白藜蘆醇局部應用制劑研究進展

王鶴樵，張婷，任金妹，紀宏宇，唐景玲*（.哈爾濱醫科大學藥學院，哈爾濱 5008；.復旦大學附屬中山醫院青浦分院，上海 0700）

1 白藜蘆醇簡介

白藜蘆醇（resveratrol，Res）是一種天然多酚類活性物質，主要存在于虎杖、決明、藜蘆等多種中藥中，也存在于花生、葡萄、桑葚等食物中，其化學名稱為3，5，4'-三羥基二苯乙烯，分子式為C14H12O3，相對分子質量為228.25。Res為白色針狀晶體，難溶于水，易溶于乙醚、氯仿、甲醇、丙酮等有機溶劑。Res有順式（cis-Res）和反式（trans-Res）兩種異構體，反式異構體的生理活性強于順式異構體。植物中的Res主要以反式結構存在。研究表明，Res具有抗癌、抗氧化、抗菌、抗炎、保護心血管、免疫調節、保肝、抗神經退行性疾病、抗病毒、抗衰老等多種功效[1-2]。因此，Res被廣泛地應用于醫藥、食品、化妝品、保健品等領域，具有良好的發展前景。

2 白藜蘆醇局部應用制劑現狀

Res局部應用制劑主要以皮膚給藥途徑為主，此外還有鼻腔、眼部、口腔、陰道等給藥途徑，具體見表1。

表1 白藜蘆醇局部應用制劑研究現狀Tab 1 Topical preparations of resveratrol

2.1 皮膚給藥制劑

Res應用于皮膚可以抵御紫外線引起的皮膚損傷、抑制皮膚色素沉著和黑色素生成、抗炎、抗氧化、抗衰老、促進傷口愈合等。但Res存在溶解度低、化學穩定性差、皮膚滲透性和滯留性有限等問題，所以研究者們采用囊泡、乳劑、納米粒等新型載體提高Res的溶解度、改善其光穩定性、增強皮膚滲透和滯留、提高藥效等。

2.1.1 囊泡 囊泡可根據組成成分不同分為脂質體類和類脂囊泡類。Negi等[3]研究制備了Res類脂囊泡凝膠用于局部抗炎，其12 h的經皮滲透量和皮膚滯留量均高于Res混懸液，且能提高Res在表皮和真皮層中的t1/2和AUC0～6h，并顯著降低tmax；與市售雙氯芬酸鈉凝膠相比，Res囊泡凝膠可充分減輕大鼠足部炎癥模型的水腫程度并延長作用時間。彈性類脂囊泡可以通過小于其大小的毛孔而結構不被破壞，通常被用于局部或透皮藥物遞送[4]。Abbas等[5]將Res載入由Span 60和Brij 35所組成的彈性納米囊泡中，與Res混懸液相比，Res彈性囊泡具有更大的體外釋放量、更好的自由基清除效果、更優的光保護作用，能夠更好地抵御紫外線對皮膚的損傷。醇質體是一種含有較高濃度醇的脂質體，是滲透性、皮膚滯藥量及包封率更好的脂質囊泡[6]，Arora等[7]以磷脂、乙醇、硬脂胺、丙二醇為材料制備了Res醇質體，并將其分散至凝膠中，離體皮膚滲透研究表明，Res醇質體凝膠的滲透率/滲透系數和皮膚滯留量分別是傳統乳膏劑的2.04倍和4.6倍，證明其可增強對皮膚病的治療作用。

