拉米夫定片原輔料相容性的研究

吳文華，王麗娜（.安徽省藥品審評查驗中心，合肥 3005；.合肥市市場監督管理局，合肥 3004）

拉米夫定（lamivudine），為（－）-1-[（2R，5S）-2-（羥甲基）-1，3-氧硫雜環戊烷-5-基]胞嘧啶（結構如圖1所示），是核苷酸類逆轉錄酶抑制劑，屬抗病毒藥，通過結合到新合成的HBVDNA中來使DNA鏈的延長終止，從而達到抑制病毒復制的作用。臨床主要應用于艾滋病、乙肝等疾病的治療[1-6]。拉米夫定片于20世紀90年代最先在美國上市，目前已過專利保護期，國內有多家仿制陸續獲批。根據FDA查詢拉米夫定片說明書[7]，本品輔料為微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉和硬脂酸鎂。經初步試驗研究，擬定拉米夫定片（規格300 mg）處方組成如表1所示，主要工藝步驟為：將處方量的拉米夫定原料、微晶纖維素和羧甲基淀粉鈉過篩后，預混15 min，再加處方量硬脂酸鎂進行總混2 min后壓片，最后用歐巴代包衣粉進行包衣。為提高產品質量，減少因相容性問題帶來的藥物安全性風險，本課題組開展拉米夫定片原料與輔料的相容性研究，保障拉米夫定片仿制藥的一致性。

表1 拉米夫定片處方組成Tab 1 Prescription composition of lamivudine tablets

圖1 拉米夫定的化學結構式Fig 1 Formula of lamivudine

1 儀器與試藥

1.1 儀器

賽默飛世爾U3000高效液相色譜儀（DAD檢測器），XP205電子天平（瑞士梅特勒-托利多），SYZ-250B藥品穩定性試驗箱（寧波東南儀器），SHH-100GD-2藥品強光照射試驗箱（上海永生）。

1.2 試藥

拉米夫定原料藥（批號：LZ01101160220，石家莊龍澤制藥股份有限公司）；拉米夫定片（自制，規格：300 mg/片）；拉米夫定對照品（批號：101007-201502，含量：99.7%）、胞嘧啶對照品（批號：420017-201501，含量：99.9%）、尿嘧啶對照品（批號：100469-201302，含量：99.6%）、水楊酸對照品（批號：100106-201104，含量：99.9%）、拉米夫定分離度混合物B對照品（批號：101222-201101，供含量測定用）（中國食品藥品檢定研究院）；微晶纖維素（輔料1，批號：20160101，山東聊城阿華制藥有限公司）；羧甲基淀粉鈉（輔料2，批號：150927）、硬脂酸鎂（輔料3，批號：151240）（安徽淮南山河輔料有限公司）；歐巴代（輔料4，批號：THL39057，上海卡樂康包衣技術公司）；全輔料（上述4種輔料按處方比例混合均勻）；甲醇（色譜純，批號：190263，美國賽默飛世爾科技公司）；其他化學試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

參考《中國藥典》2015年版二部拉米夫定項下有關物質方法[8]，確定液相色譜條件如下：色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠（Agilent Zorbax XDB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm）；以0.025 mol·L－1醋酸銨溶液（用冰醋酸調節pH值至3.8）-甲醇（95∶5）為流動相，流速1.0 mL·min－1；檢測波長277 nm；柱溫35℃；進樣量10 μL。

2.2 原輔料相容性樣品研究制備

依據《化學藥物制劑研究基本技術指導原則》[9]以及相關文獻[10-16]中的要求，分別稱取拉米夫定原料與各輔料按照不同比例充分混勻后（具體比例見表2），分別放置在高溫（60℃）、高濕（90% RH）、高照度（4500 Lx）的試驗箱中，30 d后取出。并與原料、各輔料進行平行對照研究。

表2 原輔料相容性試驗樣品的稱樣量Tab 2 Sample mass of the experimental sample for excipient compatibility

