微毛血見愁地上部分的化學成分研究

阮元，葛夢煥，李文，文春南，田若丹，盛蒙珂，劉淼，麻兵繼（河南農業大學 農學院中藥材系，鄭州 450046）

唇形科（Labiatae）香科科屬（Teucrium）植物在全球約有100～300種，遍布于世界各地，主產于地中海沿岸。我國有該屬植物18種、10變種，分布于全國各地，但主要集中分布于西南部[1]。河南省香科科屬植物資源主要分布在大別山、桐柏山和伏牛山地區，共有3種，即血見愁（T.viscidum）、廬山香科科（T.pernyi）和裂苞香科科（T.veronicoides）；另有3變種，分別為微毛血見愁（T.viscidumvar.nepetoides）、光萼血見愁（T.viscidumvar.leiocalyx）和小葉穗花香科科（T.japonicumvar.microphyllum）[2–3]。香科科屬部分植物在我國具有悠久的藥用歷史，其中血見愁全草入藥用于治療跌打損傷、出血、急性胃腸炎、消化不良、風濕性關節炎、肺膿瘍、毒蛇咬傷、凍瘡腫痛、療瘡癤腫等癥[1]。

富含克羅烷型二萜被公認為香科科屬植物的主要特征成分[4]。該屬植物的化學成分，尤其是二萜類成分具有廣泛的生物活性，如拒食、抗氧化、抗菌消炎、鎮痛解痙、降壓、降血糖和抗腫瘤等[5]。該屬植物中結構豐富多樣的克羅烷二萜引起了合成化學家的關注，例如Liu等[6]對該屬植物中分離鑒定的teucvidin開展了全合成研究，Wu等[7]對克羅烷二萜結構片段開展了合成研究。

文獻調研發現，關于河南產香科科屬植物化學成分的研究報道仍是空白。因此，從該屬植物中進一步挖掘利用結構新穎、生物活性良好的化學成分具有重要意義。本研究采集了伏牛山地區的微毛血見愁地上部分，首次對該變種的化學成分進行研究，以期發現結構新穎的活性次生代謝產物，為進一步開發利用香科科屬植物資源提供一定的研究基礎和理論支撐。

1 材料

1.1 藥材

植物樣品于2017年10月采自河南省伏牛山，經河南農業大學高致明教授鑒定為唇形科香科科屬植物微毛血見愁（Teucrium viscidumvar.nepetoides）。標本（編號20171012）保存于河南農業大學農學院中藥材系。

1.2 儀器與試藥

Avance Ⅲ 400 MHz超導核磁共振儀（瑞士Bruker公司）；Waters 1525制備型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；ZORBAX SB-C18半制備柱（9.4 mm×250 mm，5 μm）（美國Agilent公司）；amaZon離子阱質譜儀（德國布魯克）。MCP500旋光儀（奧地利安東帕）；薄層硅膠板GF254（青島鼎康硅膠有限公司）；柱色譜硅膠（80目，青島海洋化工廠）；Sephadex LH-20（美國通用）；RP-C8（40～75 μm，日本富士）；MCI（CHP20/P，75～150 μm，日本三菱）；色譜甲醇、乙腈（天津四友）；其他試劑均為分析純（天津富宇）。

2 化合物的提取與分離

采集的微毛血見愁地上部分（10 kg），干燥后粉碎，95%乙醇浸提3次，每次3 d。提取液經減壓濃縮除去乙醇后，加水混懸，用乙酸乙酯萃取，萃取液減壓濃縮除去有機溶劑得乙酸乙酯浸膏（272 g）。乙酸乙酯浸膏經硅膠柱色譜，依次用二氯甲烷、二氯甲烷-丙酮（10∶1）、二氯甲烷-丙酮（1∶1）和甲醇洗脫，各洗脫部分分別收集，將提取物分成4個部分。二氯甲烷洗脫部分經硅膠柱色譜，用不同比例石油醚-丙酮洗脫，分離得到化合物3（9 mg）。二氯甲烷-丙酮（10∶1）洗脫部分經MCI柱色譜，90%甲醇洗脫，除去葉綠素，脫色后樣品在二氯甲烷-甲醇溶液中析出暗紅色沉淀和無色針晶，用二氯甲烷-甲醇（1∶1）反復洗滌，分別得到化合物4（63 mg）和化合物5（177 mg）。母液放置后析出無色透明片狀結晶，即化合物2（63 mg）。脫色后樣品18 g經C8反相柱色譜，用30%、50%、70%和100%甲醇依次洗脫。其中，50%甲醇部分在二氯甲烷-甲醇混合有機溶劑中析出淡黃色結晶化合物1（6 mg），經硅膠柱色譜，用不同比例石油醚-丙酮洗脫，分離得到化合物6（6 mg）。化合物結構見圖1。

