甲狀腺癌患者Cyclin D1及Ki-67的臨床意義研究

王 瑩， 韓恩善,夏 瀟

甲狀腺癌(TC)是最常見的內分泌相關腫瘤，其發病率呈上升趨勢。TC的影響范圍很廣，從青春期兒童到老年人均易發病，女性發病率是男性的3倍[1]。甲狀腺外科手術是TC的主要治療方法，盡管大多數患者經治療后能取得良好的總體生存率，然而治療后總體預后較差，急須發現可用于TC診斷及預后判斷的生物標志物以改善預后。細胞周期蛋白 D1 (Cyclin D1)和增殖細胞核抗原(Ki-67)在多種腫瘤的組織細胞增殖和凋亡過程中具有重要調控作用，可引起細胞異常增殖，最終導致惡性腫瘤發生和發展[2-4]。但是目前關于兩種生物標志物在TC中的臨床作用尚不完全清晰。因此本研究采用免疫組化方法檢測Cyclin D1和Ki-67在甲狀腺癌組織中的表達，并分析其與患者病理診斷及預后的相關性，從而評價其臨床的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集2015年2月-2019年12月于本院治療的TC患者納入研究，共收集131例TC組織和癌旁組織。同時，還從接受甲狀腺全切術的良性甲狀腺病變患者中收集122份正常甲狀腺組織作為正常對照。本研究經醫學倫理委員會批準，患者或監護人知情同意。

1.1.1 納入標準：經病理診斷為TC且其他器官無嚴重疾病；手術前3周未接受任何放射治療,且甲狀腺功能正常者；患者無其他惡性腫瘤，無放射史。

1.1.2 排除標準：有遠處轉移或肺轉移(并發其他腫瘤或原發性肺癌)；因嚴重的精神疾病或情緒不穩定而無法合作者；患有心肌梗死、中風、心力衰竭和心房纖顫等慢性疾病者；有放射碘治療史者。

1.2 方法：所有組織切片均保存于10%中性福爾馬林液固定，常規石蠟包埋。獲得5 μm厚的切片，并使用標準的鏈霉親和素生物素過氧化物酶免疫組織化學方法表達Cyclin D1和Ki-67。 Cyclin D1(abcam)和Ki-67(abcam)單克隆抗體用于研究。 其中，陰性對照用PBS代替一抗。免疫組化染色評分通過抗原抗體特異性反應集合陽性細胞百分比及染色強弱計算，所有結果均采用同一評分標準。

1.3 隨訪：治療后1個月通過門診進行隨訪，并用電話和電子郵件與每位患者進行聯系。 第1年每3個月隨訪1次，第2年每6個月隨訪1次，此后每年1次。 隨訪于2019年12月31日結束，隨訪率為100%。 記錄所有患者的生存狀況及所有相關信息，包括臨床數據和5年隨訪的數據。

1.4 統計學方法：使用SPSS 21.0統計軟件，使用χ2和Fisher精確概率檢驗分析Cyclin D1和Ki-67表達的比較，應用Kaplan-Meier方法分析TC患者的5年生存率，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組患者一般資料：病例組中男性43例，女性88例；年齡15～78歲，平均(45.3±8.2)歲。對照組中男性38例，女性84例；年齡20～74歲，平均(47.1±8.7)歲。2組患者間的性別和年齡差異均無統計學意義(P> 0.05)。病例組腫瘤直徑≥1.0 cm 87例，直徑≤1.0 cm 44例。根據甲狀腺腫瘤的組織病理學類型，乳頭狀癌76例，濾泡狀癌29例，甲狀腺髓樣癌26例。131例患者中52例發生囊膜浸潤，其余79例無囊膜浸潤。根據國際癌癥控制聯盟(UICC)提出的腫瘤-淋巴結轉移(TNM)分期標準：Ⅰ+Ⅱ期51例，Ⅲ+Ⅳ期80例；69例有淋巴結轉移，62例無淋巴結轉移。

