氣相色譜-質譜聯用法分析冠心膏中揮發性成分

李海燕，楊 元，李桂本，康 建

（1. 河南省食品藥品檢驗所，河南 鄭州 450000；2. 鄭州大學第一附屬醫院，河南 鄭州 450000）

冠心膏由丹參、川芎、當歸、紅花、沒藥、丁香、乳香、降香、樟腦、二甲苯麝香、薄荷腦、鹽酸苯海拉明、冰片等組成，具有活血化瘀、行氣止痛的功效，用于冠心病、心絞痛的預防和治療。冠心膏收載于衛生部藥品標準中藥成方制劑第十九冊[1]，原質量標準僅有性狀及檢查項，缺少控制處方藥味質量的有效檢驗方法。處方中樟腦、二甲苯麝香、薄荷腦、冰片等均是揮發性成分，川芎[2]、當歸[3]、乳香[4]、丁香[5]、降香[6]等藥味也含有大量揮發性成分，因此制定了氣相色譜-質譜聯用法測定冠心膏中揮發性成分的方法[7-8]，以更全面、更有效地控制產品質量。本文采用揮發油提取法、超聲提取法分別制備供試品溶液，用氣相色譜-質譜聯用法（GC-MS）對上述兩種供試品溶液的總離子流圖進行分析和處理，鑒定比較兩種提取方法所得揮發性成分，此法可較好地控制處方藥味的投料情況，并為冠心膏氣相色譜指紋圖譜的研究及其質量控制提供實驗數據。

1 儀器與材料

Thermo Fisher TSQ 8000EVD-NO VPI 三重四級桿氣質聯用儀；ThermoTG-5MS石英毛細管柱（0.25 mm×30 m，0.25 μm）。冠心膏由河南羚銳制藥股份有限公司生產（批號190101，190102，190103）；實驗所用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 氣相色譜條件

Thermo TG-5MS石英毛細管柱（0.25 mm×30 m，0.25 μm）；載氣為高純度氦氣；柱流量1.0 ml/min；分流比1:1；進樣口溫度250 ℃；程序升溫：初始溫度60 ℃（1 min），10 ℃/min升至100 ℃，保持30 min，7 ℃/min的升溫速率升至150 ℃，保持20 min，2 ℃/min的升溫速率升至190 ℃，保持3 min，再以20 ℃/min的升溫速率升至230 ℃，保持5 min。

2.2 質譜條件

電子轟擊離子源為EI源；電離電壓70 eV；離子源溫度300 ℃；MS傳輸線溫度為280 ℃；掃描范圍m/z 50～500。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 揮發油提取法 取冠心膏樣品210 cm2，剪成窄條，除去蓋襯，置250 ml燒瓶，加水100 ml，按《中國藥典》2015年版四部通則2204“揮發油測定法”項下甲法，自測定器上端加水至充滿刻度部分，并溢流入燒瓶時為止，再加甲苯2 ml，加熱回流提取2 h，放冷，取甲苯液，加乙酸乙酯2 ml稀釋，置鋪有無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾液置入50 ml量瓶，以適量乙酸乙酯分次洗滌容器及濾器，洗滌液并入同一量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得[9]。

2.3.2 超聲提取法 取冠心膏樣品210 cm2，加乙酸乙酯50 ml，超聲處理30 min，濾過，吸取濾液5 ml，置入25 ml量瓶，加乙酸乙酯稀釋至刻度，即得。

2.4 測定法

取2.3項下供試品溶液各1 μl，注入氣相色譜-質譜聯用儀。

2.5 測定結果

樣品經GC-MS法分析得總離子流圖（TIC），見圖1。所得譜圖數據經NIST MS Search 2.2譜圖庫自動檢索，與標準譜圖對照、人工譜圖解析等方法確認各化合物，并采用面積歸一化法確定各組分的相對百分含量，結果見表1。

表1 GC-MS法測定冠心膏揮發性化學成分

圖1 冠心膏揮發性成分的總離子流圖

揮發油提取法所得的冠心膏樣品中共分離出34個峰，鑒定出19個成分，占總揮發性成分相對含量的93.4 %，鑒定的化合物主要有萜類、酯類、烷烴類等，相對含量較高的成分分別為樟腦（20.75 %）、龍腦（21.81 %）、薄荷腦（18.07 %）、異龍腦（12.54 %），根據相關參考文獻報道，處方中的主要藥味樟腦、冰片、薄荷腦、二甲苯麝香、鹽酸苯海拉明，及當歸、川芎揮發油中含有的川芎內酯、蒿本內酯[10-11]，丁香、降香揮發油中的丁香酚[12-13]，丹參、丁香揮發油中的石竹烯[14]，乳香揮發油中的乙酸辛酯、α-衣蘭油烯[15]，均可在冠心膏揮發油提取樣品總離子流圖中顯示出來；冠心膏超聲提取法所得的樣品中共分離出27個峰，鑒定出16個成分，占總揮發性成分相對含量的29.2 %，鑒定的化合物主要有萜類、酯類等，相對含量較高的成分分別為長葉烯（9.14 %）、二甲苯麝香（7.24 %）、苯海拉明（3.58 %）。

2.6 對照品比對

2.6.1 對照品溶液的配制 分別稱取樟腦、龍腦、異龍腦、薄荷腦對照品各1 mg置入100 ml量瓶，制成混合對照品溶液。

2.6.2 供試品溶液的配制 取同一批冠心膏樣品照“2.3”項下方法分別制備5份供試品溶液。

2.6.3 測定方法 取對照品溶液與供試品溶液按“2.1”項下方法進樣。

2.6.4 測定結果 按“2.3.1”項下方法提取的5份供試品溶液中均呈現與樟腦、龍腦、異龍腦、薄荷腦對照品色譜保留時間一致的色譜峰；按“2.3.2”項下方法提取的5份供試品溶液中均呈現與樟腦、龍腦、薄荷腦對照品色譜保留時間一致的色譜峰。

3 討論

3.1 曾分別采用石油醚、甲苯接收液和無接收液直接提取揮發油的方法制備供試品，結果所得的3種揮發油樣品總離子流圖差別較大，以甲苯為接收液提取揮發油的總離子流圖信息量較大，提取的揮發性成分最多，見圖2。

圖2 3種方法提取揮發油樣品的總離子流圖

3.2 使用Thermo TG-5MS石英毛細管柱、HP DBWAX毛細管柱測定供試品溶液，Thermo TG-5MS石英毛細管柱比HP DB-WAX毛細管柱所得的總離子流圖分離度更好。

3.3 本實驗分析比較了揮發油提取和超聲提取得到的揮發性成分，結果表明，二者共有成分15種，揮發油提取法特有成分4種，超聲提取法特有成分1種。樟腦、龍腦、薄荷腦等主要成分占揮發性成分相對含量的百分比遠低于揮發油提取樣品，表明揮發油提取法能更有效、更完全提取樣品中揮發性成分。此結果對冠心膏質量標準的控制、揮發性成分的研究提供了科學依據。