圖1 化合物1～6的化學結構Fig 1 Chemical structures of compound 1－6

3 結果

化合物1：淡黃色結晶（二氯甲烷-甲醇）。ESI-MSm/z：351 [M＋Na]＋。[α]20D＋29.9°（c＝0.06，CH3COCH3）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δH：7.48，7.46（2H，m，H-16，H-15），6.41（1H，m，H-14），5.74（1H，m，H-6），5.37（1H，dd，J＝10.0，7.3 Hz，H-12），2.72（1H，m，H-10），2.66（1H，dd，J＝13.7，7.3 Hz，H-11a），1.22（3H，d，J＝7.2 Hz，Me-17）。13C NMR（100 MHz，CDCl3）δC：23.7（C-1），23.3（C-2），18.8（C-3），123.8（C-4），166.6（C-5），76.8（C-6），31.8（C-7），35.8（C-8），51.1（C-9），43.1（C-10），42.8（C-11），71.7（C-12），124.3（C-13），108.0（C-14），144.4（C-15），140.0（C-16），17.7（C-17），173.8（C-18），176.2（C-20）?；衔?的核磁共振數據與參考文獻[8]基本一致，故鑒定該化合物為teuflin。

化合物2：無色透明片狀結晶（二氯甲烷-甲醇）。ESI-MSm/z：351 [M＋Na]＋。[α]20D－55.7°（c＝0.20，CH3COCH3）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δH：7.44（2H，overlap，H-16，H-15），6.35（1H，brs，H-14），5.35（1H，brt，J＝8.0 Hz，H-12），5.00（1H，m，H-6），3.27（1H，m，H-10），2.58（1H，dd，J＝13.9，8.3 Hz，H-11a），1.35（3H，d，J＝7.2 Hz，Me-17）。13C NMR（100 MHz，CDCl3）δC：23.6（C-1），21.6（C-2），20.2（C-3），128.0（C-4），162.4（C-5），76.3（C-6），35.9（C-7），38.9（C-8），52.3（C-9），36.0（C-10），39.2（C-11），72.1（C-12），125.4（C-13），108.1（C-14），144.6（C-15），139.6（C-16），14.5（C-17），172.8（C-18），177.8（C-20）。該化合物的核磁數據與文獻[9]基本一致，因此，鑒定該化合物為teucvidin。

化合物3：白色粉末。ESI-MSm/z：351 [M＋Na]＋。[α]20D＋145.1°（c＝0.35，CH3COCH3）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δH：7.45（1H，t，J＝1.6 Hz，H-15），7.41（1H，m，H-16），6.34（1H，dd，J＝1.6，0.7 Hz，H-14），5.56（1H，ddd，J＝9.2，3.3，1.0 Hz，H-12），4.96（1H，m，H-6），3.15（1H，m，H-4），2.85（1H，dd，J＝13.5，9.2 Hz，H-11a），1.07（1H，d，J＝7.2 Hz，H-15）。13C NMR（100 MHz，CDCl3）δC：22.4（C-1），23.4（C-2），21.2（C-3），39.7（C-4），132.1（C-5），74.7（C-6），31.8（C-7），35.4（C-8），51.1（C-9），129.0（C-10），40.5（C-11），71.9（C-12），126.2（C-13），107.7（C-14），144.4（C-15），138.6（C-16），15.3（C-17），176.2（C-18），176.7（C-20）。該化合物核磁數據與文獻[10]基本一致，鑒定該化合物為isoteuflin。

