子宮內膜異位癥患者腹腔液中TNF-α IL-1β和ATG9A的表達水平及其相關性分析

李 青 衛 兵

子宮內膜異位癥(endometriosis, EMS)是育齡婦女常見的慢性激素依賴性疾病。EMS發病機制目前仍不清楚，可能與炎癥因子刺激單核細胞和T 淋巴細胞產生選擇性趨化因子增加，從而誘導異位子宮內膜黏附、種植和血管形成有關，EMS目前尚缺乏有效的治療手段且治療后容易復發。有研究發現EMS患者異位子宮內膜以及血清中腫瘤壞死因子-α (tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白細胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)等炎癥因子水平升高，通過控制這些炎癥因子水平有利于EMS的治療。自噬參與EMS患者炎癥調節，自噬相關蛋白9A(簡稱ATG9A)是自噬發生過程中必須的自噬泡膜蛋白。然而，ATG9A是否參與到EMS的發生、發展過程中國內外鮮有研究，以及其是否與TNF-α、IL-1β存在相關性也尚不清楚。腹腔免疫微環境的變化是EMS發生的前提和腹腔癥狀的病理基礎，本研究擬探討EMS患者腹腔液中TNF-α、IL-1β和ATG9A的水平及3者間的相關性，旨為EMS的病情監測及其治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月至2019年12月安徽醫科大學第二附屬醫院婦科收治的EMS患者85例為觀察組，同期另選取非EMS婦科患者80例(術后病理證實為單純子宮肌瘤23例，成熟性畸胎瘤38例，上皮性卵巢腫瘤19例)為對照組。EMS患者分期：Ⅰ～Ⅱ期20例，Ⅲ～Ⅳ期65例。納入標準：研究對象月經周期正常(25～35天)，術前6個月內未使用過任何激素類藥物。排除標準：患有多囊卵巢綜合征、盆腔炎、子宮內膜息肉、輸卵管積水、子宮腺肌癥、甲狀腺疾病及糖尿病等并發癥。兩組年齡、身體質量指數、妊娠次數、分娩次數等比較，差異無統計學意義(

P

>0.05)，兩組CA-125水平差異顯著(

P

<0.05)。見表1。

表1 兩組對象一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 TNF-α、IL-1β及ATG9A水平檢測 兩組對象均于術中在子宮膀胱陷凹和子宮直腸陷凹處利用穿刺針抽取10 mL腹腔液，離心后置-80℃條件下保存。采用酶聯免疫吸附法(簡稱ELISA)測定兩組TNF-α、IL-1β及ATG9A水平。試劑盒購自美國GBD公司，操作步驟嚴格遵照說明書進行。

1.2.2 EMS分期 采用美國生育學會(American Fertility Society, AFS)1997年提出的修正EMS分期對異位內膜的部位、大小、數目及黏連程度進行記錄，最后評分：Ⅰ期(微型)，1～5分；Ⅱ期(輕型)：6～15分；Ⅲ期(中型)：16～40分；Ⅳ期(重型)：>40分。此分期需在腹腔鏡下或剖腹探查手術時進行，該分期法有利于評估疾病嚴重程度。85例EMS患者中，Ⅰ～Ⅱ期者20例，Ⅲ～Ⅳ期者65例。

1.3 觀察指標 比較兩組對象腹腔液中TNF-α、IL-1β及ATG9A水平，并比較不同分期EMS患者TNF-α、IL-1β與ATG9A水平差異，分析TNF-α、IL-1β與ATG9A的相關性。

2 結果

2.1 兩組對象TNF-α、IL-1β及ATG9A水平比較 觀察組腹腔液中TNF-α、IL-1β水平高于對照組，ATG9A水平低于對照組，差異均有統計學意義(

P

<0.05)。見表2。

表2 兩組對象TNF-α、IL-1β及ATG9A水平比較

2.2 不同分期EMS患者腹腔液中TNF-α、IL-1β及ATG9A水平比較 Ⅰ～Ⅱ期EMS患者腹腔液中TNF-α、IL-1β水平低于Ⅲ～Ⅳ期EMS患者，ATG9A水平高于Ⅲ～Ⅳ期EMS患者，差異均有統計學意義(

