ZEB2蛋白表達和E-caderin蛋白對NPC轉移的臨床應用價值

張媛媛 陳選英 薛曉會

鼻咽癌(NPC)是1種常見的惡性腫瘤，多發地區在東南地區和中國南方，發病早期容易發生轉移，是導致患者死亡的主要原因[1]。NPC患者進行放療治療不徹底，局部殘留病灶導致復發，限制其療效和預后。因此，研究NPC的轉移機制和尋找疾病的分子標志物可以提高治療效果，改善預后，具有重要的臨床應用價值[2]。在腫瘤不斷生長和增殖過程中，它們分泌的蛋白質不僅是腫瘤細胞生長，侵襲和轉移所必需的，這些蛋白質還可以從腫瘤細胞分泌并進入血液中，作為腫瘤標志物[3]。上皮型鈣黏蛋白(E-cadherin)是1種重要的細胞粘附分子，粘附連接作用受到破壞時會導致細胞分離[4]。E-box結合鋅指蛋白也稱Zeb蛋白，是特異性DNA序列轉錄因子，其家族成員包括Zeb1和Zeb2[5]。在本研究中，我們從我們的病理中心和相應的鼻咽癌鄰近標本中選取鼻咽癌轉移標本，探討轉錄抑制因子ZEB2蛋白表達和靶蛋白E-caderin蛋白在鼻咽癌轉移中的臨床應用價值。現有報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取在我院病理中心獲取的術后鼻咽癌組織標本90例，符合要求的鼻咽癌癌旁標本90例，研究對象納入時間2017年2月至2019年4月。納入標準：①鼻咽癌的診斷標準參考《鼻咽癌規范化診療指南2013年版》中的標準；②術前經食管鏡取活組織病檢、術后病理學檢查證實；③患者手術前未接受輔助性放化療；④鼻咽癌癌旁組織標本為距離腫瘤邊緣<5 cm的食管組織；⑤本研究獲得醫學倫理委員會的批準，研究對象的各種基礎資料完整。排除標準：①伴有其他部位的原發性腫瘤；②因其他類型腫瘤實施放化療；③伴有免疫系統疾病、長期使用免疫調節劑的患者；④合并其他類型的嚴重食管病變。

90例鼻咽癌患者，年齡43～79歲，平均(59.8±10.3)歲，TNM分期：Ⅰ期21例、Ⅱ期36例、Ⅲ期29例、Ⅳ期4例；腫瘤組織分化程度：高分化20例、低分化32例、中分化38例；淋巴結轉移陽性59例；浸潤深度：肌層55例、未達肌層35例；病灶最大徑>5 cm 47例。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色 將樣品用甲醛固定，脫水并包埋在石蠟中。制備4 μm厚的連續切片，在65 ℃下脫蠟，并使用30 ml/l的過氧化氫使內源過氧化物酶失活5 min，微波修復抗原，在4 ℃濕盒中加入一抗過夜，在37 ℃下加入生物素化的二抗30 min，用辣根過氧化物酶標記的抗生物素蛋白在37 ℃加入30 min，然后用氨基苯甲酰胺沖洗(DAB)顯色，蘇木精復染，脫水，密封后在光學顯微鏡下觀察。

1.2.2 免疫組化陽性結果判斷 ZEB2、E-caderin蛋白陽性染色分別表達于細胞核和細胞質中，通過棕色或棕色的細胞核和/或細胞質判斷陽性染色。每個切片選擇5個400倍視野，計算陽性細胞的數量計算為腫瘤細胞總數的百分比：沒有陽性細胞或陽性細胞<10%，其被判定為陰性;陽性細胞計數≥10%，并被判定為陽性。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 兩組中ZEB2蛋白、E-caderin蛋白陽性表達率比較

鼻咽癌組織中的ZEB2蛋白、E-caderin蛋白陽性表達率(67.78%、71.11%)顯著高于癌旁組織的22.22%、74.44%，差異具有統計學意義(P<0.05)(表1)。

表1 兩組ZEB2蛋白、E-caderin蛋白陽性表達率比較(例，%)

2.2 ZEB2蛋白、E-caderin蛋白表達與鼻咽癌組織病理學參數的關系

ZEB2蛋白陽性表達率與TNM分期和浸潤深度顯著相關(P<0.05)；與淋巴結轉移、病灶直徑、組織學分化程度無顯著相關(P>0.05)，見表2。

表2 ZEB2蛋白表達與鼻咽癌癌組織病理學參數的關系(例，%)

