簡便紫外光譜法快速測定阿司匹林中游離水楊酸含量*

郭新穎，陳 峰，葉青華，楊清華，顧 俊

（南通市疾病預防控制中心，江蘇 南通 226007）

阿司匹林（aspinrin,ASP），又稱乙酰水楊酸（acetylsalicylicacid,ASA），臨床具有鎮(zhèn)痛抗炎作用。阿司匹林制藥由水楊酸和乙酸酐或乙酰氯催化反應制得，在潮濕條件下，阿司匹林分子中的酯基（RCOOR'）易水解為對人體具有藥物刺激和毒性作用的水楊酸（Salicylic acid,SA），水楊酸分子中的酚羥基（R-OH）久置于空氣易被氧化成醌型有色物質，從而使阿司匹林成品變色（見圖1反應方程式）。因此，準確測定阿司匹林中游離水楊酸含量對藥品質控非常關鍵，開發(fā)簡便快速的定量測定方法對阿司匹林制藥具有及其重要的意義。

圖1 水楊酸水解氧化方程式Fig.1 Hydrolysis oxidation equation of SA

目前，已報道的關于阿司匹林中游離水楊酸含量的測定方法主要有酸堿滴定法[1,2]、高效液相色譜法[3,4]和分光光度法[5,6]。其中，酸堿滴定法步驟繁瑣、誤差較大；在此基礎上，新版藥典分別對游離水楊酸的檢查方法進行了改進[7,8]，即采用了高效液相色譜法（HPLC）進行檢測；但HPLC法測量結果雖精確度高、準確度好但分析時間長、儀器昂貴、不利于基層推廣。本文是在傳統(tǒng)的紫外分光光度法的基礎上，對吸收波長、溶劑選擇和測定時間等條件進行深入研究，從而建立了一種簡便紫外光度法快速測定阿司匹林中游離水楊酸含量的方法。該法能夠快速有效地進行實際樣品中游離水楊酸的定量測定，為大量樣品的實時光譜響應與定量測定提供了一種快速簡便的分析方法，試驗結果較為滿意。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

TU-1950紫外可見分光光度計（配1cm的石英比色皿，北京普析通用儀器有限責任公司）。

水楊酸（AR，批號20190524）、無水乙醇（AR，批號20180822）均購自國藥集團化學試劑有限公司；阿司匹林片（規(guī)格100mg，批號BJ45442拜耳醫(yī)藥保健有限公司）。濾紙、容量瓶、玻璃棒、燒杯若干。

1.2 樣品處理

將阿司匹林片研磨成粉狀、過篩，準確稱取粉末0.05g于無水乙醇定容至50mL，搖勻溶解后過濾，取濾液放置待測，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3 標準溶液配制

準確稱取水楊酸0.05g，加入無水乙醇定容至100mL，配制成500μg·mL-1的水楊酸標準儲備液，臨用時稀釋成不同濃度，配制成1.0、2.0、4.0、8.0、10.0、20.0、25.0、30.0、40.0、50.0μg·mL-1的水楊酸標準工作液。

1.4 樣品測定

于最佳檢測條件下固定紫外檢測波長，在304nm處測定標準系列溶液的吸光度，得到水楊酸的標準曲線。同樣方法測定待測樣品的吸光度，代入標準曲線求得樣品中游離水楊酸含量。

2 結果與討論

2.1 測定波長的選擇

將10.0μg·mL-1的水楊酸標準溶液于紫外可見分光光度計上分別在200～400nm的波長范圍內(nèi)掃描紫外吸收圖譜，測得水楊酸溶液在304、235和208nm的波長處均有吸收，見圖2。

圖2 水楊酸的紫外吸收圖譜Fig.2 UV absorption spectrum of SA

為確定最佳檢測波長，將新配于過夜放置的阿司匹林待測樣品溶液分別進行波長掃描，發(fā)現(xiàn)過夜放置的阿司匹林在304nm波長處溶液有明顯吸收而在其他波長處變化不大，說明此波長處有水楊酸產(chǎn)生；同時考慮到阿司匹林本身的波長干擾，故試驗選定304nm波長處作為測定游離水楊酸的最佳波長，該結果與其他文獻報道一致[9]。

