乳酸脫氫酶與脂肪細胞因子resistin在胰腺癌中的表達及其臨床意義

尚鴛鴛 朱桂麗 邢建強

胰腺癌是1種惡性程度很高的消化道惡性腫瘤[1-3]，死亡率較高，診斷和治療均存在較大困難[4-5]。相關學者[6]發現肥胖人群中胰腺癌的發病率明顯高于普通人群，但其機制尚不明確[7-8]。目前臨床采取的治療仍然是以外科手術治療為主，并結合放化療等綜合治療[9-11]。雖然手術是唯一可能根治的方法，但已有相關研究指出胰腺癌早期診斷困難，因此其治愈性切除率僅5%，術后5年生存率低且并發癥多[12]。早期診斷和靶向治療可以成為綜合治療的手段彌補手術治療的不足。部分研究者認為監測癌胚抗原CEA和糖類抗原CA19-9能夠早期提示胰腺癌患者的病情輕重并指導手術治療[13-15]，然而其診斷結果假陽性率高。有研究發現乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase，LDH)和脂肪細胞因子resistin與胰腺癌預后有關。本文通過檢測胰腺癌患者的LDH和resistin表達的情況，探討乳酸脫氫酶與脂肪細胞因子resistin在胰腺癌中的表達及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

2013年6月至2019年1月我院收治的135例胰腺癌患者，男性78例，女性57例，年齡42～75歲，平均年齡(56.28±8.16)歲。參考2002年日本胰腺病協會修訂的分期標準：Ⅰ期12例，Ⅱ期42例，Ⅲ期63例，Ⅳ期18例。收集患者的病理蠟塊患者均對本研究知情且簽署同意書。

1.2 入選標準

納入標準：①術前未行放化療；②病理確診為胰腺癌；③接受根治性手術。排除標準：①精神疾病；②患者或家屬不同意簽知情協議書。

1.3 研究方法

將入組胰腺癌患者病理蠟塊制備成切片后，依照試劑盒的說明書按次脫蠟，水化和抗原修復，滴入一抗兔抗人resistin抗體(SigmaR1779)，稀釋濃度比值1∶200，磷酸緩沖溶液(PBS)作為陰性對照組，經沖洗后切片滴入二抗IgG(Dako EnVision K5007)，二氨基聯苯胺(DAB)顯色，封片及鏡檢。

采集經病理明確診斷的胰腺癌患者血清乳酸脫氫酶，通過TIMER數據庫搜索LDH在135例胰腺癌組織中和正常胰腺組織中的差異表達及臨床預后等情況。

1.4 脂肪細胞因子 resistin表達結果判斷標準

Resistin陽性診斷(Volm方法)：依據切片中陽性細胞著色強度和所占比例，選擇十個高倍視野判斷結果。標本0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。陽性細胞所占比例0是0分，1%～25%是1分，>25%～50%是2分，>50%是3分。最后將陽性細胞著色強度和陽性細胞占比分值相加得出得分，<3分即陰性，≥3分即陽性。

1.5 隨訪

隨訪起始時間從首次根治性手術日期開始，無病生存期主要起點時間為初次LDH檢查時間，主要終點時間為術后首次發現腫瘤復發、轉移或其他原因死亡為止，末次回訪時間為2019年5月。隨訪方式為電話回訪與門診復診。

1.6 統計學處理

2 結果

2.1 胰腺癌組織中resistin表達

胰腺癌組織中resistin表達陽性率為49.1%(65/135)。resistin表達水平與年齡、性別、體質量指數無關(P>0.05)，與JPS病理分期有關(表1)。

表1 Resistin表達水平與胰腺癌臨床參數的關系/例

2.2 Resistin表達與胰腺癌患者預后的關系

共有5例患者在研究中失訪，余130例患者的中位隨訪時間為23(2～48)個月。截至末次隨訪，resistin陰性組和陽性組患者的中位無病生存期為分別為28個月、9個月，差異具有統計學意義(χ2=9.833，P<0.05)，見圖1。

圖1 resistin表達與胰腺癌患者預后的關系

2.3 LDH在胰腺癌中的表達

在胰腺癌中，LDH mRNA的表達水平為(13.35±1.06)，而正常胰腺組織中的表達水平為(4.43±3.32)。LDH mRNA在胰腺癌組織中的表達水平明顯高于正常胰腺組織(t=29.738，P<0.05)，見圖2。

圖2 LDH在胰腺癌組織和正常胰腺組織中表達水平

2.4 胰腺癌患者預后影響因素Cox比例風險回歸模型結果

Cox比例風險回歸模型結果分析：年齡、LDH、腫瘤分期是影響胰腺癌患者預后的獨立因素，見表2。

表2 Cox比例風險回歸模型結果分析

3 討論

Resistin為脂肪細胞因子分泌的多肽類細胞因子，位于人體染色體19p13.3，是108個氨基酸殘基組成，分子結構含有半胱氨酸與絲氨酸殘基，因二硫鍵鏈接的二聚體形式存在[16]。既往研究，胰腺癌患者更多的是通過CT和MRI進行檢測和診斷。CT掃描具有簡單、易操作、時間短等優點，MRT具有精準性的成像結果，然而，二者在一定程度上誤診率較高。目前領域，有學者[17]檢測基質金屬蛋白酶MMP2/MMP9在胰腺癌組織中mRNA和總蛋白的表達，發現有神經周浸潤的胰腺癌組織MMP2/MMP9表達有所增加，但在早期胰腺癌組織中，MMP2/MMP9在癌旁組織與腫瘤組織中蛋白表達增加不明顯。胰腺癌具有較強的侵襲性[18]，因此需要我們進一步探討影響胰腺癌高侵襲轉移性的相關機制與敏感基因對改善患者預后的意義[19]。資料報道[20]，resistin的生理功能和肥胖、胰島素抵抗與慢性炎癥有關。此外，還有相關實驗證明，resistin 通過核轉錄因子-kB徑路介導機體的炎癥反應，促進腫瘤白介素-12，壞死因子-α等促炎因子合成表達增加，讓機體保持過度炎癥反應狀態。本研究使用免疫組化方法對135例胰腺癌患者病理組織標本的脂肪細胞因子resistin 的表達情況進行檢測，結果顯示resistin 表達水平與胰腺癌JPS病理分期有關。Resistin表達陽性越高提示JPS病理分期越晚。同時resistin表達陽性者的無病生存期是短于表達陰性者。總結以上，resistin的表達可能和胰腺癌發生、發展均有聯系。本研究還通過TIMER數據庫所知，LDH表達在局部免疫微環境中呈正相關。史里等檢測到LDH和轉錄因子Krvppel樣因子4在胰腺癌組織中呈負相關。觀察Cox比例風險回歸模型，LDH能較為準確地評估胰腺癌臨床預后，故LDH可能會被作為臨床預后指標之一。此外，基于把腫瘤分期作為協變量，使用擬合函數方法分析，可能致使Cox比例風險回歸模型結果沒有統計學意義。本研究通過實驗發現resistin 與LDH 在腫瘤分期上的表達水平出現了相關性。Resistin的高表達水平與血清LDH水平升高均作用于體內環境，促進腫瘤出現和進展，影響胰腺癌的預后。

綜上所述，resistin及LDH參與胰腺癌腫瘤發生發展的過程，但是二者是如何在腫瘤局部免疫微環境中發揮作用，還需要進一步通過實驗更深入發掘。