經比較發現，E-caderin蛋白陽性表達率與TNM分期和是否發生轉移顯著相關(P<0.05)；與病灶直徑、組織學分化程度、浸潤深度無顯著相關性(P>0.05)，見表3。

表3 E-caderin蛋白表達與鼻咽癌組織病理學參數的關系(例，%)

2.3 鼻咽癌患者中ZEB2與E-caderin蛋白表達的相關性

鼻咽癌組織中Zeb2陽性病例中有42例E-cadherin陽性，Zeb2陰性病例中E-eadherin陽性率為75.86%(22/29)，兩者表達呈顯著負相關性(Z=0.031，P<0．000)(表4)。

表4 兩組標本中ZEB2蛋白、E-caderin蛋白陽性表達情況比較(例，%)

3 討論

在生長和增殖過程中，腫瘤不斷與身體交換，它們分泌的蛋白質不僅是腫瘤細胞生長，侵襲和轉移所必需的。這些蛋白質可以從腫瘤細胞分泌進入血液，成為腫瘤標志物，例如由前列腺癌細胞分泌的前列腺特異性抗原(PSA)和肝癌細胞分泌的甲胎蛋白可用作診斷，功效監測和復發及轉移預測的腫瘤標志物[5-6]。腫瘤發展，侵襲和轉移是涉及多個分子的多步驟，高選擇性非隨機過程，并且基因水平的變化不可避免地導致大量分泌蛋白功能發生變化[7]。然而，由于這些方法的局限性，以前關于腫瘤分泌蛋白的大多數研究都集中在單一或某些類型的蛋白質上[8]。隨著蛋白質組學的出現，開始對分泌蛋白質進行研究，分泌蛋白不限于由經典分泌途徑分泌的蛋白質，還包括由非經典分泌途徑分泌的蛋白質，包括細胞表面脫落的蛋白質和其他途徑釋放的蛋白質，與腫瘤的發展密切相關[9]。

E-cadherin是1種鈣依賴性跨膜糖蛋白，使細胞之間緊密連接，維持穩定的組織結構，它在各種上皮細胞中普遍存在，參與細胞內聚并在組織結構重建和形狀維護中起著關鍵作用[10]。E-eadherin主要介導同源細胞的粘附功能，其表達降低或功能喪失降低了癌細胞與鄰近細胞之間的粘附，導致腫瘤細胞的活性和活動范圍增加，從而增加癌細胞的轉移和浸潤能力[11-12]。Zeb蛋白家族的成員，如Snail和Zeb，都含有螺旋-環-螺旋基序，可以特異性結合E-eadherin基因，促進E-cadherin在啟動子區E-box中的表達[13]。據報道，Zeb1和Zeb2抑制各種腫瘤細胞中E-cadhefin的表達，Zeb與轉錄共抑制因子CtBP1結合形成轉錄抑制因子復合物，從而抑制E-cadhefin轉錄[14]。Zeb2通過與E-cadhefin基因啟動子的E-box結合來抑制腫瘤細胞的表達[15]。

本次研究結果顯示，鼻咽癌組織中的ZEB2蛋白、E-caderin蛋白陽性表達率顯著高于癌旁組織。推測ZEB2蛋白、E-caderin蛋白可能參與鼻咽癌的發生和發展過程。并且ZEB2蛋白陽性表達率與不同TNM分期和浸潤深度比較，差異具有統計學意義；與淋巴結轉移、不同病灶直徑、不同組織學分化程度差異無統計學意義。E-caderin蛋白陽性表達率與不同TNM分期和是否發生轉移組間比較，差異具有統計學意義；與不同病灶直徑、不同組織學分化程度、不同浸潤深度差異無統計學意義。說明ZEB2蛋白、E-caderin蛋白的表達均與病灶的直徑無關，隨著浸潤的加深和TNM分期的增加，ZEB2蛋白陽性率顯著增加；E-caderin蛋白的陽性率表達與分化程度及遠處轉移相關。NPC患者ZEB2和E-caderin蛋白表達的相關性來看，兩者表達呈顯著負相關。兩者之間存在調節關系，促進NPC的侵襲和轉移;聯合檢測ZEB2和E-caderin有望成為評估腫瘤惡性生物學行為的參考指標。

綜上所述，ZEB2、E-caderin在鼻咽癌組織中表達上調，與NPC的發生發展密切相關。