膠質瘤組織中Beclin1及Bcl-2的表達水平及其與術后復發的相關性

吳紅舉 賈東佩 胡 科 李春雷

膠質瘤是顱內最常見的、來源于神經上皮的惡性腫瘤，占顱內腫瘤的40%左右，病理類型包括室管膜瘤、髓母細胞瘤、星形細胞瘤、少突膠質細胞瘤、膠質母細胞瘤等，由于腫瘤多呈浸潤性生長，手術治療雖然有一定的效果，但是不易全切，在術后容易復發[1-2]。有研究認為膠質瘤患者術后常在短期內復發，多數發生在距原發灶≤2 cm的范圍內，嚴重影響患者的預后[3]。多種因素可影響膠質瘤患者的預后，包括組織學分級、臨床分期、年齡[4-5]，但對影響膠質瘤術后復發的因素還不明確。隨著基因診斷學與現代分子生物學及的發展，部分分子標志物已被用于預測惡性腫瘤的預后[6]。自噬相關基因Beclin1是第1個被確認的自噬通路上的腫瘤抑制因子，也是酵母ATG6基因在哺乳動物中的同源物，其表達異常在惡性腫瘤的發生與發展中發揮重要作用[7-8]。B淋巴細胞瘤-2(Bcl-2)是調節細胞凋亡的重要因子，也是一種促癌因子，在多種惡性腫瘤組織中呈高表達狀況[9-10]。本文具體探討了膠質瘤組織中Beclin1及Bcl-2的表達水平及與術后復發的相關性，現總結報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

2017年3月到2020年2月選擇在本院神經外科診治的膠質瘤患者92例作為研究對象。納入標準：臨床與隨訪資料完整；首次神經外科手術；具有手術指征；病理診斷為膠質瘤；術前均未行放化療及免疫治療；年齡20～70歲。排除標準：標本資料被破壞者；臨床與隨訪資料缺乏者；妊娠與哺乳期婦女。

入選的92例患者中男性48例，女性44例；年齡最小34歲，最大68歲，平均年齡(52.48±3.77)歲；病理類型：星形膠質細胞瘤48例，少突膠質細胞瘤32例，室管膜細胞瘤6例，多形性膠質母細胞瘤2例，髓母細胞瘤4例；臨床分級：Ⅰ級36例，Ⅱ級24例，Ⅲ級18例，Ⅳ級14例；組織學分化：高分化38例，中分化32例，低分化22例；手術范圍：非全切22例，全切70例；術后放療34例，術后化療28例。

1.2 Beclin1及Bcl-2表達檢測

取所有患者的術后病灶組織標本(病灶組)與癌旁組織標本(癌旁組，距腫瘤邊緣≥2 cm正常標本)，制成病理切片，采用酶聯免疫法檢測Beclin1及Bcl-2表達水平。Beclin1及Bcl-2一抗、二抗均購于美國BD公司，免疫組化試劑盒和二氨基聯苯胺顯色試劑盒購自福州邁新公司，病理染色嚴格按照說明書進行操作。以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照，以已知陽性切片作為陽性對照，每例切片在陽性反應區域選擇5個200倍視野，計算染色區域累積光密度值與面積，取平均值，由病理科醫生判斷陽性情況。

1.3 復發隨訪

通過電話、微信及門診隨診、門診復查進行隨訪，記錄患者術后復發情況，復發時間為術后至定期影像學復查發現復發病灶的間隔時間。本研究所有隨訪時間截至2020年9月1日。

1.4 統計方法

選擇SPSS21.00軟件對本研究數據進行分析，計量數據以均數±標準差(Mean±SD)表示(對比為t檢驗)，計數數據采用例數(百分比)，即n(%)表示(對比為卡方χ2分析)，采用多元Logistic逐步回歸分析進行多因素分析，相關性分析采用Spearman相關性分析，P<0.05為統計學上差異有顯著性。

2 結果

2.1 Beclin1及Bcl-2表達陽性率對比

病灶組的Beclin1及Bcl-2表達陽性率分別為34.8%和70.7%，癌旁組分別為72.8%和29.3%，組間對比差異都有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組Beclin1及Bcl-2表達陽性率對比(例，%)

2.2 復發情況

92例患者術后都得到隨訪，復發32例，復發率為34.8%，平均復發時間為(12.01±2.17)個月。

2.3 一般資料對比

92例患者按是否復發分為復發組和未復發組，復發組的性別、年齡、病理類型與未復發組對比差異無統計學意義(P>0.05)；2組的臨床分級、組織學分化、手術范圍、術后放療、術后化療等對比差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組一般資料對比

