胡秀榮 蒲占湑 黃振東 杜丹超 呂 佳 劉順民 鹿連明
(浙江省柑橘研究所 臺州 318026)
亞洲柑橘木虱(Diaphorinacitri Kuwayama)簡稱柑橘木虱,屬于半翅目(Hemiptera)木虱科(Psyllidae),是柑橘黃龍?。℉uanglongbing,HLB)的媒介昆蟲[1]。柑橘黃龍病是全球柑橘生產上最具毀滅性的病害之一,由于目前防治柑橘黃龍病的有效藥劑尚未發現,因此防控柑橘木虱是控制柑橘黃龍病傳播的重要措施[2]。
當前防控柑橘木虱主要依靠化學殺蟲劑,眾所周知,化學殺蟲劑帶來的農藥殘留、環境污染和害蟲抗藥性越來越嚴重,國家近幾年也在大力提倡農業綠色生產和減肥減藥等重要舉措,因而開發對環境友好、對人畜安全和不引起害蟲抗藥性的生物農藥勢在必行。本實驗室經長期研究,從柑橘木虱蟲體分離獲得一株蟲生真菌,其編號為ZJPL08,通過該菌株的形態特征、培養特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析,將菌ZJPL08鑒定為淡紫紫孢菌(Paecilomyces lilacinus),該菌是一種常見昆蟲病原真菌,在自然界分布廣泛,對人、畜安全,不會造成環境污染,更不會引起害蟲抗藥性,具有開發為生物農藥的潛力。本研究將ZJPL08菌株經培養制成孢子懸浮液用于柑橘木虱若蟲的防治,另選用 2種植物源殺蟲劑和 4種化學殺蟲劑進行對照。
從目前文獻來看,防治木虱藥劑的篩選試驗大多是針對木虱成蟲,很少有針對木虱若蟲的,這是由于木虱若蟲體型較小,在田間憑肉眼很難觀察計數,本實驗室經過長期試驗研究,發現一種新的方法,可以比較準確的篩選木虱若蟲有效藥劑,本實驗主要針對1~ 5齡木虱若蟲的藥劑進行篩選,為生產中更高效更安全防治柑橘木虱提供依據。
柑橘木虱若蟲為浙江省柑橘研究所植保室玻璃溫室大棚內飼養,寄主為市售 3~ 4年的枸櫞盆栽苗,常年飼養。
真菌殺蟲劑,ZJPL08孢子懸浮液(自制);植物源殺蟲劑, 0.5%藜蘆堿可溶液劑(成都新朝陽作物科學股份有限公司);植物源農藥,懷農特高效植物油助劑(原產地:美國ORO AGRI公司,分裝企業:浙江天一農化有限公司); 1.5%精高效氯氟氰菊酯微囊懸浮劑(美國富美實公司);10%溴氰蟲酰胺可分散油懸浮劑(美國富美實公司);25%呋蟲胺可濕性粉劑(江蘇省鹽城利民農化有限公司);50%氟啶蟲胺腈水分散粒劑(美國陶氏益農公司)。
ZJPL08孢子懸浮液制備:將保存的蟲生真菌ZJPL08接種到PDA培養基上,置于25℃恒溫培養箱中培養14 d以上,待菌落表面變成深紫色后以無菌水洗脫菌落上的分生孢子,制備成孢子懸浮液,并加入終濃度為0.1%的吐溫80,采用血球計數板計算孢子懸浮液的濃度,以無菌水進行稀釋,獲得濃度為108spores/mL孢子懸浮液,再依次稀釋孢子濃度為107spores/mL和106spores/mL孢子懸浮液。
