏附力強，且安全有效。

青花椒；超臨界提取部位；熱熔壓敏膠；貼劑；偏頭痛；成型工藝；安全性評價；Box-Behnken設計-響應面法；急性毒性；皮膚刺激性；皮膚過敏性

青花椒為蕓香科花椒屬植物青花椒Sieb. et Zucc.的干燥成熟果皮[1]，與紅花椒統稱花椒，具有溫中散寒止痛、殺蟲止癢的功效，在西南地區廣泛分布。《藥性論》記載：花椒“治頭風下淚”，中醫學的“頭風”包含了現代醫學的偏頭痛[2]，民間亦有使用花椒治療偏頭痛的用法[3]。在傳統本草中，花椒主要用于止痛，現代多項藥理研究也證實了其鎮痛作用[4-5]，但對花椒的抗偏頭痛作用研究甚少。研究表明青花椒的鎮痛效應與持續時間均大于紅花椒，毒性低于紅花椒[6-7]，基于此，本課題組前期對青花椒治療偏頭痛的療效進行研究，證實外用青花椒超臨界提取部位可明顯緩解大鼠偏頭痛癥狀。

透皮給藥是中醫內病外治的經典用法之一[8]，具有避開肝臟首過效應、減少胃腸道刺激、降低給藥次數及提高患者用藥順應性等優勢[9-10]，國內外已有多種透皮貼劑的上市產品，臨床應用普遍[11]。熱熔壓敏膠是繼溶劑型和乳液型壓敏膠之后的第3代壓敏膠產品，一般由彈性體、增黏樹脂、增塑劑、填料和抗氧化劑組成[12]，因其無有機溶劑添加[13]，無刺激性[14]，在熔融狀態下涂布，迅速冷卻固化后輕度指壓即能粘接，黏附及剝離性好，不污染被粘物表面[15]，故在透皮給藥體系中應用廣泛[12,16]。熱熔壓敏膠基質不含活性官能團，可減少基質和藥物之間的相互作用，現作為一種釋藥性能良好的骨架型藥物儲庫被使用[17]。此外，該基質的各種成分均為非極性，親脂性強，制備過程中不需要烘箱固化交聯，故尤其適合用于制備含有易揮發性藥物的貼劑[18-19]，與本實驗青花椒藥用部位性能契合。基于以上研究，本課題組擬將青花椒超臨界提取部位開發為一款緩解偏頭痛的熱熔壓敏膠透皮給藥貼劑，使其成為易給藥、易揭貼、起效迅速、安全無毒的局部給藥產品，促進防治偏頭痛產品的創新[20]，為青花椒藥用價值發掘提供示范，推動西南特色中藥資源開發利用。

1 儀器與材料

1.1 儀器

SFE230-50-06 CO2超臨界提取裝置，海安華達石油儀器有限公司；XKR-XB320D實驗室自動涂布機，常州德社精密儀器有限公司；BLD-200N電子剝離試驗機、CZY-G初黏力測試儀、CZY-6S持黏力測試儀，濟南蘭光機電技術有限公司。

1.2 供試藥與輔料

干青花椒果皮于2019年購自四川新荷花中藥飲片股份有限公司，經成都中醫藥大學許潤春副教授鑒定為蕓香科花椒屬植物青花椒Sieb. et Zucc.的干燥飲片。對照品檸檬烯（批號DSTDN003701）、芳樟醇（批號DST200618-041質量分數），質量分數均≥97%，均購自成都德思特生物技術有限公司；苯乙烯-異戊二烯-苯乙烯（SIS）彈性體，批號D1163，購于美國科騰聚合物有限公司；C5氫化石油樹脂，購于深圳市吉田化工有限公司；液體石蠟，購于上海化學試劑有限公司。

1.3 動物

SPF級SD大鼠60只，體質量220～250 g；SPF級昆明小鼠40只，體質量18～22 g；新西蘭家兔8只，體質量2.0～2.2 kg；白色豚鼠30只，體質量260～280 g；所有動物雌雄各半，均由成都達碩實驗動物有限公司提供，合格證號SCXK（川）2020- 030，檢疫后備用。動物實驗經成都中醫藥大學醫院動物實驗倫理委員會批準（批準號2019KY-082）。

