薄層色譜法快速鑒別保健食品中非法添加非苯二氮?類化合物的研究

林鳳屏，翁 嘉，李惠敏

（惠州市食品藥品檢驗所，廣東 惠州 516003）

非苯二氮?類藥物（non-benzodiazepines,NBZD）是直接作用于中樞神經系統的抑制劑，屬于第三代鎮靜催眠藥。該類藥物于二十世紀八十年代末期發展迅速，主要代表藥物有唑吡坦、扎來普隆、佐匹克隆，具有鎮靜催眠、抗焦慮、抗驚厥、肌肉松弛等藥理作用，主要用于治療失眠[1-3]。這類藥物對苯二氮?受體（BZ）具有特異選擇性，具有快速進入睡眠狀態，促進深度睡眠，正常睡眠生理結構基本不受影響，醒后無宿醉感等特點。因其用量少，催眠效果好，起效快，一些不法分子在安神類保健食品中非法添加此類藥物。非苯二氮?類藥物屬于第二類精神藥物，需在醫生的指導下服用，濫用或長期使用均會對身體造成不同程度的傷害。

目前測定非苯二氮?類藥物一般采用高效液相色譜、高效液相色譜-質譜/質譜聯用或超高效液相色譜質譜/質譜聯用技術[4-8]，以上方法均需對樣品進行前處理，各種實驗耗材消耗大，檢驗時限長，不利于日常快速檢測，高效監管。

本文探索利用薄層色譜法（TLC）對安神類保健食品中非法添加非苯二氮?類藥物進行鑒別，以實現快速篩查，提高監管效率，打擊不法行為。

1 材料、儀器和試藥

1.1 材料

1.1.1 樣品信息 安神類的保健食品65批次，均由市場購買。

1.1.2 對照品信息 佐匹克隆對照品（批號：100870-200801），酒石酸唑吡坦對照品（批號：171258-200601），扎來普隆對照品（批號：100670-200401）均購于中國食品藥品檢定研究院。

1.2 儀器和試劑試藥

硅膠預制板（煙臺市化學工業研究所，型號SGF254100×100、GF25410×5，涂層厚度0.20±0.03 mm，粒度10～40 μm）；自制GF254薄層板（規格20 cm×10 cm，青島海洋化工有限公司，批號060818，涂層厚度0.5 mm）；AE-240電子分析天平：瑞士Mettler；數碼成像系統：瑞士CAMAG；高效液相色譜儀：Agilent 1200 Serie；1100 series/API 3000液質聯用儀：美國安捷倫/美國ABI公司；KQ-250超聲波清洗器（250 W，40 kHz）：昆山市超聲儀器有限公司。

甲醇、乙腈為色譜純；水為純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法

2.1 酒石酸唑吡坦、扎來普隆、佐匹克隆薄層色譜鑒別

取1片（粒）樣品的內容物，加乙酸乙酯3 ml，振搖提取1 min使溶解，靜置，取上清為供試品溶液；同時分別取佐匹克隆、酒石酸唑吡坦、扎來普隆對照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含1 mg的混合溶液，作為對照品溶液，吸取上述溶液各5～10 μl，點于硅膠GF254薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯（17:2:6）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，不應顯相同顏色的熒光斑點。

2.2 方法學考察

2.2.1 對照品順序 混合對照品溶液從下至上分別為：佐匹克隆、酒石酸唑吡坦、扎來普隆（見圖1）。

圖1 對照品順序

2.2.2 耐用性

2.2.2.1 不同薄層板的比較 取自制薄層板與市售薄層板，分別按擬定的方法試驗。結果表明，不同薄層板色譜不影響結果判斷。

2.2.2.2 不同溫度的比較 取點樣后的薄層板，分別在2 ℃和32 ℃中展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。結果表明在2～32 ℃范圍內試驗，對檢查無明顯的影響。

2.2.2.3 不同濕度的比較 取點樣后的薄層板，分別在用硫酸調節相對濕度32 %和88 %的層析缸中展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。結果表明在相對濕度32 %～88 %之間試驗，對檢查無明顯的影響。

