p16、p53和Ki-67蛋白在子宮頸鱗狀上皮內病變表達及其意義

劉 瑞，雷 鳴，梁 穎，張 淼，肖紅燕，王紅紅，宋小萍，賀海燕

作為婦科常見的惡性腫瘤，宮頸癌的發生率呈逐年上升趨勢[1]。子宮頸鱗狀上皮內病變(SIL)的早期發現與治療，對宮頸癌的發病率和死亡率的下降有著至關重要的作用[2]。與宮頸癌有著密切關系的SIL屬于一組癌前病變，分低級別鱗狀上皮內病變(LSIL)、高級別鱗狀上皮內病變(HSIL)[2]。臨床工作中，抑癌基因蛋白p16、p53以及增殖細胞核蛋白(Ki-67)在SIL和子宮頸鱗癌中有著明顯的表達，而其表達程度對于SIL的診斷有著重要的臨床價值[3]。本研究通過臨床工作中收集的子宮頸組織標本，分析p16、p53及Ki-67蛋白在SIL發生發展過程中的表達及其意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料：122例經活檢或手術切除的子宮頸組織標本均來自2019年1月-2019年4月寧夏回族自治區人民醫院病理科，其中手術切除的反應性增生的子宮頸組織20例為對照組，平均年齡為(39.10±4.04)歲。實驗組102例，其中LSIL組26例，平均年齡(39.23±4.25)歲；HSIL組60例，平均年齡(38.14±3.79)歲；子宮頸鱗癌組16例，平均年齡(38.31±2.82)歲。患者年齡差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 試劑與方法：①采用的抗體均為單克隆抗體(即用型)，均購自北京中杉金橋公司。②將子宮頸組織標本先經福爾馬林液(10%濃度)固定、脫水、透明、石蠟包埋后，4 μm厚切片，再經HE常規染色，實驗組使用光鏡，通過觀察細胞形態以進行診斷和分組(分為LSIL組、HSIL組和子宮頸鱗癌組)。免疫組化采用SP法，使用DaKo LinK48全自動免疫組織化學染色機染色，分別標記3種抗體。

1.3 結果判定:在保證切片無雜染的情況下，以細胞質和(或)核內可見到明顯的棕黃色或是棕褐色顆粒為陽性標志[4]，見表1。

表1 抗體的表達模式及判讀標準

1.4 統計學方法:采用SPSS 17.0統計軟件，根據著色部位陽性率進行χ2檢驗分析，陽性表達強度采用多組秩和檢驗分析。

2 結果

2.1 p16蛋白在組織標本中的表達：p16在對照組染色均為陰性，在實驗組中呈不同程度的陽性表達，差異具有統計學意義(χ2=408.52,P<0.05)，且隨著SIL的病變過程(LSIL→ HSIL→子宮頸鱗癌)，p16的表達陽性率逐漸增高，分別為84.6%、98.3%、100%。同時該基因的表達在鱗狀上皮組織中存在分層，在LSIL中大部分局限于下三分之一，在HSIL中則以超出三分之二甚至全層的彌漫強陽性表達，見表2。

表2 p16蛋白在組織標本中的表達

2.2 p53蛋白在組織標本中的表達：p53在空白對照組染色均為陰性，在實驗組中的陽性表達具有統計學意義(χ2=205.87，P<0.05)，且隨著SIL的病變過程，p53的表達陽性率逐漸增高，分別為38.5%、51.7%、100%，同時該基因的表達在鱗狀上皮組織中也存在與p16相同的分層模式，見表3。

表3 p53蛋白在組織標本中的表達

2.3 Ki-67蛋白在組織標本中的表達：Ki-67蛋白在空白對照組和實驗組中均有不同程度的表達，其陽性率分別為40.0%、92.3%、100%、100%，差異有統計學意義(χ2=233.12，P<0.05)，而隨著SIL級別的升高其陽性表達增強。該基因的表達在鱗狀上皮組織中也存在與p16、p53相同的分層模式，見表4。

