PTEN、P53蛋白表達與甲狀腺癌發生發展的關系

李 明 許麗穎 魏蘭濤

在臨床上，甲狀腺癌是常見的頭頸部惡性腫瘤之一，在我國的部分地區甲狀腺癌的發病率正以每年4%的速度增長。侵襲與轉移是甲狀腺重要的特征，也是導致甲狀腺癌患者死亡的重要因素，相關資料表明腫瘤的轉移和浸潤是1種復雜的動態過程，同腫瘤基因失控以及多種細胞因子和受體之間作用關系密切[1]。PTEN基因屬于具有磷酸酶火星的抑癌基因，能夠對細胞增殖產生抑制作用，促進細胞凋亡并參與細胞周期調控過程，近年來發現在惡性腫瘤轉移過程中也起到重要作用；P53基因目前已經證實為抑制癌基因常見的的一類，而在腫瘤組織中一半以上出現P53基因突變，發生空間構象改變造成對細胞生長凋亡過程失去控制繼而轉變為癌基因，但是臨床對于甲狀腺癌患者體內兩種基因變化情況臨床報道少見[2]。本研究分析了甲狀腺癌組織中人第10號染色體缺失的磷酸酶(PTEN)、P53蛋白的表達及其意義，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究收集了我院在2017年1月至2019年10月期間收治的80例甲狀腺癌組織及80例甲狀腺良性腫瘤組織。入選標準：①甲狀腺癌的診斷標準參考2015年NCCN制定的甲狀腺癌診斷指南中的標準；②年齡≤79歲；③經病理學檢查予以證實；④患者無放化療史及內分泌治療史。排除標準：①有甲狀腺其他手術史者；②合并有其他惡性腫瘤者；③免疫功能疾病患者；④病理學資料缺失。甲狀腺癌組，年齡33～78歲，平均(52.2±12.6)歲，其中男性29例、女性51例；病理類型：乳頭狀癌64例、濾泡癌11例、髓樣癌5例；腫瘤分化程度：低分化32例、中分化29例、高分化19例；頸部淋巴結轉移陽性40例；TNM分期：Ⅰ期20例、Ⅱ期28例、Ⅲ期25例、Ⅳ期7例。良性組，年齡29～79歲，平均年齡(50.8±14.3)歲，其中男性25例、女性55例，經病理學檢查證實：結節性甲狀腺腫38例、甲狀腺纖維瘤32例、其他10例。2組患者就一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 指標檢測方法及判斷標準

對獲取的組織進行切片在載玻片烘烤，在二甲苯浸泡1.5 h進行脫蠟和水洗，沖洗后加入緩沖液加入山羊血清進行封閉，加入一抗后在4 ℃過夜，加入二抗放置15 min置入緩沖液，加入辣根酶標記鏈霉卵白素置入緩沖液，進行DAB顯色后用蘇木精復染細胞核，然后再次水洗、乙醇脫水再用二甲苯透明、中性樹脂封片。在顯微鏡下進行觀察。

免疫組化結果判定：PTEN蛋白、P53蛋白陽性表達分為黃色、棕黃色和褐色。①根據著色強度分為：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；②根據陽性細胞比例分為：1分為陽性細胞所占比例≤10%、2分為陽性細胞占比例11%～50%、3分為陽性細胞占比例51%～75%、4分為陽性細胞占比例>75%，陰性為兩種積分相乘總分<3分、陽性為≥3分；“-”表達；為3～5分，“+”表達；為6～9分，“++”表達；>9分，“+++”表達。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 甲狀腺癌與甲狀腺良性腫瘤組織中的PTEN蛋白、P53蛋白陽性表達率差異

甲狀腺癌組織中PTEN蛋白陽性表達率(68.75%)和P53蛋白陽性表達率(63.75%)，均高于良性組的15.00%、17.50%，具有統計學差異(P<0.05)。見表1、表2。

表1 甲狀腺癌與甲狀腺良性腫瘤組織中的PTEN蛋白陽性表達率差異/例

表2 甲狀腺癌與甲狀腺良性腫瘤組織中的P53蛋白陽性表達率差異/例

2.2 甲狀腺癌組織中的PTEN蛋白、P53蛋白陽性表達率與臨床病理學特征的關系

在不同TNM分期、是否發生淋巴結轉移的甲狀腺癌組織中的PTEN蛋白陽性表達率具有統計學差異(P<0.05)；是否發生淋巴結轉移的甲狀腺癌組織中的P53蛋白陽性表達率具有統計學差異(P<0.05)。見表3、表4。

表3 甲狀腺癌PTEN蛋白表達與腫瘤臨床病理學特征的關系(例，%)

表4 甲狀腺癌P53蛋白表達與腫瘤臨床病理學特征的關系(例，%)

