PDCD5、NRP1表達與NSCLC患者化療效果及預后的關(guān)系

付 群

腫瘤調(diào)控蛋白的改變，能夠在NSCLC的發(fā)生或者病情進展過程中發(fā)揮作用。程序化死亡因子5(PDCD5)是凋亡誘導相關(guān)蛋白，能夠通過誘導程序性凋亡因子的激活，促進癌細胞的凋亡，最終促進腫瘤病灶的萎縮[1]；神經(jīng)纖毛蛋白1(NRP1)是基因調(diào)控相關(guān)因子，能夠通過提高癌細胞的變形和浸潤能力，促進腫瘤細胞的異常增殖，加劇癌細胞的上皮-間質(zhì)浸潤和轉(zhuǎn)移過程[2]。本次研究主要探討PDCD5、NRP1的表達與NSCLC患者的病情及治療結(jié)局的關(guān)系，為臨床上NSCLC的診療及臨床預后預測提供參考。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月到2018年11月在我院治療的NSCLC患者102例作為NSCLC組，納入標準：①均經(jīng)病理學確診；②臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期；③ECOG功能狀態(tài)評分0～2分；④具有客觀測量的病灶；⑤在我院接受以順鉑為基礎(chǔ)的化療方案；⑥臨床隨訪資料完整。排除標準：①非初治患者；②合并有其他系統(tǒng)惡性腫瘤；③組織獲取前有放化療等抗腫瘤治療。同時選取正常肺組織50例作為對照組。NSCLC組男性62例、女性40例，平均年齡(54.49±9.28)歲；對照組男性30例、女性20例，平均年齡(53.17±10.00)歲。2組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2 實驗方法

采用石蠟切片，脫水操作后采用3%H2O2室溫條件下孵育20 min，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min，磷酸鹽緩沖液稀釋后的山羊血清封閉抗體5 min，倒去血清后不清洗，加入一抗(購自賽默飛世爾中國，濃度：1∶1000)5 ml，37 ℃孵育2 h，或者放置4 ℃冰箱過夜孵育，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min，加入生物素熒光標記的二抗(購自賽默飛世爾中國，濃度：1∶2000)3 ml，37 ℃孵育20～30 min，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min，加入Streptavidin/HRP辣根酶標記鏈霉卵白素，37 ℃孵育20～30 min，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min，增強型HRP-DAB底物顯色試劑盒 (PA110)顯色，自來水沖洗，復染，封片。

1.3 化療方法

吉西他濱化療，1 000 mg/m2，第1、8天；順鉑注射液，20 mg/m2，第1～5天，連續(xù)治療28 d為1個周期，連續(xù)治療3個周期。

1.4 療效判斷

治療2個周期后，依據(jù)RECIST1.1實體瘤療效評價標準[3]，完全緩解(CR)為病灶消失，且至少維持4周；部分緩解(PR)為病灶最大徑之和減少≥30%，至少維持4周；疾病穩(wěn)定(SD)為病灶最大徑之和減小未達到PR或增大未達到PD；疾病進展(PD)的病灶最大徑之和增加≥20%或出現(xiàn)新病灶。治療有效=CR+PR。

1.5 免疫組化染色結(jié)果判斷標準

在高倍鏡下，對每張切片隨機選取5個視野，每個視野計數(shù)20個，共計100個，對染色強度和陽性細胞比例進行評價，染色強度：無著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕褐色為3分，陽性細胞比例：≤10%為0分，>10%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分。染色強度和陽性細胞比例得分之和≥3分為陽性表達。

1.6 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 NSCLC組和對照組PDCD5、NRP1表達比較

NSCLC組PDCD5陽性表達率明顯低于對照組(P<0.05)，而NRP1陽性表達率明顯高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 NSCLC組和對照組PDCD5、NRP1表達比較(例，%)

2.2 PDCD5、NRP1表達與NSCLC臨床病理特征關(guān)系

TNM分期Ⅳ期、中低分化患者PDCD5陽性表達率明顯低于Ⅲ期和高分化患者(P<0.05)；腺癌、TNM分期Ⅳ期患者NRP1陽性表達率明顯高于鱗癌、Ⅲ期患者(P<0.05)。見表2。

表2 PDCD5、NRP1表達與臨床病理特征關(guān)系(例，%)

2.3 化療有效和無效患者PDCD5、NRP1表達率比較

化療有效患者PDCD5陽性表達率明顯高于無效患者(P<0.05)，而NRP1陽性表達率明顯低于無效患者(P<0.05)。見表3。

表3 化療有效和無效患者PDCD5、NRP1表達率比較(例，%)

2.4 PDCD5、NRP1表達與預后的關(guān)系

PDCD5陽性表達患者中位總生存時間為22個月(95%CI：21.07～22.93)，明顯高于PDCD5陰性表達患者的12個月(95%CI：21.07～22.93)，差異比較有統(tǒng)計學意義(χ2=36.716，P<0.05)；NRP1陽性表達患者中位總生存時間為12個月(95%CI：16.74～21.27)，明顯低于NRP1陰性表達患者的19個月(95%CI：16.74～21.27)，差異比較有統(tǒng)計學意義(χ2=33.327，P<0.05)；見圖1。