2.2 Cyclin D1和Ki-67表達與TC患者臨床病例特征的關系：Cyclin D1和Ki-67表達在性別、年齡、組織病理學類型和莢膜浸潤方面差異無統計學意義(P>0.05)。 Cyclin D1表達陽性率明顯升高，腫瘤直徑≥1.0 cm的TC組織中的Ki-67表達陽性率低于腫瘤直徑<1.0 cm的TC組織中的表達(P<0.05)。與Ⅰ+Ⅱ期患者相比，Ⅲ+Ⅳ期Cyclin D1表達陽性率升高，而Ki-67表達陽性率降低(P<0.05)。 與無淋巴結轉移的患者相比，有淋巴結轉移的患者具有更高的Cyclin D1表達陽性率和較低的Ki-67表達陽性率(P<0.05)，見表1。

表1 Cyclin D1和Ki-67表達與TC患者臨床病例特征的關系[n(%)]

2.3 Cyclin D1和Ki-67表達與TC患者預后的關系:131例受試者隨訪5年后，53例生存，78例死亡，TC的死亡率為59.5%。Cyclin D1和Ki-67表達不同的患者Kaplan-Meier曲線見圖1(目錄后)。Cyclin D1陽性表達患者5年生存率為28.44%，顯著低于Cyclin D1陰性表達患者(P<0.05)。Ki-67陰性表達患者5年生存率為35.2%(37/105)，這與Ki-67陽性表達的TC患者5年生存率差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討論

TC在我國為常發腫瘤，女性比男性的發病率高3倍，同時隨著年齡增加，其發病率逐漸增加，而由于臨床診治方法的缺乏，使其嚴重影響患者的生活質量[5]。隨著分子生物學技術的快速發展，為甲狀腺癌的早期診斷及預后判斷提供了可能。

Cyclin D1是腫瘤細胞所依賴的重要細胞周期調節因子，其過表達可用于多種腫瘤的診斷及預后判斷[6-8]。關高娃等[9]研究發現Cyclin D1表達與結腸癌患者的長期生存率顯著相關，其高表達是結腸癌預后的獨立危險因素。馮欽等[10]研究發現在口腔鱗癌中Cyclin D1表達顯著升高，同時影響患者的總體生存率。蔣艷等[11]研究發現Cyclin D1在良性葉狀腫瘤與纖維腺瘤的免疫表型存在差異，可用于二者的診斷及預后評估。有研究表明[12-13]，Cyclin D1表達可用于侵襲性分化型甲狀腺癌的臨床診斷，同時與分化型甲狀腺癌的發生發展密切相關。本研究結果顯示，在甲狀腺癌中，Cyclin D1表達在性別、年齡、組織病理學類型和莢膜浸潤方面差異無統計學意義(P> 0.05)。 然而，Cyclin D1表達陽性率與腫瘤直徑、病理分期及淋巴結轉移顯著相關(P<0.05)，同時其表達與患者不良預后顯著相關。本研究進一步證實Cyclin D1在甲狀腺癌中的作用，為其應用于甲狀腺癌臨床診斷及預后評估提供可能。

Ki-67于細胞核內被發現，與細胞增殖密切相關，同時隨著細胞周期的變化，Ki-67的表達呈動態變化過程，其已作為多種腫瘤的生物標志物應用于臨床診斷及預后評估。在彌漫大B細胞淋巴瘤中[14]，Ki-67表達增高，同時與患者臨床病例特征及預后顯著相關，可作為患者預后的獨立危險因素。張國臣等[15]研究發現，Ki-67在膠質瘤中陽性表達率較高，尤其是高級別膠質瘤，可用于膠質瘤療效評估的重要指標。在老年胃癌中[16]，Ki-67在癌前病變及早期胃癌中表達增高，提示其與胃癌的發生發展密切相關，可作為老年人胃癌的早期診斷指標。周冠磊等[17]研究發現，在甲狀腺微小乳頭狀癌中，Ki-67蛋白陽性表達率僅與是否發生淋巴結轉移相關，可判斷疾病的臨床進展。本研究發現在甲狀腺癌中，Ki-67表達在性別、年齡、組織病理學類型和莢膜浸潤方面差異無統計學意義(P> 0.05)，而與腫瘤直徑、病理分期及淋巴結轉移顯著相關(P<0.05)，同時其表達與患者不良預后顯著相關。