血腫周圍腦組織miR-340-5p、PDCD4表達(dá)水平與高血壓性腦出血病人預(yù)后的關(guān)系

董 雨 張 山 武一平 祁紅輝

積極明確高血壓性腦出血后神經(jīng)功能損傷的機(jī)制對(duì)疾病治療、改善預(yù)后等均有重要意義[1，2]。有研究指出神經(jīng)炎癥在出血性腦損傷中具有重要作用[3，4]，而且多種微小核糖核酸（microRNA，miRNA）參與神經(jīng)炎癥發(fā)生、發(fā)展[5，6]。研究發(fā)現(xiàn)，miR-340-5p通過調(diào)節(jié)P38/MAPK信號(hào)通路改善大鼠脊髓損傷后神經(jīng)炎癥和細(xì)胞凋亡[7]。大鼠腦出血后血腫周圍組織程序性細(xì)胞死亡蛋白4（programmed cell death protein 4，PDCD4）表達(dá)上調(diào)，通過抑制Akt，促進(jìn)神經(jīng)元凋亡[8]。最新研究發(fā)現(xiàn)miR-340-5p靶向調(diào)控PDCD4對(duì)大鼠腦出血后腦損傷具有保護(hù)作用[9]。本文探討血腫周圍腦組織miR-340-5p及PDCD4的表達(dá)水平與高血壓性腦出血病人預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集2016年9月至2020年9月手術(shù)切除的高血壓性腦出血血腫周圍腦組織217例，選擇同期病理科尸檢獲取的正常腦組織標(biāo)本50例作為對(duì)照。本研究獲醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 腦組織miR-340-5p和PDCD4 mRNA水平檢測(cè)提取腦組織標(biāo)本總RNA，參照反轉(zhuǎn)錄試劑盒（美國Sigma公司）說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，以U6作為內(nèi)參。引物序列：U6上游引物5'-TACGGTAGCTAGCAAGCTA-3'，下游引物5'-CTAGCGAAGTGAGCGTAG-3'；miR-340-5p上游引物5'-TCGAAGTCGAACTGAGCTA-3'，下游引物5'-GACTAGAAGTCGAGCCTGA-3'；PDCD4上游引物5'-TCGAGAGCTGAGCGAGTGA-3'，下 游 引 物5'-TCAATGCGAAGCTGAGAG-3'。使用熒光定量PCR試劑盒（美國Sigma公司）進(jìn)行熒光定量RT-PCR反應(yīng)，反應(yīng)參數(shù)：95℃、10 min預(yù)變性，95℃、10 s，60℃、20 s，72℃、34 s，共計(jì)40個(gè)循環(huán)。

1.3 高血壓性腦出血病人預(yù)后評(píng)估 發(fā)病90 d用改良Rankin量表評(píng)分評(píng)估預(yù)后，0～2分為預(yù)后良好，3～5分為預(yù)后不良。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行分析；計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；采用Pearson相關(guān)系數(shù)分析相關(guān)性；采用多因素logistics回歸分析檢驗(yàn)預(yù)后不良獨(dú)立危險(xiǎn)因素；采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析評(píng)估效果；P＜0.05 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血腫周圍腦組織miR-340-5p、PDCD4的表達(dá)水平及相關(guān)性 血腫周圍腦組織miR-340-5p表達(dá)水平（0.67 ±0.14 ）明顯低于對(duì)照組（0.77 ±0.15 ；P＜0.05 ），而PDCD4 mRNA表達(dá)水平（1.42 ±0.29 ）明顯高于對(duì)照組（1.19 ±0.24 ；P＜0.05 ）。血腫周圍腦組織miR-340-5p表達(dá)水平與PDCD4 mRNA表達(dá)水平呈明顯負(fù)相關(guān)（r=-0.683 ，P＜0.05 ）。

表1 本文217例高血壓性腦出血預(yù)后不良危險(xiǎn)因素的單因素分析（例）

表2 本文217例高血壓性腦出血預(yù)后不良危險(xiǎn)因素的多因素logistic回歸分析

2.2 血腫周圍腦組織miR-340-5p、PDCD4的表達(dá)水平與預(yù)后相關(guān)性217例中，預(yù)后良好148例，預(yù)后不良69例。預(yù)后良好組血腫軸位腦組織miR-340-5p水平（0.70 ±0.13 ）明顯高于預(yù)后不良組（0.62 ±0.10 ；P＜0.05 ），而PDCD4mRNA水平（1.38 ±0.20 ）明顯低于預(yù)后不良組（1.51 ±0.24 ；P＜0.05 ）。