圖1 生存曲線

3 討論

不同內(nèi)外因素導致的肺泡上皮細胞的異常病變，都會提高癌細胞的早期發(fā)生風險，同時在癌基因突變或者合并其他高危因素的群體中，NSCLC的發(fā)病率可持續(xù)上升[4]。臨床上的觀察分析發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者的5年生存率或者3年生存率均顯著下降，NSCLC的致殘率明顯上升[5]。輔助化療能夠在NSCLC的整體性治療過程中發(fā)揮作用，通過靜脈化療能夠顯著促進肺癌腫瘤病灶的萎縮，改善NSCLC患者的高腫瘤臨床負荷。但現(xiàn)階段缺乏對于NSCLC臨床預后評估的重要方式，影像學檢查能夠在NSCLC的診療過程中發(fā)揮作用，但影像學檢查評估NSCLC的滯后性較為明顯，其對于肺癌患者臨床預后評估的可參考性較低。血清糖鏈蛋白199或者其他上皮糖鏈蛋白，能夠在NSCLC的臨床預后轉(zhuǎn)歸評估中發(fā)揮作用，但糖鏈蛋白199或者癌胚抗原等評估NSCLC臨床預后或者化療效果的符合率較低，同時癌胚抗原等指標檢測的穩(wěn)定性較差，檢測的干擾因素較多。

PDCD5是程序性凋亡相關(guān)因子，主要表達于腫瘤細胞間質(zhì)組織、內(nèi)皮組織及神經(jīng)未分化組織中。PDCD5蛋白結(jié)構(gòu)上含有的可結(jié)合的脯氨酸結(jié)合區(qū)域，能夠通過影響到癌細胞轉(zhuǎn)錄上游啟動子的激活，最終促進癌細胞的凋亡[6]；NRP1是癌細胞生物學行為調(diào)控因子，能夠影響到癌細胞的變形能力，促進癌細胞浸潤和粘附能力的改變[7]。有部分研究者探討了PDCD5在肺癌患者中的表達情況，認為在肺癌患者中，PDCD5蛋白的表達陽性率明顯下降[8]，但對于PDCD5、NRP1的表達與肺癌化療效果的關(guān)系分析不足。

本次研究通過對肺癌患者病灶組織中PDCD5、NRP1的分析，可以發(fā)現(xiàn)在NSCLC患者病灶組織中，PDCD5蛋白的陽性表達率明顯下降，而NRP1蛋白的陽性表達率明顯上升，PDCD5、NRP1的異常表達趨勢提示二者可能在NSCLC的病情進展過程中發(fā)揮了重要作用。之所以存在PDCD5、NRP1的差異性表達，主要由于肺癌腺體上皮癌細胞腫瘤微環(huán)境的改變，影響到了腫瘤細胞的轉(zhuǎn)錄、凋亡及增殖調(diào)控過程，導致血管調(diào)控蛋白分泌的紊亂[9]。有其他研究者也發(fā)現(xiàn)，在肺癌患者病灶組織中，NRP1蛋白的陽性表達率可超過40%以上，在非小細胞肺癌患者中，NRP1蛋白的陽性表達率可隨著非小細胞肺癌臨床結(jié)局的惡化而上升[10]。在臨床分期較晚或者癌細胞分化程度較差的肺癌中，PDCD5蛋白的陽性表達率較低，提示了PDCD5蛋白的表達缺失能夠影響到肺癌患者的臨床病理特征的進展。這主要由于PDCD5蛋白的下降，失去了對于癌細胞凋亡蛋白BCL或者BAX的誘導作用，導致肺癌細胞凋亡比例的下降，促進了癌細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移進展。在腺癌或者臨床分期較晚的患者中，NRP1蛋白的陽性表達率較高，提示了NRP1蛋白能夠顯著影響到肺癌患者臨床病理特征的進展。這主要由于NRP1蛋白的表達上升，能夠影響到癌細胞內(nèi)信號通路MAPK的激活，促進了癌細胞浸潤范圍的增加，進而導致臨床分期的進展。在化療有效的患者中，PDCD5蛋白的陽性率較高，而NRP1的陽性率較低；在PDCD5陽性表達的患者中，肺癌患者的中位生存時間較長，而NRP1陽性表達的患者，其中位生存時間較短，提示了PDCD5的陽性表達能夠改善肺癌患者的臨床結(jié)局，而NRP1的陽性表達能夠加劇肺癌臨床預后的惡化。臨床上可以通過檢測PDCD5、NRP1蛋白，評估肺癌患者的臨床預后。

NSCLC是肺癌的重要分型之一，但既往的研究往往集中分析本病的治療方法，對本病癌細胞凋亡及生物學行為影響因子的研究較少。而本組研究的優(yōu)勢在于發(fā)現(xiàn)了PDCD5、NRP1可通過影響NSCLC癌細胞凋亡及生物學行為來參與本病發(fā)生、發(fā)展，并可一定程度上提示患者病情、治療療效及預后。

綜上所述，NSCLC患者PDCD5表達降低，而NRP1表達升高，與病理類型、TNM分期及分化程度有一定關(guān)系，同時對化療療效和預后有一定影響。