2.1.2 乳劑 Pickering乳液是一種以吸附于油水兩相界面的固體微粒作為乳化劑的新型乳液，比傳統乳液具有更好的抗聚結穩定性和安全性[8]。Sharkawy等[9]制備了以殼聚糖/阿拉伯膠納米顆粒作為乳化劑的Res的Pickering乳液，并用于化妝品中，其冷凍掃描電鏡圖如圖1所示。用Franz擴散池考察Res在豬離體皮膚上的吸收和滲透，給藥24 h后，所制備的兩種Pickering乳液的Res經皮滲透率比對照溶液明顯更低，而皮膚滯留率明顯更高。光穩定性測試表明，在紫外光下暴露4 h后，對照溶液中的Res損失至68.15%，而Pickering乳液中Res的量保持不變。以上結果說明Pickering乳液可使Res更多地滯留于皮膚中，且能提高Res的光穩定性。

圖1 在冷凍掃描電鏡下拍攝的Pickering乳液的乳滴結構（A）和完整乳滴（B）Fig 1 Droplet structure（A）and intact droplet（B）of Pickering emulsion under Cryo-SEM

納米乳是乳滴粒徑為1～100 nm的乳劑，具有比表面積大、粒徑均勻、穩定性好、生物利用度高等優點[10]。Sharma等[11]以Sefsol 218為油相、Tween 80為乳化劑、PEG 400為助乳化劑，制備了Res納米乳凝膠用于防止紫外線引起的氧化性皮膚損傷。與Res普通凝膠相比，納米乳凝膠的皮膚沉積量更高，且能滲透到皮膚層的更深處。氧化應激研究中，納米乳凝膠治療組的皮膚中各抗氧化因子的水平顯著高于普通凝膠治療組，且Res納米乳凝膠比普通凝膠更能抑制紫外線引起的海綿狀變性、水腫和表皮增生反應。以上結果均證明，將Res制成納米乳可更有效地預防紫外線造成的氧化損傷。

2.1.3 納米粒/微粒 Shrotriya等[12]用雙硬脂酸甘油酯和Tween 20制備了Res固體脂質納米粒（solid lipid nanoparticle，SLN）凝膠，用于治療刺激性接觸性皮炎。與普通凝膠相比，SLN凝膠能使Res更多地滯留在皮膚中，適合局部治療；Res-SLN凝膠比普通凝膠能更有效地抑制二硝基氯苯誘導的小鼠耳腫脹，與含有皮質類固醇的市售制劑相當，說明其藥效明顯。Fachinetti等[13]制備了PEG 40硬脂酸酯的Res納米結構脂質載體（nanostructured lipid carrier，NLC），用于抑制皮膚色素沉著和黑色素生成。Res-NLC對酪氨酸酶的抑制作用是Res溶液的1.31倍，表明將Res載入PEG 40硬脂酸酯的NLC中可以增強其對酪氨酸酶的抑制作用。Abbas等[14]使用泊洛沙姆407/泊洛沙姆188混合表面活性劑制備了基于山崳酸甘油酯的Res脂質納米粒，用于皮膚抗氧化、抗炎和抗衰老。與Res混懸液相比，用Res脂質納米粒對大鼠皮膚進行預處理可顯著改善戶外紫外線照射所導致的皮膚抗氧化能力下降、炎癥反應、皺紋及光老化現象。Gokce等[15]研究了載有Res-透明質酸-二棕櫚酰磷脂酰膽堿微粒的膠原蛋白真皮基質（微觀結構如圖2所示）對糖尿病大鼠的傷口愈合作用。結果顯示與Res溶液相比，載Res微粒的真皮基質可明顯促進傷口愈合，促進膠原纖維及有效的上皮再生，且抗氧化能力更優。綜合以上各例，納米粒/微粒可有效提高Res的治療作用。

圖2 載有Res微粒的真皮基質的微觀結構圖Fig 2 Microstructure of the dermal matrix impregnated with Res microparticles

2.2 其他給藥途徑制劑

2.2.1 鼻腔給藥制劑 Res可防治神經退行性疾病，發揮神經系統保護作用[1-2]。鼻腔給藥能夠繞過血腦屏障，使藥物靶向遞送于腦部，因此，鼻腔給藥制劑是治療腦部疾病的研究熱點[16]。但鼻黏膜纖毛的快速清除作用導致藥物在鼻腔的停留時間短，且Res具有水溶性差的問題，導致生物利用度低，Res鼻腔給藥的效果較差。將Res制成適宜的制劑可改善黏膜黏附性從而延長鼻腔滯留時間，并能提高Res溶解度、鼻黏膜滲透性、生物利用度等。