2.2.2.4 飽和與不飽和的考察 取點樣后的薄層板，分別在展開前飽和10 min和立即放入展開，取出、檢視。結果表明兩者沒有區別，所以在檢查中可不需要飽和。

方法學驗證結果表明，薄層板方面自制薄層板分離效果與市售薄層板相差不大，而溫濕度變化對展開效果影響不大，因此認為本方法耐用性良好。

2.2.3 檢出限 取佐匹克隆對照品、酒石酸唑吡坦對照品、扎來普隆對照品分別加乙酸乙酯制成系列濃度溶液進行試驗，點樣量均為1 μl。結果當佐匹克隆對照品濃度為0.0629 mg/ml、扎來普隆對照品濃度為0.0614 mg/ml、酒石酸唑吡坦對照品濃度為0.0324 mg/ml時，對照品的熒光淬滅斑點仍然可見，故認為方法的檢出限分別為佐匹克隆62.9 μg/ml、扎來普隆61.4 μg/ml、酒石酸唑吡坦32.4 μg/ml。

依據佐匹克隆片（膠囊）、酒石酸唑吡坦片、扎來普隆片（膠囊）的國家標準[8]及說明書，佐匹克隆最低臨床劑量為3.75 mg，酒石酸唑吡坦最低臨床劑量為5 mg，扎來普隆最低臨床劑量為5 mg。由表1可見，本方法的檢出限低于最低臨床劑量的十分之一，故認為對于非法添加上述3種成分，均可檢出，且鑒別快速。

表1 佐匹克隆、扎來普隆、酒石酸唑吡坦的檢出限與最低臨床劑量

2.2.4 不同點樣量 取佐匹克隆、酒石酸唑吡坦、扎來普隆3種對照品，加乙酸乙酯制成每1 ml分別含1，0.2，1 mg的混合溶液，分別吸取上述對照品溶液2～14 μl點于同一薄層色譜板上，按擬定的方法展開、檢視。結果4 μl點樣量所顯斑點可見，而6 μl點樣量所顯斑點清晰，能滿足觀察需要。考慮到不同樣品添加的量不一致，視樣品情況選擇5～10 μl作為薄層色譜檢查的點樣量。

3 結果與分析

3.1 薄層色譜結果

65批次樣品經2.1項方法處理，展開，顯色后，結果呈陽性的有4批次樣品，懷疑添加佐匹克隆化學成分（見圖2）。

圖2 陽性樣品圖譜

3.2 高效液相色譜（HPLC-DAD）結果

65批次樣品經高效液相色譜法進行測定，結果有4批次樣品的供試品色譜中，顯與佐匹克隆保留時間相同的色譜峰，采用二極管陣列檢測器比較相應色譜峰的紫外-可見吸收光譜，結果吸收光譜與佐匹克隆一致。高效液相色譜法與薄層色譜法檢測結果一致。

3.3 液質聯用儀分析結果

4批次初篩呈陽性的樣品采用液質聯用儀分析方法進行分析，結果所得的質譜圖與佐匹克隆對照溶液的質譜圖一致，高效液相色譜法所確認的添加成分與質譜結果一致。

4 討論

通過薄層色譜法，對市售的65批次安神類保健食品進行篩查，發現4批次樣品添加了佐匹克隆，檢測結果與高效液相色譜、液質聯用儀結果一致。佐匹克隆為處方藥，必須在醫生指導下服用，佐匹克隆所致不良反應，包括味覺障礙、譫妄、昏迷、嚴重激越、記憶損害、睡行癥、呼吸抑制、急性胰腺炎、急性間質性腎炎、戒斷癥狀、過敏反應等[9-11]，由于保健食品中非法添加的藥物劑量不明確，具有很大的潛在危險。

對于懷疑添加非苯二氮?類化合物的樣品，本方法操作簡便、結果準確，既可節約時間、成本，又能準確快速篩查出陽性樣品，在打擊藥品、保健食品違法添加化學成分不法行為中有廣闊的應用前景。