2 方法與結果

2.1 青花椒超臨界提取物的制備

稱取青花椒2 kg，打粉后過10目篩，裝入超臨界CO2萃取裝置中，萃取壓力26 MPa，溫度60 ℃，解析壓力7 MPa，溫度55 ℃，CO2體積流量3 L/h，萃取6 h后得藥用部位。萃取得到的青花椒超臨界提取部位呈墨綠色，有較濃清香味，流動性好，萃取率為12.3%。

2.2 青花椒超臨界提取物的GC-MS分析

2.2.1 供試品溶液的制備 取上述提取的青花椒超臨界提取物1 mL置于10 mL量瓶中，超聲10min，0.45 μm微孔濾膜濾過制得樣品，平行3份。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密吸取檸檬烯對照品10 μL于10 mL量瓶中，經稱量為9.68 mg，加入醋酸乙酯定容，配制成質量濃度為0.968 mg/mL的檸檬烯對照品溶液；精密吸取芳樟醇對照品10 μL于10 mL量瓶中，經稱量為9.45 mg，加入醋酸乙酯定容，配制成質量濃度為0.945 mg/mL的芳樟醇對照品溶液。

2.2.3 色譜條件 色譜柱為HP-5毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；采用程序升溫方法：60 ℃維持2 min，5 ℃/min升至200 ℃，停留5 min，最后10 ℃/min升至260 ℃，停留0 min，運行時間41 min；載氣為高純氦氣，體積流量1 mL/min，壓力86.440 kPa（12.537 psi），氣化室溫度為280 ℃，分流比100∶1，進樣量1 μL。

2.2.4 質譜條件 電離方式為EI源，電子能量為70 eV，離子源溫度為230 ℃，四級桿溫度150 ℃。結果如圖1所示，經GC-MS分析，青花椒超臨界提取物中共鑒定出31種成分，其中豐度最高的為芳樟醇，占比達到74.16%，質量濃度為13.57 mg/mL，其次為檸檬烯，占比5.45%，質量濃度為1.75 mg/mL。

圖1 芳樟醇(a)、檸檬烯(b) 對照品及青花椒超臨界提取物(c)的總離子流圖

2.3 空白基質的制備

根據預實驗，熱熔壓敏膠空白基質的初始制備方法為SIS彈性體6 g、C5石油樹脂3 g及液體石蠟6 g加入坩堝中，電熱套升溫至120 ℃，至混合物完全熔化、攪拌均勻，倒出涂布于無紡布上，冷卻后加蓋防粘紙，剪成3 cm×4 cm，備用。

2.4 評價指標與檢測方法

2.4.1 感官評價 以均勻性、涂展性、滲布程度、皮膚追隨性、剝離性、反復揭貼性與殘留量的多指標綜合評價總分為指標[8,21]，評價標準如表1所示。

2.4.2 初黏力 采用《中國藥典》2020年版四部通則（0952黏附力測定法）中載入的滾球斜坡停止法測定熱熔壓敏膠貼劑的初黏力。選用適宜的系列鋼球分別滾過置于傾斜板上的供試品黏性面，根據供試品黏性面能夠粘住的最大球號鋼球，評價其初黏力的大小，球號越大，初黏力越大。根據被粘住的球號進行評分，分值范圍為0～10分。

2.4.3 持黏力 采用《中國藥典》2020年版四部通則（0952黏附力測定法）中載入的持黏力測定法測定熱熔壓敏膠貼劑的持黏力。將供試品黏性面粘貼于試驗板表面，垂直放置，沿供試品的長度方向懸掛一規定質量的砝碼，記錄供試品滑移直至脫落的時間，時間越長，持黏力越大。根據供試品脫落的時間進行評分，分值范圍為0～10分。