化合物4：暗紅色固體。ESI-MSm/z：361 [M＋Na]＋。1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δH：13.72（1H，s，14-OH），9.84（1H，s，11-OH），6.69（1H，brs，H-15），6.60（1H，s，H-6），4.08（1H，d，J＝16.4 Hz，H-1a），2.45（1H，d，J＝16.4 Hz，H-1b），2.47（3H，brd，J＝0.9 Hz，Me-17），2.21（3H，brd，J＝0.7 Hz，Me-18），1.91（3H，s，Me-19），1.56（3H，s，Me-20）。13C NMR（100 MHz，DMSO-d6）δC：45.9（C-1），196.9（C-2），136.0（C-3），146.6（C-4），162.4（C-5），123.5（C-6），190.6（C-7），109.0（C-8），132.8（C-9），42.9（C-10），129.3（C-11），151.0（C-12），117.8（C-13），156.0（C-14），101.3（C-15），150.2（C-16），14.2（C-17），12.1（C-18），17.7（C-19），25.2（C-20）。化合物4的核磁數據與文獻[11]基本一致，鑒定該化合物為teuvincenone F。

化合物5：無色針晶（二氯甲烷-甲醇）。ESI-MSm/z：411 [M＋H]＋。[α]20D－33.9°（c＝0.15，CH3COCH3），1H NMR（400 MHz，CDCl3）δH：5.33（1H，brd，J＝5.2 Hz，H-6），5.20（1H，dd，J＝12.5，7.5 Hz，H-23），3.51（1H，m，H-3），4.69（1H，m，H-26），1.64（3H，s，Me-27）。13C NMR（100 MHz，CDCl3）δC：37.4（C-1），32.1（C-2），71.9（C-3），42.5（C-4），140.9（C-5），121.8（C-6），32.1（C-7），31.8（C-8），50.3（C-9），36.7（C-10），21.2（C-11），39.9（C-12），42.4（C-13），57.0（C-14），24.5（C-15），28.9（C-16），56.0（C-17），12.2（C-18），19.6（C-19），40.4（C-20），21.0（C-21），137.4（C-22），130.2（C-23），52.2（C-24），148.8（C-25），109.7（C-26），20.4（C-27），25.9（C-28），12.4（C-29）。該化合物的核磁共振數據與文獻[12-13]基本一致，故鑒定該化合物為22-dehydroclerosterol。

化合物6：白色粉末。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δH：10.38（1H，-OH），7.94（1H，dd，J＝8.0，1.7 Hz，H-6），7.54（1H，m，H-4），7.05（1H，brd，J＝8.0 Hz，H-3），6.95（1H，m，H-5）。13C NMR（100 MHz，CDCl3）δC：111.5（C-1），162.4（C-2），118.1（C-3），137.2（C-4），119.8（C-5），131.2（C-6），175.2（C-7）。該化合物的核磁共振數據與文獻[14]基本一致，因此鑒定化合物6為水楊酸。

4 結論與討論

本研究首次對香科科屬植物微毛血見愁的化學成分進行了研究，分離得到6個化合物，通過波譜分析手段鑒定分別為teuflin（1）、teucvidin（2）、isoteuflin（3）、teuvincenone F（4）、22-dehydroclerosterol（5）和水楊酸（6），所有化合物均為首次從該植物中分離得到。化合物1、2和3為克羅烷型二萜，系同分異構體，其中化合物1和2差異僅僅在于C-10的構型不同；而化合物2和3的差異僅在雙鍵的位置不同。采用非選擇性葉蝶法，化合物1在10 μg·cm－2葉片面積濃度條件下對三齡小菜蛾（Plutella xylostella）和三齡斜紋夜蛾（Spodoptera litura）的拒食率分別達到（84.2±2.9）%和（80.2±2.1）%[15]；采用非選擇性葉蝶法，當濃度為0.003 mol·L－1時，化合物2對四齡粘蟲（Mythimna separata）的拒食率為52.6%[16]。這表明化合物1和2均具有顯著的拒食作用。化合物4為松香烷型二萜，于1992年已被報道，但是關于其活性研究較少，近期研究表明該化合物能夠顯著抑制脂多糖（LPS）誘導的炎癥反應[17]?；衔?在25 μmol·L－1濃度下對人乳腺癌MCF7細胞的抑制率為54.21%[13]。化合物6是一種天然的消炎藥，同時也是一種植物激素。由此可見，該屬植物的化學成分及其生物活性仍有較大的挖掘潛力，然而，針對該屬植物化學成分的生物活性作用機制研究仍較少，有待于進一步加強。