呼吸道不同血清型別腺病毒感染患兒外周血T淋巴細胞亞群水平變化研究

趙苗苗，呂朝治，余 玲

(漢中市中心醫院兒科，陜西 漢中 723000)

腺病毒是雙鏈DNA病毒，易侵犯呼吸道而引發呼吸道感染，如扁桃體炎、支氣管炎、支氣管肺炎等，且多發生在兒童時期，給患兒生命健康造成嚴重威脅[1]。人腺病毒型別眾多，現階段，將人腺病毒劃分為7個亞群(A、B、C、D、E、F、G)，共包含52個血清型別，其中引發呼吸道感染的腺病毒主要集中在1型、2型、3型、4型、5型、7型、11型等血清型中[2]。目前，關于腺病毒感染的發病機制雖尚未完全清楚，但有研究[3]表明，呼吸道腺病毒感染涉及到多種細胞因子及淋巴細胞亞群的作用。且有研究[4]顯示，重癥腺病毒肺炎患兒發病時，其外周血T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+比值均降低，存在機體細胞免疫功能下降的情況，但經治療后，恢復期外周血CD3、CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+比值均升高，其為治療效果的判斷提供了監測依據。本研究特就此展開探討，以期為臨床病情及治療的判斷提供客觀參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將本院2017年3月至2019年12月收治的67例呼吸道腺病毒感染患兒設為研究組，另將同期體檢健康的53例兒童設為對照組。其中研究組男36例，女31例；年齡3個月至12歲，平均(3.56±0.67)歲；體重6.02～36.19 kg，平均(15.82±3.06)kg；發病類型：急性上呼吸道感染35例，支氣管炎17例，支氣管肺炎15例。對照組男29例，女24例；年齡4個月至10歲，平均(3.35±0.54)歲；體重6.62～33.24 kg，平均(14.83±2.46)kg。兩組在性別、年齡、體重等方面比較無統計學差異(P>0.05)，本研究已獲取醫院倫理委員會審批。病例納入標準：研究組均符合呼吸道腺病毒感染診斷標準[5]，且經病原學檢測確診；對照組均體檢健康，無慢性疾病，且近1個月內未發生感染性疾病；年齡<14歲；家屬均知情且自愿參與。排除標準：伴肺結核、哮喘、支原體感染等呼吸系統疾病者；其他病毒感染者；伴免疫系統疾病者；營養不良者；近期使用過抗生素、免疫抑制劑、糖皮質激素等藥物者；先天性肺發育不良者。

1.2 研究方法

1.2.1 外周血T淋巴細胞亞群水平檢測：抽取兩組研究對象空腹外周靜脈血4 ml，離心并分離血清，采用流式細胞術檢測外周血T淋巴細胞亞群中CD3+、CD4+、CD8+水平，并計算CD4+/CD8+比值，其中流式細胞儀及相關試劑盒均購于美國BD公司。

1.2.2 腺病毒血清型別檢測：采取研究組患兒鼻咽分泌物，應用免疫熒光法對其進行病毒抗原檢測，確定腺病毒陽性。提取病毒DNA，并進行聚合酶鏈式反應(PCR)擴增，其反應體系(25 μl)：反應液2 μl，模板液2 μl，TaqDNA聚合酶12.5 μl，上、下游引物各0.5 μl，加水補足至25 μl；反應條件：在94 ℃下預變性4 min，94 ℃下變性1 min，在55 ℃下退火30 s，另在72 ℃下延伸1 min，總共35個循環，在72 ℃下終延伸5 min。其中DNA分子質量標準、聚合酶、脫氧核苷酸試劑盒購自上海雅吉生物科技有限公司，PCR試劑盒購自生工生物工程(上海)股份有限公司，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，PCR擴增儀購自杭州朗基科學儀器有限公司。

1.3 觀察指標 ①研究組與對照組外周血T淋巴細胞亞群水平情況；②研究組血清型別情況；③研究組各血清型別外周血T淋巴細胞亞群水平情況。

2 結 果

2.1 研究組與對照組外周血T淋巴細胞亞群水平比較 研究組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均較對照組降低，差異具有統計學意義(均P<0.05)；研究組外周血CD8+水平與對照組比較，無統計學意義差異(P>0.05)。見表1。

表1 研究組與對照組外周血T淋巴細胞亞群水平比較

2.2 研究組血清型型別情況 經腺病毒血清型別檢測，在67例呼吸道腺病毒感染患兒中，3型腺病毒35例(52.24%)，7型腺病毒21例(31.34%)，其他型腺病毒11例(16.42%)。

