血清腫瘤標志物聯(lián)合檢測在肺癌診斷中的應用價值探究

馬慧霞

（高臺縣人民醫(yī)院，甘肅 高臺 734300）

目前全球死亡率最高的惡性腫瘤為肺癌，肺癌篩查指南將已知肺癌易感基因，1 級親屬中有慢性肺病史或肺癌家族史、至少存在煙草相關(guān)腫瘤的既往史，年齡超過50 歲、每年吸煙大于20 包（既往或目前吸煙），年齡在55～74 歲之間，每年吸煙大于30 包（15 年內(nèi)吸煙或目前正在吸煙）中的1 條即可定義為高危人群，其肺癌患病率較普通人群明顯升高[1]。中國原發(fā)性肺癌臨床診療流程于2015 年將有關(guān)肺癌的血清標志物檢測推薦為門診篩查肺癌的檢查之一[2]。而癌胚抗原（Carcinoembryonic Antigen，CEA）、細胞角蛋白21 片段抗原（Cytokeratin fragment 21-1，Cyfra21-1）、鱗狀上皮細胞癌抗原（Squamous Cell Carcinoma Antigen，SCC-Ag）、胃泌素釋放肽前體（Progastrin-Releasing Peptide，ProGRP）被美國臨床生化委員會和歐洲腫瘤標志物專家組推薦為診斷肺癌常用標志物[3]。為明確其診斷價值，本研究對肺癌患者血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 表達水平進行檢測，并通過ROC 曲線分析上述指標單獨及聯(lián)合檢測對肺癌的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 資料

將2018 年1 月—2020 年6 月于高臺縣人民醫(yī)院確診并接受治療的120 例肺部疾病患者作為研究對象，其中60 例肺癌患者作為肺癌組，60 例良性肺疾病患者作為良性肺病組。納入標準：（1）所有患者經(jīng)病理學檢查確診為肺癌或良性肺疾病；（2）所有患者配合本次研究并簽署同意書。排除標準：（1）無組織病理學檢測結(jié)果患者；（2）腎功能異?；颊撸▋?nèi)生肌酐清除率不足60 mL/min 或血肌酐超過1.5 倍正常上限）；（3）已接受肺切除手術(shù)、靶向治療或相關(guān)化療患者。肺癌組患者年齡40～75 歲，平均年齡（56.38±4.21）歲；男32 例，女28 例；肝腎功能正常；吸煙時間20～25 包年，平均（22.34±2.13）包年。良性肺疾病組年齡42～78 歲，平均年齡（57.12±4.23）歲；男31 例，女29 例；肝腎功能正常；吸煙時間20～27 包年，平均（23.11±2.14）包年。2 組患者年齡、肝腎功能、吸煙時間、性別等資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

1.2 試劑與儀器

恒溫搖床（武漢科學儀器廠），HD-2001A 型生物芯片檢測儀、生物芯片圖像分析系統(tǒng)軟件、蛋白芯片試劑盒均購自浙江湖州數(shù)康生物科技有限公司，數(shù)碼恒溫電熱水浴箱購自北京長風儀器儀表公司。

1.3 標本采集

入院當天經(jīng)肘靜脈采集患者血液10 mL，置于5 mL 血清管中，保存于4 ℃冰箱內(nèi)。以3 000 r/min速度離心15 min，取上層血清置于EP 管內(nèi)，再保存于-80 ℃冰箱內(nèi)，檢測肝腎功能、血清CEA（參考值低于5 μg/L）、Cyfra21-1（參考值低于2.08 μg/L）、SCC-Ag（參考值低于1.5 μg/L）、ProGRP（參考值低于65 ng/L）水平。

1.4 檢測方法

將各100 μL 不同濃度的標準品及待測血清分別加到不同蛋白芯片分隔內(nèi)，再置于37 ℃水浴箱中溫浴半小時，再將孔內(nèi)液體倒去，芯片格內(nèi)加入200 μL 洗滌液，超聲震蕩洗滌8 min，再將洗滌液倒去，同樣步驟洗滌4 次；將100 μL 反應液加入芯片小方格內(nèi)，置于37 ℃水浴箱內(nèi)溫育半小時，再將液體棄去，同以上步驟洗滌2 次；將蛋白芯片集成塊上部剝離，20 μL等體積液加入每個芯片的膜表面并靜置2 min。蛋白芯片內(nèi)數(shù)據(jù)使用生物芯片檢測儀讀取，圖像分析系統(tǒng)軟件自動讀取圖像，將各被測樣本結(jié)果進行分析，并打印數(shù)據(jù)報表[4]。

