甲狀腺癌組織中CK19、ARID1A表達水平及與其臨床病理參數及預后的關系

馮凌飛 賀 曾 王景玉

甲狀腺癌是現代十分常見的1種惡性腫瘤[1]。其病理類型可分為4類：乳頭狀癌(PTC)、濾泡樣癌(FTC)、髓樣癌(MTC)以及未分化癌(ATC)，其中最常見的是PTC。治療甲狀腺癌臨床進展比較緩慢，可以選擇藥物、放射性核素或者根治性腫瘤切除術來進行治療[2]。有研究表明，細胞角蛋白19(cytokeratin-19，CK19)在腫瘤轉移中發揮了重要的作用，而AT豐富結構域1A(AT rich interactive domain 1A，ARID1A)在食管癌、膽管癌、胰腺癌等癌癥中的表達顯著降低或缺失[3-5]。本研究通過探究甲狀腺癌組織和癌旁組織中CK19及ARID1A的陽性表達率，來揭示其與甲狀腺癌臨床病理參數及預后的關系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2013年5月至2015年9月期間術后確診的BC標本124例，納入標準：①均經病理切片證實為甲狀腺癌；②臨床資料完整的患者。排除標準：①術前接受過其他特異治療者；②資料丟失或5年內隨訪丟失者。124例獲取甲狀腺癌組織的患者年齡49～74歲，平均年齡(61.46±6.13)歲；男性65例，女性59例；TNM分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期16例，Ⅲ期47例，Ⅳ期49例；腫瘤直徑<1 cm為26例，直徑>1 cm為98例；按照甲狀腺癌組織學類型分類，其中57例PTC，49例FTC，10例MTC，8例ATC；82例發生淋巴結轉移；79例發生包膜侵犯。另外獲得同期術后確診為甲狀腺癌患者的BN標本87例，獲取BN的患者年齡52～75歲，平均年齡(63.18±5.53)歲；男性49例，女性38例。兩組病例年齡、性別比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 檢測方法

應用鼠抗人CK19免疫組化單克隆抗體試劑盒(杭州赫貝科技有限公司)，以及鼠抗人ARID1A免疫組化單克隆抗體試劑盒(SANTA生物技術公司)；通過免疫組織化學檢測方法得到組織切片；首先，標本都經過10%甲醛固定，脫水，然后，采用石蠟包埋機進行包埋，再將其以4 μm層厚切片；然后使用Envision二步法對CK19進行染色，采用SP法對ARID1A進行染色，使用DAB染色液顯色，蘇木精復染30～40 s，然后脫水封片于顯微鏡下觀察。

1.3 結果判定

隨機選取制備好的切片進行觀察，先置于低倍鏡下選取染色均勻、定位準確、染色密度強的部位；然后切換高倍鏡下觀察，以出現黃色、棕黃色或棕褐色顆粒，且渲染顏色顯著高于背景色為陽性，陰性為不著色；①染色色度評分：沒有染色判為0分、黃色判為1分、黃棕色判為2分、棕褐色判為3分。②通過陽性細胞百分比進行評分：陽性細胞數/細胞總數的值來判定，0～25%計1分、26%～50%計2分、51%～100%計3分。表達強度評分=陽性細胞百分比評分×染色色度評分，評分<1分為陰性、1～2分為弱陽性、2～4分為陽性、>4分為強陽性；表達陽性=弱陽性+陽性+強陽性。

1.4 統計學方法

應用SPSS 20.0進行統計學分析。計數資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 甲狀腺癌組織中CK19、ARID1A蛋白陽性表達特點

通過對CK19、ARID1A免疫組化染色，可見其主要分布在甲狀腺癌組織中的病變上皮內，CK19在細胞質中表達，ARID1A主要表達定位于細胞核，呈現陰性或弱陽性的表達。

2.2 在甲狀腺癌及癌旁組織中CK19、ARID1A蛋白陽性表達情況比較

CK19在癌變組織中陽性表達率為88.71%，顯著高于其在癌旁組織中的陽性表達率(33.33%)(P<0.05)，ARID1A在癌變組織中的陽性表達率為48.39%，顯著低于其在癌旁組織中的陽性表達率(79.31%)(P<0.05)。見表1。

表1 在甲狀腺癌及癌旁組織中CK19、ARID1A蛋白陽性表達情況比較(例，%)

2.3 在甲狀腺癌組織中CK19、ARID1A的表達與臨床病理特征的關系

CK19在Ⅰ、Ⅱ期甲狀腺癌組織中的陽性表達率為64.29%，顯著低于其在為Ⅲ、Ⅳ期中的95.83%(P<0.05)，CK19在腫瘤直徑<1 cm的甲狀腺癌組織中的陽性表達率為57.69%，顯著低于其在腫瘤直徑>1 cm中的96.94%(P<0.05)，CK19在有淋巴結轉移甲狀腺癌組織中的陽性表達率為95.12%，顯著高于其在無淋巴結轉移中的76.19%(P<0.05)，CK19在甲狀腺癌組織中的陽性表達率與患者年齡、性別、病理類型和包膜侵犯無相關性(P>0.05)。