2.3 研究組各血清型別外周血T淋巴細胞亞群水平比較 CD8+在研究組各血清型別間比較差異無統計學意義(均P>0.05)；CD3+、CD4+、CD4+/CD8+在研究組各血清型別間比較有統計學差異(均P<0.05)，3型、7型腺病毒感染患兒外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于其他型別腺病毒感染，7型腺病毒感染患兒CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于3型腺病毒感染，差異均有統計學意義(均P<0.05)。見表2。

表2 研究組各血清型別外周血T淋巴細胞亞群水平比較

3 討 論

腺病毒是兒童呼吸道感染常見病原體之一，可引發嚴重支氣管炎或重癥肺炎等，增加兒童死亡風險[6]。機體感染腺病毒后，可產生免疫應答及炎癥反應，以對抗腺病毒感染[7]。T淋巴細胞亞群主要包括CD3+、CD4+、CD8+等，在免疫系統中具有重要的調控作用，正常情況下，T淋巴細胞亞群各細胞數量保持一定的比例而使機體免疫功能維持在動態平衡狀態，但當受到感染時，各數量或功能出現改變，導致免疫功能紊亂，引發疾病發生發展[8-9]。

本研究結果發現，研究組外周血CD8+水平與對照組無明顯區別，但CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均較對照組明顯降低，提示呼吸道腺病毒感染患兒細胞免疫功能降低。CD3+是成熟T細胞，CD4+是免疫應答中重要反應細胞，協同發揮免疫功能，而CD8+為免疫抑制細胞，另CD4+/CD8+比值反應機體免疫狀態[10]。正常情況下，CD4+與CD8+相互制約而達到動態平衡，腺病毒感染機體后，機體細胞免疫功能紊亂，輔助性T細胞比例下降[11]。有研究[12]表明，急性呼吸道腺病毒感染患兒外周血CD3+、CD3+CD4+、CD4+/CD8+水平均較正常對照兒童明顯降低，而CD3+、CD8+無明顯差異，此與本研究結果相符合。盧華君等[13]研究亦表明呼吸道腺病毒感染患兒存在免疫功能紊亂，外周血CD3+、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平降低。

本研究結果還發現，在67例呼吸道腺病毒感染患兒中，3型腺病毒感染占比52.24%，7型腺病毒感染占比31.34%，其他型腺病毒感染占比16.42%，提示腺病毒引發的呼吸道感染患兒以3型及7型腺病毒為主。帥金鳳等[14]研究顯示，2017年石家莊地區呼吸道腺病毒感染住院兒童中，3型腺病毒9例(11.8%)、7型腺病毒27例(35.5%)，為主要流行型別。另Haque等[15]研究表明，人腺病毒3型是世界范圍內急性呼吸道感染主要病原，占所有腺病毒呼吸道感染的15%～87%。此外，本研究結果發現，研究組各血清型別腺病毒感染患兒間CD8+無明顯差異，但3型、7型腺病毒感染患兒外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于其他型別腺病毒感染，且7型腺病毒感染患兒CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均較3型腺病毒感染降低，提示3型、7型腺病毒引發的呼吸道感染對機體免疫功能損傷較其他型別嚴重，且7型最為嚴重。有研究[16]表明，B亞組中的人腺病毒7型、3型的致病性較C組、E組中的其他型別強。另有研究[17]顯示，在人腺病毒7個亞組中，與呼吸道感染有關的主要是B組(3、7、11型等)、C組(1、2、5型等)、E組(4型)，尤其是B亞組中3、7型可引發嚴重呼吸道感染性疾病。3型、7型腺病毒致病性較強，可引發較重的臨床表現，導致淋巴細胞亞群紊亂較為嚴重，促使細胞免疫功能嚴重降低，則CD3+、CD4+、CD4+/CD8+下降更為明顯；而1型、2型等其他型別腺病毒的毒力較小，較少引發嚴重臨床表現，免疫功能紊亂相對較輕。此外，有研究[18-20]表明，與3型腺病毒感染相比較，7型腺病毒感染引起了更為嚴重的疾病特征與結果。此可有助于對患兒病情嚴重程度進行評估，以指導臨床治療，并可有助于治療效果的判斷。

綜上所述，呼吸道腺病毒感染患兒外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平明顯降低，其腺病毒感染型別以3型、7型為主，且3型、7型腺病毒感染患兒外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平降低情況較其他型別的腺病毒感染明顯，并以7型腺病毒感染降低最為嚴重，可指導臨床對此類患兒的免疫干預，實施重癥疾病的救治。