表4 Ki-67蛋白在組織標本中的表達

2.4 p16、p53、Ki-67蛋白在組織標本中的表達：p16、p53、Ki-67蛋白在LSIL→ HSIL→子宮頸鱗癌著色強陽性(++～+++)中的表達，經統計學分析差異有統計學意義(P<0.05)，見表5。

表5 p16、p53、Ki-67蛋白在組織標本中的表達[n(%)]

3 討論

臨床中SIL有兩種不同的結局，一是自然性消退，較少能夠向浸潤癌發展；二是癌變潛能較大，長期忽略易發展為浸潤癌。流行病學調查該病與人乳頭瘤病毒(HPV)感染的關系較大，約為90%，其次為性活躍、性傳播疾病等因素[2]。子宮頸上皮的病變發生，由單純的增生改變，到鱗狀上皮內病變，甚至發展為原位癌、浸潤癌，為宮頸癌至關重要的發展過程[5]。因此，SIL的早期發現、治療對宮頸癌的發生具有重要的防控作用，而SIL的分級對于臨床醫生在選擇制定治療方案上同樣具有重要意義。

國內學者對于HSIL使用宮頸錐切術治療的特有適應證中提出，周桓生提出p16的檢測可以在臨床處理SIL中作為節點，若HSIL p16陰性，治療方案可選擇低度LSIL，陽性的處理則選擇高度HSIL[1]。作為細胞周期調節性基因之一的p16，在細胞增生調控方面具有雙重作用，一則作為固有調控細胞周期的基因而存在，二者又在抑制腫瘤細胞生長方面起到關鍵性的作用。有研究顯示高危型HPV感染與p16的高度表達有關[5]。而p53蛋白則為抑癌性基因，因其在正常上皮形成的過程中發揮極其重要的作用，故常在上皮組織的基底層明顯表達[6]。張彥寧等[7]證實，p53的表達強度可以作為一些腫瘤的診斷性標志，因在鱗狀上皮的良、惡性腫瘤中，該蛋白均呈陽性表達。YU提出對于LSIL和HSIL的臨床區分中，Ki-67蛋白亦有一定的提示意義[8];高達90%的HPV感染與SIL的發生關系較大，而Ki-67蛋白對HPV的感染以及SIL的診斷有著輔助性意義[9]。作為細胞增殖的標記物之一，Ki-67蛋白在一般情況下只限于正常的鱗狀上皮的下三分之一表達，而在SIL中則表達于上層，因其半衰期較短，故考慮其對腫瘤細胞的增生活性可有一定的反應作用[10]。

本研究顯示，p16、p53在空白對照組染色均為陰性，而Ki-67則有少量表達；p16、p53及Ki-67蛋白在實驗組與對照組中的陽性表達具有統計學意義(P<0.05)，且隨著SIL的病變過程，三者的表達陽性率逐漸增高，同時在鱗狀上皮組織中存在分層，在LSIL中大部分局限于下三分之一，在HSIL中則以則超出三分之二或是全層性的彌漫強陽性表達；p16、p53、Ki-67蛋白在LSIL→ HSIL→子宮頸鱗癌著色強陽性(++～+++)中的表達，經統計學分析差異有統計學意義(P<0.05)。

綜上所述，p16、p53和Ki-67蛋白在SIL的發生發展過程中有著不同的作用機制，但在鱗狀上皮組織中卻均有一定程度的陽性表達，而且陽性表達分層現象大體一致。研究表明，在反應性增生的宮頸組織→LSIL→HSIL→子宮頸鱗癌的發展過程中，其陽性率呈逐漸上升趨勢。在日常診斷工作中，慢性宮頸炎鱗狀上皮反應性增生與低級別鱗狀上皮內病變鑒別有一定的困難。故我們認為對于3種蛋白在慢性宮頸炎基底細胞反應性增生、鱗狀上皮化生與鱗狀上皮內病變的診斷與鑒別診斷中有很高的應用價值，對于SIL的病情嚴重程度分級以及臨床選擇確定合適的治療方案有著重要的應用價值。