剪取帶有木虱若蟲的香櫞枝條,去掉成蟲和卵保留若蟲,插入裝有10ml水培營養液的離心管中,離心管底部固定在邊長 8cm正方形珍珠棉上,珍珠棉正下方鋪上一張白紙,然后用無菌噴霧器向香櫞枝條噴灑藥液(噴霧需保證均勻一致),再套上 5 L的透明塑料瓶(該塑料瓶兩端開口,一端為80目紗網),防止木虱若蟲羽化后逃逸,然后置于溫度26℃人工氣候箱中。試驗每個處理 3個重復,以清水做對照。 7 d后在體視顯微鏡下調查死亡頭數和存活頭數,計算死亡率,并統計對照死亡率,最后計算校正死亡率。

表1 7種殺蟲劑對柑橘木虱若蟲殺效果
試驗結果見下表,從表中看出,真菌殺蟲劑ZJPL08孢子懸浮液對木虱防治效果顯著,隨著孢子濃度的升高,柑橘木虱若蟲死亡率逐漸升高,在濃度108spores/mL時,木虱若蟲死亡率達到92%。植物源殺蟲劑 0.5%藜蘆堿500倍時 7 d后死亡率達到100%,效果較理想,1000倍時死亡率92.86%,2000倍效果不理想,建議使用500~1000倍。懷農特高效植物油助劑對柑橘木虱若蟲有一定的殺蟲效果,濃度100~200倍時,死亡率大約在60%左右。選用的 4種化學殺蟲劑均屬于低毒或微毒農藥,每個農藥設置 3個濃度,無論低濃度還是高濃度在 7 d死亡率均到達100%,表現較為理想。另外本次試驗中清水對照組沒有發現若蟲死亡,因此處理組死亡率不需要校正。
試驗結果表明,選用的 7種殺蟲劑中ZJ-PL08孢子懸浮液殺蟲效果顯著,濃度108spores/mL時,木虱若蟲死亡率到達90%以上,雖然與其他 4種化學殺蟲劑效果存在較小差異,但是ZJPL08孢子懸浮液作為一種真菌殺蟲劑,對環境非常友好,不存在環境污染和害蟲抗藥行的問題,因而可以考慮進一步開發利用。藜蘆堿(Veratrine)殺蟲劑是以天然植物藜蘆為原料,采取生物生化法炮制而成的植物源農藥,是新一代高效、低毒、廣譜殺蟲劑。在本次試驗中藜蘆堿500倍 7 d對木虱若蟲死亡率達到100%,因此可以推薦使用柑橘木虱若蟲的防治。懷農特高效植物油助劑是用橙皮通過專業的冷壓技術收集的天然產物,微毒無殘留,可用作常規農藥產品和葉面肥的桶混劑,提高噴霧藥液在作物表面的附著、濕潤、展布、傳導以及滲透性,促進作物對農藥和葉面肥的吸收利用,且產品本身具有較好的殺蟲殺菌功效,該藥在在本次試驗中對柑橘木虱若蟲有一定的殺蟲效果,200倍濃度時,木虱若蟲死亡率在60%左右,可考慮與其他殺蟲劑混用,以提高防治效果。
1.5 %精高效氯氟氰菊酯CS、10%溴氰蟲酰胺OD、25%呋蟲胺WP和50%氟啶蟲胺腈WG 4種化學殺蟲劑對柑橘木虱若蟲效果均較理想, 7 d后死亡率均達到100%,本文作者在以前試驗中做過 8種殺蟲劑對柑橘木虱成蟲的室內效果測定[3],其中 1.5%精高效氯氟氰菊酯CS、25%呋蟲胺WP和50%氟啶蟲胺腈WG 3種藥劑在上次的室內試驗中表現較好,在 7 d后死亡率均達到100%,說明無論木虱若蟲還是成蟲對選用 3種化學殺蟲劑都較敏感,在低劑量低濃度的情況下也容易導致柑橘木虱的死亡。
另外由于柑橘木虱若蟲體型較小,必須體視顯微鏡下才能觀察清楚,在觀察過程中低齡若蟲很多靜止不動,無法確定死活,故需要借助挑針翻開若蟲蟲體觀察腳是否在動,從而確定蟲體的死亡或存活,如果在噴藥后24 h或者48 h就進行調查,翻動蟲體有可能會導致木虱若蟲意外受傷或死亡,為了保證試驗結果的準確性,故選擇 7 d后統一調查。