2.4.4 剝離強度 采用《中國藥典》2020年版四部通則（0952黏附力測定法）中載入的180°剝離強度試驗法測定熱熔壓敏膠貼劑的剝離強度。將供試品背襯用雙面膠固定在試驗板上，黏性面用聚脂薄膜覆蓋，將聚酯薄膜對折（180°），把薄膜自由端和試驗板分別上、下夾持于試驗機上，實驗機以300 mm/min下降速度連續剝離，記錄剝離強度的數值，該值越大表明剝離強度越強。根據剝離強度的數值進行評分，分值范圍為0～10分。

2.4.5 綜合得分 以均勻性、涂展性、滲布程度、皮膚追隨性、剝離性、反復揭貼性、殘留量、初黏力、持黏力和剝離強度評分之和作為貼劑的綜合得分。

2.5 單因素篩選基質處方

2.5.1 SIS彈性體用量篩選 固定C5氫化石油樹脂用量為3 g，液體石蠟用量為6 g，將SIS彈性體的用量設為2、4、6、8、10 g，按“2.3”項下空白基質的制備方法進行制備。通過感官綜合評價，不同劑量SIS彈性體制備的熱熔壓敏膠貼劑的平均綜合得分分別為25.0、44.6、52.6、50.3、47.3。可見，SIS彈性體用量為6 g時，熱熔壓敏膠貼劑的綜合感官較好。

表1 綜合感官評價標準

2.5.2 C5氫化石油樹脂用量篩選 固定SIS彈性體用量為6 g，液體石蠟用量為6 g，將氫化石油樹脂的用量設為1、2、3、4、5 g，按“2.3”項下空白基質的制備方法進行制備。通過感官綜合評價，不同劑量C5氫化石油樹脂制備的熱熔壓敏膠貼劑的平均綜合得分分別為46.3、52.6、52.7、49.9、48.3。可見，C5氫化石油樹脂用量為2～3 g時，熱熔壓敏膠貼劑的綜合感官較好。

2.5.3 液體石蠟用量篩選 固定SIS彈性體用量為6 g，C5氫化石油樹脂用量為3 g，將液體石蠟的用量設為2、4、6、8、10 g，按“2.3”項下空白基質的制備方法進行制備。通過感官綜合評價，不同液體石蠟制備的熱熔壓敏膠貼劑的平均綜合得分分別為44.0、46.6、50.6、52.3、44.6。可見，液體石蠟用量為8 g時，熱熔壓敏膠貼劑的綜合感官較好。

2.6 Box-Behnken設計-響應面法優化基質處方

2.6.1 實驗設計及結果 根據Box-Behnken設計原理和單因素試驗結果，以SIS彈性體用量（1）、氫化石油樹脂用量（2）、液體石蠟用量（3）為自變量，感官評價、初黏力、持黏力和剝離強度的分值總和為響應值，進行3因素3水平15個實驗點的Box-Behnken設計-響應面分析實驗。因素水平及實驗結果如表2所示。

2.6.2 建立模型方程與顯著性檢驗 利用軟件Design-Expert 12.0分析對表2中的數據進行多元回歸擬合分析，得到基質綜合評分與各因素變量的二次方程模型為＝47.464＋7.2321＋17.0022－4.1733－0.52212＋1.11813＋0.3323－1.05112－2.322－0.25532。

回歸模型方差分析結果如表3所示，不同SIS彈性體、氫化石油樹脂及液體石蠟用量對綜合評分交互影響的等高線及響應面圖如圖2所示，＝0.001 7，＝21.83，表明此模型達到顯著水平，失擬項（＝0.6344）不顯著，說明該二次方程能夠較好地擬合真實水平，實驗誤差小，可用此模型對熱熔壓敏膠貼劑基質進行預測。模型一次項1、2高度顯著，3不顯著；交互項13高度顯著，12、23不顯著；二次項12高度顯著，22顯著，32不顯著。根據值可知各基質用量對貼劑基質綜合評分的影響程度依次為1＞2＞3，即SIS彈性體用量＞氫化石油樹脂用量＞液體石蠟用量。

表2 Box-Benhnken設計-響應面法實驗因素水平設計及結果(n = 3)