2.3 溶液的制備

取胞嘧啶對照品和尿嘧啶對照品各適量，加流動相溶解并稀釋制成每1 mL中分別含10 μg的溶液，作為溶液①。另取拉米夫定分離度混合物B對照品（含拉米夫定與雜質Ⅱ）5 mg，置10 mL量瓶中，加流動相2 mL，振搖使溶解，再精密加入溶液①1 mL，用流動相稀釋至刻度，搖勻。

取拉米夫定原料約50 mg，置100 mL量瓶中，加流動相振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為拉米夫定原料藥原始溶液。

按表2取原料和原輔料相容性樣品適量，置100 mL量瓶中，加流動相適量振搖使拉米夫定溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液1 mL，置50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，再精密量取2 mL，置20 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，作為對照溶液。另稱取相對應的輔料適量，置100 mL量瓶中，加流動相振搖，濾過，取續濾液作為輔料溶液。

取水楊酸對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋，制成每1 mL中約含0.5 μg的溶液，作為水楊酸對照品溶液。

2.4 系統適用性試驗

取“2.3”項下各種溶液分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。拉米夫定與混合輔料的因素試驗典型色譜圖如圖2所示。結果顯示胞嘧啶、尿嘧啶、雜質Ⅱ和拉米夫定峰的分離度均大于1.5，說明色譜系統適用性符合要求。

圖2 拉米夫定片原輔料相容性高效液相色譜圖Fig 2 HPLC chromatogram of the mixture of lamivudine and accessories

2.5 影響因素試驗

采用目視法對外觀性狀進行觀察，HPLC法對雜質進行分析，結果可見拉米夫定原料在高溫、高濕、強光條件下外觀性狀和含量均未發生明顯變化。圖2及表3結果表明各樣品各種條件下均未產生水楊酸的雜質；光照、高溫條件下，雜質未有變化，樣品外觀性狀、含量均未有顯著變化；高濕試驗條件下，拉米夫定與微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、歐巴代產生了新雜質胞嘧啶，雜質Ⅰ和其他雜質略有增加，總雜質也略有增加，但新產生雜質胞嘧啶和其他雜質的限度均符合拉米夫定片質量標準限度要求和ICH Q3限度要求。

表3 主藥與各輔料相容性研究結果Tab 3 Raw material/excipient compatibility test

3 討論

3.1 影響因素

從研究結果看，拉米夫定片原輔料相容性試驗各輔料和原料在高溫和光照條件下雜質均無明顯變化，原輔料相容性較好；在高濕條件下拉米夫定原料，輔料微晶纖維素、羧甲淀粉鈉、歐巴代包衣粉和全輔料雜質均有所增加，可能是由于水分子的參與，有助于原輔料反應基團的接觸，從而加速雜質的降解速度，對樣品的穩定性帶來一定的影響。結果提示拉米夫定片要選擇防水較好的薄膜包衣預混料，另外在產品的外包裝上要特別注意防潮包裝材料的選擇，因此在生產工藝選擇直接壓片工藝比傳統濕法制粒再壓片的工藝更合理。

3.2 雜質變化原因討論

從本研究結果看，拉米夫定與歐巴代在高濕條件下，雜質胞嘧啶的量顯著增加，查閱相關文獻[17-18]，推測其可能的原因為：歐巴代是一種良好的薄膜衣包衣系統，其吸濕相對其他輔料更強，而拉米夫定的合成主要由酯化、環合、酰化、耦合、還原五步組成，而最后一步還原必須在無水條件下進行，在高濕條件下拉米夫定易氧化形成耦合后的中間體，然后水解形成胞嘧啶。

3.3 小結

隨著中國加入ICH，中國的藥品注冊均需遵守ICH的基本原則，其中《新藥制劑中的雜質》[Q3B（R2）]和《藥品研發》[Q8（R2）]對原料藥與輔料的相容性研究做了明確規定，相容性研究可發現藥物與輔料發生的物理化學作用，其預測和指導性能對藥物輔料篩選意義重大，為仿制藥順利通過一致性評價篩選出最優化的處方工藝。