Salem等[17-18]分別制備了Res納米乳凝膠和Res傳遞體凝膠。Res納米乳凝膠在6 h內的體外鼻黏膜滲透量明顯高于普通凝膠。Res傳遞體凝膠的體外釋放率和鼻黏膜離體滲透率均高于Res混懸劑。與口服Res混懸液相比，鼻腔給予Res納米乳凝膠或Res傳遞體凝膠均可使血漿Cmax和AUC0～∞明顯提高，說明納米乳凝膠和傳遞體凝膠均可顯著提高Res的生物利用度。Rajput等[19]制備了載有Res-NLC的原位凝膠用于治療阿爾茨海默病。體外鼻黏膜滲透實驗顯示，Res-NLC原位凝膠在鼻黏膜上的滲透率是Res混懸原位凝膠的5倍；Morris水迷宮實驗對健忘癥模型大鼠進行體內藥效學研究發現，與口服Res混懸液相比，鼻腔給予Res-NLC原位凝膠可使大鼠的記憶功能顯著改善。Trotta等[20]制備了Res脂質微粒（LMs-Res），并用8.75%殼聚糖溶液對微粒進行包被，制備了殼聚糖包衣微粒（LMs-Res-Chplus）。靜脈注射游離Res后未在大鼠腦脊髓液中檢測到Res，而鼻腔給予LMs-Res和LMs-Res-Ch-plus后，腦脊髓液中Res的Cmax分別為0.79 μg·mL－1和9.7 μg·mL－1，且180 min內未在血流中檢測到Res，說明制備的Res微粒具有良好的腦靶向性。Ahirrao等[21]制備了Res立方晶并將其混懸于溫敏型原位凝膠中。與口服或鼻腔給予Res溶液相比，鼻腔給予Res立方晶凝膠后，大鼠大腦中Res的Cmax、AUC0～24、AUC0–inf值均顯著提高。Res立方晶原位凝膠的藥物靶向效率和直接轉運百分比分別為213.7%和53.1%。說明立方晶原位凝膠可提高Res在大腦的生物利用度且具有靶向效果。

2.2.2 眼部給藥制劑 Res作用于眼部可降低青光眼的眼內壓、治療糖尿病性視網膜病等。但眼部保護屏障的存在會導致常規制劑的生物利用度較低[22]。將Res制成新型制劑，可以增加角膜滲透性、提高藥效、減小刺激性等。

Pandian等[23]通過離子凝膠法制備了載Res的PEG修飾的殼聚糖（CS）納米粒（NPs），用于治療青光眼。與普通CS NPs只能累積在角膜表面相比，PEG修飾的CS NPs可穿過角膜并到達視網膜脈絡膜。藥效學研究顯示，載Res的PEG修飾的CS NPs比Res分散液及普通Res CS NPs的降眼壓效果更好。Ruginǎ等[24]制備了Res聚電解質微囊，用于將Res直接遞送到視網膜色素上皮D407細胞中，從而治療糖尿病性視網膜病。研究發現，用Res微囊分別處理在正常和高糖誘導的炎癥條件下生長的D407細胞，24 h后微囊均入胞并位于細胞核附近。此外，Res微囊能夠抑制高濃度葡萄糖導致的D407細胞中血管內皮生長因子和IL-6水平的升高。Natesan等[25]制備了Res和槲皮素（quercetin，QUR）共載的PEG修飾的CS NPs用于降低青光眼的眼內壓。與游離Res相比，Res納米粒和Res-QUR納米粒均能更有效地清除自由基，且刺激性更低，降眼壓效果更明顯，作用持續時間更長。