2.2 樣品溶劑的選擇

由于不同處理溶劑對測試體系的可靠性和穩(wěn)定性都有很大影響，因此，試驗分別選用無水乙醇、10%無水乙醇和PBS緩沖溶液（pH值為7）等幾種常用中性溶劑來綜合考察溶劑對測定體系的影響。結果表明，一系列相同濃度的水楊酸溶液因處理溶劑不同而呈現(xiàn)不同的吸光度值。同一濃度對應的吸光度值由大到小依次為無水乙醇、10%無水乙醇和PBS。據(jù)此，本試驗選擇無水乙醇作為樣品處理溶劑。

2.3 測定時間的選擇

本文選擇無水乙醇作為溶劑考察水楊酸標準品在該溶劑中的穩(wěn)定性。結果發(fā)現(xiàn)，某一固定濃度（10.0μg·mL-1）的水楊酸-乙醇待測液的吸光度在0～120min內(nèi)波動不大，并未發(fā)生明顯變化，見表1。

表1 水楊酸穩(wěn)定性試驗測定結果Tab.1 Determination results of SA stability test

表1結果說明，水楊酸標準溶液在乙醇中未隨時間推移而產(chǎn)生分解，間接證明了選擇乙醇作為溶劑基本能夠避免因試驗過程中水楊酸含量變化而造成的測定偏差。但是，同時考慮到阿司匹林溶液在乙醇溶液中會發(fā)生一定程度的水解作用，因此，建議在實際樣品測定時阿司匹林溶液不宜長時間放置，現(xiàn)配現(xiàn)用為佳。

2.4 線性方程和線性范圍

按照本法在304 nm波長處測定體系吸光度，以濃度和吸光度作線性回歸，繪制水楊酸在不同濃度時對應的標準工作曲線。結果表明，水楊酸在1.0～50.0μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關系，線性方程y=0.0283x-0.0015，r=0.9994。

2.5 精密度和回收率

為了驗證方法的準確度，在最佳試驗條件下進行了3個不同加標量的加標回收試驗（n=6）。結果發(fā)現(xiàn)，低、中、高3個加標量對應的樣品回收率分別為98.64%、96.72%和93.74%，平均回收率為96.37%。同樣的，對于精密度試驗，通過連續(xù)進樣6次，即對同一樣品平行測定6次，計算3個不同加標量的相對標準偏差（RSD），結果顯示，不同加標量對應的相對標準偏差分別為0.93%、1.20%和1.08%，重復性良好，試驗結果表明，該方法精密度可滿足檢測要求，試驗結果見表2。

表2 精密度和回收率試驗結果Tab.2 Precision and recovery test results

2.6 實際樣品的測定

將某一批次的阿司匹林片進行樣品處理，按照前處理方法配制成質量濃度為1000μg·mL-1的待測液。依照本法即刻進行阿司匹林中游離水楊酸含量的測定（n=6），得到阿司匹林樣品的游離水楊酸的檢測濃度范圍為1.2191～1.5018μg·mL-1，折合百分含量范圍為0.1219%～0.1502%，平均百分含量為0.1349%，相對標準偏差RSD為0.10%，測定結果見表3。該結果低于藥典方法規(guī)定游離水楊酸的檢查限度1.5%，產(chǎn)品合格。

表3 實際樣品測定結果（n=6）Tab.3 Determination results of samples（n=6）

3 結論

本文以阿司匹林-水楊酸體系為研究對象，采用紫外光譜法對阿司匹林中游離水楊酸含量進行測定。試驗對吸收波長、溶劑選擇和測定時間等條件進行了分析研究，通過標準曲線的繪制，以及回收率和精密度試驗，驗證了紫外分光光度法測量阿司匹林中水楊酸含量的可行性，并取得較為滿意的結果，為下一步采用其他測定方法進行試驗對比分析與參數(shù)改進的研究工作奠定了良好基礎。紫外光譜法作為一種簡便快速的分析測試方法，能夠快速有效地進行實際樣品中游離水楊酸的定量測定，為大量樣品的實時光譜響應與定量測定提供了一種快速簡便的分析方法。值得一提的是，選擇304nm作為體系最佳吸收波長可最大程度上減弱阿司匹林干擾，從而快速準確測定水楊酸含量。該法操作簡便，試劑廉價易得，準確度高，適用于大批量中游離水楊酸含量的快速定量測定，為阿司匹林制藥合成過程中游離水楊酸含量的實時監(jiān)測提供了可行性。