2.4 Beclin1及Bcl-2的表達陽性率及與術后復發的相關性

復發組的Beclin1、Bcl-2的表達陽性率與未復發組對比差異都有統計學意義(P<0.05)。見表3。Spearman相關性分析膠質瘤患者Beclin1、Bcl-2的表達陽性率與術后復發存在相關性(γ=-0.655、0.598，P=0.000)。

表3 Beclin1及Bcl-2的表達陽性率及與術后復發的相關性(例，%)

2.5 影響因素分析

多元Logistic逐步回歸分析顯示Beclin1(OR=4.293)、Bcl-2(OR=2.821)是膠質瘤患者術后復發的獨立影響因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響膠質瘤患者術后復發的多因素分析(n=92)

3 討論

有研究顯示膠質瘤患者經單純手術治療后的5年生存率≦25%，而經過化療、放療、手術等綜合治療方法，中位生存時間也很少超過15個月[11]，主要在于膠質瘤具有腫瘤浸潤性及高度間變的生長特點，病灶多處于腦部重要結構，且與正常腦組織界限不明確，手術難以徹底切除[12-13]。本研究顯示病灶組的Beclin1及Bcl-2表達陽性率分別為34.8%和70.7%，癌旁組分別為72.8%和29.3%，組間對比差異都有統計學意義(P<0.05)。從機制上分析，Beclin1可通過Ⅲ型PI3K形成一個復合體定位于自噬前體結構，從而發揮調節自噬活性。Beclin1表達缺失可使得多種惡性腫瘤逃避自噬死亡，從而使得腫瘤惡性增殖[14]。Bcl-2定位于人類染色體18a21上，主要發揮細胞凋亡調控的作用。Bcl-2的高表達可促使Racl由失活狀態向激活狀態轉變，進而影響細胞的極化性，促進細胞運動和遷移[15]。

膠質瘤的總體預后隨著外科手術及輔助治療手段的不斷更新改進，已經有了很大的改善，但是很多患者在術后容易發生復發，直接影響患者的預后[16]。膠質瘤術后復發定位為原發性膠質瘤術后再次出現復發灶，呈多中心性或散在病灶，可單發也可多發[17]。本研究中92例患者術后復發32例，復發率為34.8%，平均復發時間為(12.01±2.17)個月。復發組的性別、年齡、病理類型與未復發組對比差異無統計學意義(P>0.05)，2組的臨床分級、組織學分化、手術范圍、術后放療、術后化療等對比差異有統計學意義(P<0.05)。從機制上分析，腫瘤的臨床分級越高與組織學分化越低，其惡性程度越高，侵襲性越強，術后更加容易復發。手術范圍、術后放療、術后化療也是影響患者術后復發的基礎因素，此外，長期治療也會對患者的身心狀態與免疫功能造成負面影響[18]。

膠質瘤術后復發的原因復雜，與多種分子生物學因素有關。因而探尋相關基因在膠質瘤的發生及發展機制，對評估預后膠質瘤的復發具有非常重要的價值。本研究顯示復發組的Beclin1、Bcl-2的表達陽性率與未復發組對比差異都有統計學意義(P<0.05)；Spearman相關性分析膠質瘤患者Beclin1、Bcl-2的表達陽性率與術后復發存在相關性(γ=-0.655，0.598，P=0.000)；多元Logistic逐步回歸分析顯示Beclin1(OR=4.293)、Bcl-2(OR=2.821)是膠質瘤患者術后復發的獨立影響因素(P<0.05)。從機制上分析，自噬是亞細胞水平變化的1種進化保守的細胞功能，有利于細胞適應環境與保持細胞功能穩定[19]。Beclin1位于人染色體17q21，不僅可參與自噬體的形成，誘導細胞凋亡，還可促進細胞增殖[20-21]。Bcl-2蛋白是1種重要的抗細胞凋亡分子，在維持線粒體完整性中發揮重要作用[22]。Bcl-2可在腫瘤細胞中發揮抑制細胞凋亡的作用，從而有利于細胞增殖與侵襲[23]。本研究也存在一定的不足，觀察時間不夠長，未觀察到總生存時間，存在一定的偏倚性，將在后續研究中深入探討。

總之，膠質瘤患者術后容易出現復發，且伴隨有Beclin1及Bcl-2異常表達，Beclin1、Bcl-2的表達水平與術后復發存在相關性，也是影響患者復發的主要因素。