2.3 甲狀腺癌組織中的PTEN蛋白、P53蛋白表達的相關性分析

甲狀腺癌組織中PTEN蛋白與P53蛋白陽性表達呈顯著正相關關系(Spearman秩相關系數=0.836，P<0.05)。見表5。

表5 甲狀腺癌組織中的PTEN蛋白、P53蛋白表達的相關性分析/例

3 討論

甲狀腺癌是1種臨床上常見的頭頸部惡性腫瘤，其發病率為全身其他部位惡性腫瘤的1%[3-4]，且在各個年齡段均可以發病，女性患者是男性的3倍之多，近年來呈上升趨勢。臨床上對該病治療主要采用手術切除的方法，但是術后有些患者會出現復發和轉移[5-6]。在早期，頸部腫物并不明顯，患者不會產生不適，但是到晚期后，會對壓迫與侵犯人體組織，使患者出現吞咽、呼吸及發音功能異常等，對患者生活帶來不便，威脅患者生命安全[7-8]。

本研究分析了甲狀腺癌PTEN、P53蛋白表達情況，PTEN為最早發現的抑癌基因，具有磷酸酶活性，因此可以保證人體物質代謝過程與內環境穩定，一旦PTEN缺失同惡性腫瘤進展過程以及預后不良關系密切[9]。動物學試驗證實了PTEN 缺陷的鼠胚胎細胞出現明顯增生與胚胎致死性表現，雜合子基因的敲擊動物在不同組織類型中腫瘤的發生率均顯著增高[10]。研究發現PTEN基因一方面會造成細胞周期停滯與程序性死亡，對細胞粘連、移動與分化產生調節作用，通過下調PIP3 水平造成細胞停止于G1期誘導細胞凋亡；另一方面PTEN 還可以調節細胞生長、增殖、遷移、分化等多種效應，但是其對于患者性別、年齡以及包膜完整性方面無明顯關聯，而是與腫瘤的分期、區域淋巴結轉移具有高度相關性，而且臨床分期越高以及淋巴結轉移出現后其表達水平越低，說明同惡性腫瘤生物學行為與預后關系緊密，同本研究報道相似[11]。此外基因學發現PTEN基因含具備9個外顯子和8個內顯子，含有的多個CGG重復序列可以為甲基化提供基礎，其高甲基化會讓基因處于靜止狀態，造成PTEN基因低水平轉錄甚至缺失[12]。P53基因則是抑癌基因常見的一類，在惡性腫瘤研究中廣泛研究，人類腫瘤組織中一半以上發現有P53基因的突變，細胞空間和構象發生變化，造成了該基因對于細胞生長凋亡及DNA修復的調控作用[13]。研究顯示P53基因的突變會導致甲狀腺癌的形成，同時可以讓甲狀腺癌由高分化轉變為低分化或者未分化進展，突變的P53蛋白可以抑制人體野生類型P53基因活性，表現會細胞突變、丟失、重排等形式而失活，造成了DNA損傷并無法修復，細胞的遺傳不穩定并向惡性增殖演變[14]。研究發現PTEN為具有雙特異磷酸酶活性的抑癌基因，具有促進自噬體的形成作用，而p53蛋白則可以抑制人體野生型基因活性，造成DNA損傷不能被修復，細胞遺傳不穩定，因此兩者可能通過相互影響、相互促進作用造成患者體內抑癌基因轉為癌基因，促進了腫瘤發生和發展[15]。本研究顯示，甲狀腺癌組織中的PTEN蛋白陽性表達率68.75%、P53蛋白陽性表達率63.75%均高于良性組的15.00%、17.50%，說明在甲狀腺癌中呈現PTEN蛋白、P53蛋白陽性表達。在不同TNM分期、是否發生淋巴結轉移的甲狀腺癌組織中的PTEN蛋白陽性表達率具有統計學差異；是否發生淋巴結轉移的甲狀腺癌組織中的P53蛋白陽性表達率具有統計學差異，說明PTEN蛋白、P53蛋白陽性表達對于甲狀腺癌發生淋巴結轉移具有重要判斷價值，而PTEN蛋白陽性表達對甲狀腺癌分期具有一定的價值。甲狀腺癌組織中的PTEN蛋白與P53蛋白陽性表達呈顯著的正相關關系，說明兩項指標與甲狀腺癌的發生具有顯著相關性。本研究優勢在于證實了PTEN蛋白、P53蛋白在甲狀腺癌呈現高表達狀態，而且對于腫瘤分期和淋巴結轉移情況具有輔助判斷作用。

綜上所述，甲狀腺癌PTEN、P53蛋白呈高表達較甲狀腺良性腫瘤組織，并且與腫瘤的發生發展具有一定的密切關系。