2.3 高血壓性腦出血預(yù)后危險(xiǎn)因素 單因素分析顯示年齡、入院NIHSS評(píng)分、腦出血量、miR-340-5p水平、PDCD4 mRNA水平與病人預(yù)后有關(guān)（P＜0.05；表1）。多因素logistic回歸分析結(jié)果顯示，年齡≥70歲、入院NIHSS評(píng)分≥10分、腦出血量≥60 m l、miR-340-5p水平＜0.665 、PDCD4mRNA水平＞1.425 是預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05；表2）。

圖1 血腫周圍腦組織miR-340-5p水平評(píng)估高血壓性腦出血預(yù)后不良的ROC曲線分析

圖2 血腫周圍腦組織PDCD4 mRNA水平評(píng)估高血壓性腦出血預(yù)后不良的ROC曲線分析

2.4 血腫周圍腦組織miR-340-5p、PDCD4 mRNA水平評(píng)估預(yù)后的效果ROC曲線顯示，血腫周圍腦組織miR-340-5p水平預(yù)測(cè)預(yù)后不良的最佳截?cái)嘀禐?.665 ，曲線下面積為0.8 0 8 （9 5%置信區(qū)間0.7 3 3 ～0.882 ），靈敏度、特異度分別為7 0.97 %、71.0 5 %；PDCD4 mRNA的最佳截?cái)嘀禐?.425，曲線下面積為0.834 （95%置信區(qū)間0.775 ～0.894 ），靈敏度、特異度分別為71.08 %、68.35 %。見圖1、2。

3 討論

miRNA是非編碼RNA的一種，多通過與靶基因mRNA 3'-UTR相應(yīng)序列互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合后產(chǎn)生負(fù)性調(diào)控作用。研究指出多種miRNA在神經(jīng)元病理生理過程具有一定的調(diào)控作用[10～12]。研究發(fā)現(xiàn)miR-340-5p參與喉癌[13]、結(jié)腸癌[14]、肝癌[15]等惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲。本文對(duì)高血壓性腦出血血腫周圍組織miR-340-5p、PDCD4 mRNA進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，miR-340-5p呈異常低表達(dá)，而PDCD4 mRNA表達(dá)水平明顯升高。PDCD4是細(xì)胞凋亡過程中上調(diào)的基因。沈加兵等[8]研究指出PDCD4在大鼠腦出血后血腫周圍區(qū)域表達(dá)上調(diào)，與神經(jīng)元凋亡相關(guān)。本文相關(guān)性分析顯示血腫周圍組織miR-340-5p與PDCD4 mRNA表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，提示高血壓性腦出血血腫周圍組織miR-340-5p低表達(dá)后負(fù)性調(diào)控PDCD4，促進(jìn)神經(jīng)元凋亡并加重病情。miR-340-5p對(duì)PDCD4產(chǎn)生調(diào)控的作用機(jī)制尚未完全明確，推測(cè)與miR-340-5p低表達(dá)后減少對(duì)凋亡執(zhí)行分子caspase-3等抑制，間接導(dǎo)致PDCD4過表達(dá)并抑制Akt磷酸化，從而促進(jìn)神經(jīng)元凋亡[9]。

本文發(fā)現(xiàn)預(yù)后不良組血腫周圍組織miR-340-5p的表達(dá)水平明顯低于預(yù)后良好組，而PDCD4 mRNA表達(dá)水平則明顯增高。提示miR-340-5p低表達(dá)負(fù)性調(diào)控PDCD4，導(dǎo)致PDCD4異常高表達(dá)，影響高血壓性腦出血病人的預(yù)后。為進(jìn)一步明確高血壓性腦出血預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素，多因素logistic分析發(fā)現(xiàn)，miR-340-5p表達(dá)量≤0.665、PDCD4 mRNA表達(dá)量≥1.425、年齡≥70歲、入院NIHSS評(píng)分≥10分、腦出血量≥60 m l是高血壓性腦出血臨床預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。大量研究已經(jīng)表明高齡、入院NIHSS評(píng)分高、腦出血量大是腦出血病人預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素[16～18]。本文進(jìn)一步經(jīng)ROC曲線顯示，血腫周圍組織miR-340-5p水平≤0.665、PDCD4 mRNA水平≥1.425 對(duì)病人臨床預(yù)后不良具有預(yù)測(cè)價(jià)值。這提示臨床實(shí)踐中可檢測(cè)miR-340-5p、PDCD4 mRNA表達(dá)水平，初步預(yù)測(cè)治療預(yù)后。

綜上所述，高血壓性腦出血后，血腫周圍腦組織miR-340-5p表達(dá)減少，可能通過負(fù)向調(diào)控PDCD4參與腦損傷病理過程。血腫周圍腦組織miR-340-5p、PDCD4 mRNA表達(dá)水平對(duì)發(fā)病90 d預(yù)后評(píng)估具有一定臨床價(jià)值。