2.2.3 口腔給藥制劑 Res具有治療口腔炎性病變及牙周袋的作用，但其口服生物利用度差，局部給藥可克服這一缺點。將Res制成黏膜黏附性制劑，利用制劑的生物黏附性來延長其在黏膜表面的保留時間，從而達到更好的療效[26]。

Martins等[27]用卡波姆934、羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮K30和甘露醇制備了兩種不同處方的Res頰黏膜黏附片劑來預防和/或治療口腔炎性病變。用豬頰黏膜進行藥物滲透研究，結果含較少黏度調節劑的處方表現出更好的黏膜滲透性和滯留性，且透過黏膜的藥量遠低于滯留在黏膜中的藥量，說明其適合局部應用。Kassem等[28]用硫醇化海藻酸鈉（TA）和海藻酸鈉（A）制備了黏膜黏附性微珠，用于治療牙周袋，結果顯示，溶脹1 h后，A微珠及TA微珠（A∶TA＝1∶1）的溶脹指數分別為18.793和7.033；離體黏膜黏附性實驗中，1 h后TA微珠剩余26%，而A微珠只剩余2%；體外釋放實驗中，A微珠及TA微珠的釋放指數n分別為1.464和1.124。以上結果證明TA微珠比A微珠溶脹和溶蝕的速度更慢，TA微珠能顯著降低Res的釋放速率。

2.2.4 陰道給藥制劑 Res陰道給藥可治療局部感染，但Res的低溶解度及生物利用度使其應用受到了限制，且陰道液的清除作用會降低藥物療效。新型制劑可延長Res在給藥部位的保留時間、改善溶解性、提高藥效。

J?raholmen等[29]制備了Res殼聚糖包衣脂質體用于治療陰道感染。體外黏膜黏附性實驗表明，殼聚糖包衣脂質體的黏膜結合能力顯著高于未包衣脂質體。通過測定脂多糖（LPS）誘導的J774A.1細胞中的SOD活性來比較抗氧化活性，通過測定NO、TNF-α和IL-1β的產生來比較體外抗炎活性，結果顯示與Res溶液相比，Res脂質體可更有效地提高SOD活性，并能更有效地抑制NO、TNF-α和IL-1β的產生，證明脂質體能提高Res的抗氧化和抗炎活性。此外，該團隊還以殼聚糖為凝膠基質開發了Res脂質體凝膠，與Res溶液或Res普通凝膠相比，Res脂質體及Res脂質體凝膠持續釋藥的能力更好。離體黏膜滲透實驗顯示，Res脂質體及Res脂質體凝膠中大部分Res滯留在黏膜組織內，從而避免藥物大量進入全身循環。此外，空白脂質體凝膠還表現出有效的抗炎活性，表明殼聚糖水凝膠在抗炎方面具有協同作用[30]。

3 討論與展望

Res由于其特有的抗氧化、抗炎等藥理作用而受到了廣泛的關注和研究，其在局部應用方面的研究也取得了許多進展。但目前尚未有文章對Res局部應用制劑進行綜述，本文總結了以往文獻中關于Res局部應用制劑的研究情況，涉及到的劑型包括納米粒、微粒、囊泡、乳劑、微囊、微珠等。不同劑型的應用可改善Res的水溶性差、滲透性差、不易通過血腦屏障等問題，還能增強Res局部滯留性、延長Res釋放時間、提高藥效等。但Res尚未有臨床上市的制劑，這可能是由于其穩定性及溶解性差，增大了相關制劑在開發、生產、貯存、發揮療效時的難度。Res因其調節三高、抗氧化、抗癌、保護心血管、抑制肥胖等作用而受到保健品市場的廣泛歡迎，因其良好的抗氧化、抗衰老、美白等功效而受到化妝品市場的青睞，并已被列入《國際化妝品原料標準目錄》中，目前已有多種保健品及化妝品上市銷售，但Res在藥品領域的應用仍需進一步探索。