ARID1A在四種病理類型甲狀腺癌組織中的陽性表達率隨著其惡性程度的升高而逐漸降低，差異具有統計學意義(P<0.05)，ARID1A在有淋巴結轉移甲狀腺癌組織中的陽性表達率為56.76%，顯著高于其在無淋巴結轉移中的36.00%(P<0.05)，ARID1A在甲狀腺癌組織中的陽性表達率與患者年齡、性別、分化程度、腫瘤直徑和包膜侵犯無關(P>0.05)，見表2。

表2 在甲狀腺癌組織中CK19、ARID1A表達與其病理特征的關系(例，%)

2.4 甲狀腺癌組織中CK19、ARID1A表達與患者預后的關系

CK19和ARID1A在甲狀腺癌組織中的陽性表達率均與患者的復發率和死亡率無顯著相關性(P>0.05)，見表3。

表3 在甲狀腺癌組織中CK19、ARID1A的表達與患者預后的關系(例，%)

3 討論

2017年我國癌癥中心統計的數據顯示，甲狀腺癌疾病的發病率在我國大、中、小城市分別為28.9%、12.9%、7.8%，對人類的生命安全造成極大威脅[6]。因此探究甲狀腺癌發生、發展時的相關基因，以及其在癌細胞侵襲、轉移時的作用機制，有利于甲狀腺癌的早期診斷和治療。CK19是由KRT19基因編碼的構成細胞骨架的一種中間絲狀物[7]，ARID1A是1個非常重要的抑癌基因，在細胞的增殖、分化，DNA的修復，腫瘤的發生、發展、轉移與復發等方面發揮了重要的作用[8]。因此本研究通過觀察CK19和ARID1A在BC和BN中的表達水平，來探究其與甲狀腺癌臨床病理參數及預后的關系。

本研究結果顯示，CK19在BC中的陽性表達率88.71%顯著高于其在BN中的陽性表達率33.33%，與林軍等[9]的研究結果相類似，提示CK19對鑒別甲狀腺腫瘤的良惡性有著重要意義。此外，研究結果還顯示，CK19在有淋巴轉移的甲狀腺癌組織中的陽性表達率95.12%顯著高于其在沒有淋巴轉移中的76.19%，在分化程度為Ⅰ、Ⅱ期的甲狀腺癌組織中的陽性表達率64.29%顯著低于其在分化程度為Ⅲ、Ⅳ期中的95.83%，在腫瘤直徑<1 cm的甲狀腺癌組織中的陽性表達率57.69%顯著低于其在腫瘤直徑>1 cm中的96.94%，說明CK19參與了甲狀腺癌的發生發展過程，并且與腫瘤的轉移密切相關，這可能是因為CK19可以增強細胞的運動性，而且還可以加強細胞外物質的降解。Laco等[10]報道甲狀腺癌的甲狀腺外轉移與CK19的表達水平以及鈣粘蛋白表達水平的下調密切相關。此外，Alix-Panabieres等[11]也推測CK19不僅可以作為甲狀腺癌的腫瘤標志物,還在其分化、浸潤、早期轉移及復發的過程中起到了生物學作用。本研究結果顯示，ARID1A癌變組織中的陽性表達率48.39%顯著低于其在癌旁組織中的陽性表達率79.31%，在四種病理類型的甲狀腺癌組織中的陽性表達率隨著其惡性程度的升高而逐漸降低；并且在有淋巴轉移的甲狀腺癌組織中的陽性表達率56.76%顯著高于其在沒有淋巴轉移中的36.00%。其原因是WI/SNF是1種重要的染色質重塑復合物，而ARID1A是其亞基里突變頻率最高的基因，因此ARID1A基因的突變會導致染色質重塑異常，進而擾亂基因的表達，引發胃癌等多種腫瘤的發生。研究結果[12]顯示，ARID1A的突變還能促使腫瘤細胞的侵襲和轉移。此外，Wang等[13]的研究結果也發現，ARID1A的過表達會抑制癌細胞的形成，而其表達量過低會影響癌細胞的增殖和分化，進而導致患者預后情況不佳。

綜上所述，甲狀腺癌組織中CK19的陽性表達率高，且與癌細胞的發展、浸潤與轉移密切相關；而ARID1A的低表達或缺失與甲狀腺癌發生、發展及轉移相關，在不同病理組織類型的甲狀腺癌中，惡性程度越高，ARID1A的表達水平越低。