表3 回歸模型方差分析結果

2.6.3 實驗驗證 設定各成分的變化范圍以及期望響應值，運行Design-Expert 12.0軟件的最優化功能，以各指標綜合結果評分曲面得出的最佳處方組成為SIS彈性體7.885 g，氫化石油樹脂3.520 g，液體石蠟10.000 g，貼劑基質綜合得分的理論值可達88.543。按照最優組合進行了3批驗證試驗。結果3批貼劑的實際綜合評分分別為87.432、85.673、85.491，平均實際綜合評分為86.199，RSD為1.244%，與理論值的接近度為97.35%，因此基于響應面法優化的基質配比準確可靠，熱熔壓敏膠貼劑的最佳基質處方為SIS彈性體-氫化石油樹脂-液體石蠟4∶2∶5。

2.7 載藥量篩選

2.7.1 青花椒超臨界提取部位熱熔壓敏膠貼劑的制備 根據響應面優化結果，取SIS彈性體8 g、氫化石油樹脂4 g、液體石蠟10 g加入坩堝中，電熱套升溫至120 ℃，至混合物完全熔化、攪拌均勻，加入設計量青花椒揮發油攪拌均勻，倒出涂布于無紡布上，冷卻后加蓋防黏紙，剪成3 cm×4 cm，分別制備成每貼含青花椒揮發油17.5、35、70、140 mg的貼劑。試驗過程中，熱熔壓敏膠基質與青花椒超臨界提取物均勻混合，相容性良好，所制備的青花椒超臨界提取部位熱熔壓敏膠貼劑呈淡綠色，有淡清香味，貼敷后的綜合感官及黏附性能與空白基質基本一致。

圖2 不同SIS彈性體、氫化石油樹脂及液體石蠟用量對綜合評分交互影響的等高線及響應面圖

2.7.2 硝酸甘油型偏頭痛大鼠試驗[22]SPF級SD大鼠60只，雌雄各半，適應性飼養3 d，隨機分為6組（＝10），分別為對照組（空白貼劑）、模型組、給藥1組（140 mg/貼）、給藥2組（70 mg/貼）、給藥3組（35 mg/貼）、給藥4組（17.5 mg/貼)。實驗前1 d大鼠背部脫毛。實驗當天除對照組外，各組大鼠后頸背部sc硝酸甘油10 mg/kg復制偏頭痛模型，造模30 min后除模型組外，各實驗組大鼠在背部脫毛處貼敷青花椒揮發油貼劑1次（給藥面積為3 cm×4 cm），從造模開始記錄3 h內不同時間段大鼠的搔頭次數。結果如表4所示。與對照組相比，模型組與給藥組大鼠在給予硝酸甘油后撓頭次數明顯增加（＜0.01），表明急性偏頭痛模型制備成功。與模型組相比，青花椒超臨界提取部位貼劑可明顯減少大鼠撓頭次數（＜0.01、0.05），進一步驗證了青花椒超臨界提取部位的抗偏頭痛作用。

各給藥組之間比較發現，30～60 min隨著載藥量的增加，大鼠撓頭次數逐漸減少（＜0.01），但當載藥量增加至一定限度時，大鼠撓頭次數卻逐漸增加。給藥1組載藥量最大，給藥2組次之，但給藥2組可在30～60 min內最大限度地將大鼠撓頭次數降低81.75%，即抗偏頭痛作用最顯著。60 min起，給藥3、4組大鼠撓頭次數的降低趨勢較于2組更加明顯但4組差異較小。考慮到偏頭痛患者對于治療藥物速效的需求，選擇給藥2組作為貼劑最佳載藥量。

表4 不同給藥劑量貼劑對硝酸甘油型偏頭痛大鼠撓頭次數的影響(, n = 10)

與對照組比較：#＜0.05##＜0.01；與模型組比較：*＜0.05**＜0.01

#< 0.05##< 0.01control group;*< 0.05**< 0.01model group

2.8 青花椒超臨界提取部位熱熔壓敏膠貼劑安全性評價

2.8.1 小鼠急性毒性試驗[23]采用最大給藥量法，取小鼠數只，適應性飼養3 d后背部剃毛4 cm×5 cm，24 h后檢查去毛皮膚是否完整無受傷，挑選皮膚完整無受傷的小鼠進行實驗。