P

<0.05)。見表3。

表3 不同分期EMS患者腹腔液中TNF-α、IL-1β及ATG9A水平比較

2.3 TNF-α、IL-1β與ATG9A的相關性 Person相關分析結果顯示，EMS患者腹腔液中TNF-α與ATG9A呈負相關性(

r

=-0.568，

P

<0.001)；IL-1β與ATG9A呈負相關性(

r

=-0.597，

P

<0.001)。見圖1、2。

圖1 IL-1β與ATG9A的相關性

圖1 TNF-α與ATG9A的相關性

3 討論

EMS是常見的婦科慢性炎癥性疾病，其發病機制尚不明確。Sampson的研究認為在EMS病灶形成的過程中，異位內膜必須經過“粘附-侵襲-血管形成”3個過程。新的觀點認為，EMS異位灶的炎癥微環境可以促進EMS的形成和發展，也是導致EMS患者盆腔疼痛的原因之一。臨床上EMS患者損傷程度與患者的癥狀并不是完全一致的，因此，對EMS發病機制及其發病嚴重程度相關指標的研究顯得十分必要。

研究發現，TNF-α可促進異位內膜的生長，加重粘附與粘連，從而形成異位內膜病灶，可能與TNF-α參與機體的免疫病理損傷有關，即機體發生子宮內膜異位癥后，異位的子宮內膜作為抗原，刺激患者產生體液和細胞免疫應答，導致其腹腔液中巨噬細胞以及外周血液中淋巴細胞的數量與活化程度增加。IL-1β能激活許多炎癥相關因子的表達，在內異癥的發生、發展中發揮重要作用。IL-1β的水平在EMS患者的腹腔液和異位內膜中增加，且高水平的IL-1β引起病灶周圍環境更適合異位內膜細胞的發展、脫落轉移和生長，進一步引起病變的非良性循環。EMS患者疼痛程度與IL-1β在腹腔液中的表達水平之間有密切關系。本研究結果顯示，EMS患者腹腔液中TNF-α、IL-1β水平高于非EMS患者組，Ⅲ～Ⅳ期EMS患者腹腔液中TNF-α、IL-1β水平高于Ⅰ～Ⅱ期EMS患者，差異均顯著(

P

<0.05)，表明TNF-α、IL-1β在EMS患者中呈高表達，且分期越高的EMS患者，TNF-α、IL-1β水平越高，提示TNF-α、IL-1β與EMS患者的疾病嚴重程度相關。研究證實，自噬與炎癥之間存在密切的聯系，自噬參與到EMS患者炎癥調節中。ATG9A參與自噬過程和囊泡蛋白的募集，為自噬體形成的必需蛋白。ATG9A在EMS患者中的研究報道較少，兩者關系尚不清楚。本研究結果顯示，ATG9A在觀察組腹腔液中的水平較對照組低，且Ⅲ～Ⅳ期EMS患者腹腔液中ATG9A水平低于Ⅰ～Ⅱ期EMS患者，差異均顯著(

P

<0.05)，提示EMS的發生與EMS的疾病進展存在關聯。進一步研究發現，ATG9A水平與TNF-α、IL-1β存在負相關關系，提示ATG9A可能參與到EMS患者的炎癥調節過程，可能在EMS中扮演阻礙疾病進展的角色，但其具體調節作用及機制有待進一步的研究證實。

綜上所述，TNF-α、IL-1β及ATG9A可能參與到EMS的發生、發展過程，ATG9A與TNF-α、IL-1β存在負相關關系，臨床上聯合檢測TNF-α、IL-1β、ATG9A水平可能有利于監測EMS的病情發展。