1.5 統(tǒng)計學分析

利用SPSS 22.0 統(tǒng)計學軟件進行錄入和分析數(shù)據(jù)，血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 水平不符合正態(tài)分布，采用Mann-Whitney U 非參數(shù)檢驗；為計數(shù)資料以例（n）或率（%）表示，行卡方檢驗。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌患者及良性肺部疾病患者血中4 種腫瘤標志物表達水平

肺癌組患者血清CEA、Cyfra21-1 水平較良性肺病 組明顯升高（P<0.05），2 組患者血清SCC-Ag、ProGRP 水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

表1 肺癌患者及良性肺部疾病患者血中4 種腫瘤標志物表達水平（）

表1 肺癌患者及良性肺部疾病患者血中4 種腫瘤標志物表達水平（）

2.2 血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 陽性率

血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 在肺癌患者和良性肺病患者血清中的陽性率無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表2。

表2 血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 陽性率

續(xù)表2

2.3 腫瘤標志物預測肺癌的特異性及敏感性

單獨檢測時，Cyfra21-1 的敏感性（93.33%）最高，特異性（73.3%）明顯較低，ProGRP 特異性（96.67%）最高，但是敏感性僅為28.33%；Cyfra21-1 單獨診斷肺癌的AUCROC為0.868，較CEA、SCC-Ag、ProGRP 單獨診斷高。CEA 與Cyfra21-1 聯(lián)合檢測時敏感性為88.30%，特異性為90.00%，AUCROC為0.939，高于其他兩種腫瘤標志物聯(lián)合檢測。CEA、Cyfra21-1、ProGRP 聯(lián)合檢測時AUCROC為0.948，敏感性為92.67%，特異性為88.33%，高于其他三項聯(lián)合檢測。4 種腫瘤標志物聯(lián)合檢測特異性提高至96.12%，敏感性為88.33%，AUCROC高至0.971，診斷價值最優(yōu)，見表3，如圖1 所示。

表3 腫瘤標志物單獨檢測及聯(lián)合檢測診斷肺癌的特異性、敏感性及AUCROC

圖1 血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 單獨與聯(lián)合檢測診斷肺癌的ROC 分析結(jié)果

3 討論

目前肺癌死亡率在我國惡性腫瘤中位于首位，也是全球較為常見的惡性腫瘤[5]。但是肺癌的病因較為復雜，尚不清楚其具體作用機制，臨床表現(xiàn)具有個體差異，缺乏特異性。即使科學技術(shù)水平及醫(yī)療技術(shù)不斷發(fā)展，新的治療方法及診斷方式不斷出現(xiàn)，但是早期發(fā)現(xiàn)肺癌仍舊較為困難[6]。多數(shù)患者確診時已發(fā)展為遠處轉(zhuǎn)移或局部晚期，失去最佳治療時機[7]。故如何提高肺癌檢測的準確性及敏感性對患者預后意義重大。

腫瘤標志物為腫瘤細胞特有，通過腫瘤細胞大量分泌后進入體液，僅在胚胎中存在，但是在正常組織中含量較低。腫瘤標志物水平與腫瘤組織的活躍、增生密切相關(guān)。在肺癌早期診斷和早期發(fā)現(xiàn)中腫瘤標志物的作用已被臨床廣泛關(guān)注，但是，目前用于肺癌檢測的標志物為相關(guān)標志物，且臨床使用單一腫瘤標志物診斷肺癌的價值受限，應用多種腫瘤標志物聯(lián)合檢測能夠極大地提高診斷的準確性及檢測的敏感性[8]。有研究表明，血清腫瘤標志物聯(lián)合檢測可提高中國人群肺結(jié)節(jié)診斷的特異性和敏感性。本研究發(fā)現(xiàn)，肺癌患者血清中CEA、Cyfra21-1水平明顯高于良性肺疾病患者，SCC-Ag、ProGRP 在良性肺疾病患者及肺癌患者中血清的表達水平無統(tǒng)計學意義；另外，血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 在肺癌患者及良性肺疾病患者中的陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義。由此可見，若使用單一腫瘤標志物診斷肺癌易出現(xiàn)誤診、漏診情況。本研究還發(fā)現(xiàn)，4 項腫瘤標志物單獨檢測診斷肺癌的特異性均超過60%，但是敏感性較低；而血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、ProGRP 這4 項聯(lián)合檢測AUC 最高，不僅可保持對肺癌診斷的較高特異性，還能提高敏感性，表明四者聯(lián)合對肺癌的診斷價值最優(yōu)，具有較高特異性，且可減少漏診。

綜上所述，血清CEA、Cyfra21-1、SCC-Ag、Pro-GRP 等腫瘤標志物聯(lián)合檢測可有效提高對肺癌的診斷價值。