取禁食（不禁水）12 h的小鼠40只，雌雄各半，隨機分為空白雌性對照組（＝10）、空白雄性對照組（＝10）、給藥雌性組（＝10）和給藥雄性組 （＝10）。給藥組給予青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑（140 mg/貼），空白對照組給予等體積的空白基質。將供試品1 d 2次貼于脫毛區，用膠帶固定，用藥24 h后，除去受試物，于30～60 min及24、48、72 h連續觀察至14 d。逐一記錄每只動物體質量變化和反應情況，如有毒性反應，逐一記錄發抖、震顫、流涎、腹瀉、懶動、嗜睡、昏迷等表現，如有死亡或瀕臨死亡的動物進行尸解和病理組織學檢查。實驗結果如表5所示。揭除貼劑后30～60 min及24、48、72 h至14 d。與空白組比較，給藥組小鼠皮毛、眼睛、黏膜、呼吸、糞便及自主活動等均未發現明顯變化，未見發抖、震顫、流涎、腹瀉、懶動、嗜睡、昏迷等中毒表現及死亡情況。各組間小鼠凈增體質量差異無統計學意義，表明該劑量的青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑無急性皮膚毒性反應。

表5 青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑急性毒性實驗結果(, n = 10)

2.8.2 家兔皮膚刺激試驗[24]取成年健康家兔8只，雌雄各半，體質量2.2～2.3 kg。試驗通過完整皮膚左右側同體自身對比進行。于給藥前24 h將家兔背部脊柱兩側毛脫掉，脫毛面積每側約為6 cm×8 cm。隨機分為2組，完整皮膚組和破損皮膚組。完整皮膚組左側去毛區敷給藥制劑3 cm×4 cm大小，右側去毛區敷賦形劑（即不含藥的空白貼片）作為對照。破損皮膚組在左側剃毛皮膚處用砂紙來回擦拭，以皮膚輕微滲血為度，實驗方法同完整皮膚組。連續給藥1周，并于去除受試藥物后1、24、48、72 h內觀察去毛區貼藥部位有無紅斑和水腫等癥狀，以及上述變化的恢復情況與時間，按紅斑和水腫2項指標標準按表6進行評分。計算各組動物刺激反應平均分值，反應平均分值為紅斑形成總分和水腫形成總分和與動物數的平均值，分值在0～0.49為無刺激性，0.50～2.99為輕度刺激性，3.00～5.99為中度刺激性，6.00～8.00為強刺激性。結果如表7和圖3所示。空白基質組在家兔完整皮膚和破損皮膚用藥1周后，在去除藥物1 h內無紅斑和水腫現象，青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑組家兔皮膚出現了輕度紅斑和水腫，但在24 h內自行消除。皮膚刺激程度平均反應值為1.5、2.0，在0.50～2.99，屬于輕度刺激性。

表6 皮膚刺激性反應評分標準

2.8.3 豚鼠皮膚過敏性試驗[25]取健康白色豚鼠30只，雌雄各半，體質量260～280 g，分為基質組、給藥組、陽性藥對照組，每組10只。給藥組給予青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑；基質組給予基質貼劑；陽性對照組給予0.2 mL 1% 2,4-二硝基氯代苯。于給藥前24 h用脫毛劑將豚鼠背部脊柱兩側毛除去，單側去毛面積為4 cm×5 cm。

（1）致敏接觸：給藥組給予青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑、基質組給予空白基質、陽性對照組給予0.2 mL 1% 2,4-二硝基氯代苯在左側脫毛區，用紗布覆蓋并以膠布固定，持續6 h后用溫水清洗殘留藥物，分籠飼養，第7天和第14天以同樣的方式重復，共3次。

表7 青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑皮膚刺激性實驗結果

A-完整皮膚（青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑）組 B-完整皮膚（空白基質）組 C-破損皮膚（青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑）組 D-破損皮膚空白基質組

（2）激發接觸：于末次給藥致敏后第14天，分別將受試物、空白基質和陽性藥物（激發濃度為 0.1% 2,4-二硝基氯代苯）0.2 mL同（1）方法用于3組豚鼠相應的右側受試皮膚，給藥6 h后清除藥物并即刻觀察，然后于清除藥物后24、48、72 h再次觀察皮膚過敏反應情況。結果按表8進行評分并作致敏強度評價。同時，注意觀察豚鼠是否有哮喘，站立不穩等全身性過敏反應。反應平均分值＝(紅斑形成總分＋水腫形成總分)/動物數，致敏反應發生率＝有過敏反應動物數/動物總數，致敏率在0～10%為無致敏性，11%～30%為輕度致敏性，31%～60%為中毒致敏性，61%～80%為高度致敏性，81%～100%為極度致敏性。實驗結果如表9所示。空白基質組未見紅斑、水腫等皮膚變態反應情況，青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑組極少數動物除去藥物后有輕度紅斑和水腫反應，反應平均分值為0.2，致敏率為10%，至第24 h反應均已消退。陽性對照組出現明顯的紅斑、水腫等皮膚變態反應情況，反應平均分值高，在72 h觀察期內致敏率達100%。3組豚鼠均未出現哮喘、站立不穩等全身性過敏反應。實驗表明青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑及基質對豚鼠皮膚基本上無致敏反應。

表8 皮膚致敏反應評分標準

表9 青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑對豚鼠皮膚致敏性實驗結果

3 討論

青花椒超臨界提取物中含有大量揮發油，經GC-MS分析，主要成分芳樟醇的占比達到74.16%，質量濃度為13.57 mg/mL，其次為檸檬烯，占比5.45%，質量濃度為1.75 mg/mL，可見芳樟醇在青花椒超臨界提取物占比很高，可能是其發揮藥效的成分。揮發油作為一類性質優良的透皮吸收促進劑，能促進藥物透皮吸收、對皮膚刺激性小[26]。將其制備為熱熔壓敏膠貼劑，既能促進自身擴散，又可規避加熱揮發的問題。

熱熔壓敏膠貼劑基質的彈性體一般選用苯乙烯-丁二烯-苯乙烯（SBS）型和SIS型[27-28]。SIS中間嵌段聚異戊二烯結構上具有側鏈甲基，使它具有很好的內聚力和優良的黏附性能以及與其他添加物良好的相容性[29]。與SBS相比，SIS具有融熔黏度低、低溫柔軟性能好、制膠透明度高等特點[30]，是制備熱熔壓敏膠基質的首選。本研究采用經典的Box-Behnken設計-響應曲面法優化熱熔壓敏膠貼劑基質的組成，最終制備的基質均勻性、涂展性、滲布程度、皮膚追隨性、剝離性、反復揭貼性與殘留量等感官評價良好，黏附性能適宜。載藥后的貼劑呈淡綠色透明狀，有淡清香味，貼敷后的綜合感官及黏附性能與空白基質基本一致。

經皮給藥是指將藥物貼劑貼附于皮膚后，藥物分子經皮膚的角質層、生長表皮層和真皮層到達皮下組織，被淋巴管和毛細血管吸收進入體循環的過程[31]，簡而言之，是由濃度差推動的被動擴散過程。貼劑的載藥量多采用體外吸收擴散池法確定[32-33]，該方法雖簡單易行，但無法真正模擬皮膚內環境，所測得實驗值與真實值存在一定偏差[1]，所以本實驗選用在體實驗篩選載藥量。

硝酸甘油型偏頭痛大鼠模型是目前偏頭痛研究中常用的經典模型[34-35]，硝酸甘油在體內可生成一氧化氮（nitric oxide，NO），過量的NO會導致血管過度擴張，進而激活血管壁內的傷害覺神經纖維并介導降鈣素基因相關肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）等血管活性物質釋放，進一步觸發血管周圍神經源性炎癥參與偏頭痛的發生。該模型誘發的偏頭痛大鼠病理生理變化也與人類偏頭痛相似。實驗結果表明，將青花椒超臨界提取物制備為貼劑保留了其抗偏頭痛的藥效成分，隨著載藥量的增加，青花椒超臨界提取物貼劑抗偏頭痛效果增加，但當載藥量增加至一定限度時，這種治療作用有所減弱。綜合考慮，最終確定青花椒超臨界提取物貼劑每貼載藥量為70 mg。

皮膚是藥物吸收的重要系統之一，也是人體的天然屏障[36]，可對外界刺激做出反應，具有一定敏感性及自愈功能，因此考察貼劑經皮給藥的安全性十分重要。本實驗選用小鼠急性毒性實驗、家兔皮膚刺激試驗及豚鼠皮膚過敏性試驗考察了青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑的安全性，從實驗結果可以看出該貼劑無急性毒性和致敏性，在家兔皮膚上出現了輕度刺激性，但在24 h內自行消除，因此青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑安全性可靠。

目前偏頭痛的治療多采用口服給藥、針灸、按摩、芳香療法，或幾者相互配合應用[20]，尚無貼劑的使用先例，本實驗制備的青花椒超臨界提取物熱熔壓敏膠貼劑彌補了這一空缺。實驗結果表明，該貼劑外觀性狀良好、黏附性能適宜且安全有效，可為患者提供新的用藥選擇。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Optimization of hot melt pressure sensitive adhesive patch with supercritical extract ofbased on migraine efficacy and its safety evaluation

YUAN Rui-fang1, YANG Jin-hui2, ZHANG Jin-ming1, HE Ya-nan1, REN Han1, ZHANG Ding-kun1, YANG Ming3

1. State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, China 2. Sichuan Baicao Jinggong Biotechnology Co., Ltd., Chengdu 610000, China 3. Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330004, China

To optimize the forming process of hot-melt pressure-sensitive adhesive patch from the supercritical extraction part of, and evaluate the safety of the patch.Based on the sensory evaluation of uniformity, spreadability, degree of infiltration, skin followability, peelability, repeated peelability, and residual amount, as well as initial adhesion, holding adhesion and peeling strength as evaluation indexes, the matrix ratio of hot melt pressure sensitive adhesive was screened by single factor test and Box-Behnken design-response surface method. Theanimal evaluation method was used to screen the drug loading of the patch according to the number of head scratching in rats with nitroglycerin migraine. In addition, the safety of hot melt pressure sensitive adhesive was evaluated by mouse acute toxicity test, rabbit skin irritation test and guinea pig skin hypersensitivity test.The best matrix prescription of hot melt pressure sensitive adhesive was SIS (styrene-isoprene- styrene) elastomer: hydrogenated petroleum resin: liquid paraffin = 4:2:5.supercritical extract patch could significantly reduce the number of head scratching of migraine rats induced by nitroglycerin, 70 mg drug dosage of each gel patch could reduce the number of head scratching in rats by 81.75% within 30—60 min, which was preferably the best drug loading. The patch had no acute toxicity to mice, slightly irritated to the intact and damaged skin of New Zealand rabbits, eliminated itself within 6 h, and had no allergy to guinea pigs.The hot melt pressure sensitive adhesive for supercritical extraction ofprepared by this process has good sensory properties, strong adhesion, safe and effective.

Sieb. et Zucc.; supercritical fluid extraction; hot melt pressure sensitive adhesive; patch; migraine; molding process; safety evaluation; Box-Behnken design-response surface methodology; acute toxicity; skin irritation; skin sensitization

R283.6

A

0253 - 2670(2021)13 - 3841 - 11

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.13.008

2021-03-01

四川省中醫藥管理局花椒專項項目（2018HJZX023）；成都中醫藥大學中藥學學科特色創新科研團隊項目（CXTD2018006）；成都中醫藥大學“杏林學者”學科人才科研提升計劃項目（BSH2018007）

袁瑞芳，女，碩士研究生，從事中藥藥劑學研究。Tel: 17393107011 E-mail: 1903023567@qq.com

張定堃，碩士生導師，副教授，從事中藥制劑與品質評價新技術研究。Tel: 13568982018 E-mail: 465790643@qq.com

楊 明，博士生導師，教授，從事中藥炮制與制劑研究。Tel: 13870608983 E-mail: yangming16@126.com

[責任編輯 鄭禮勝]