黃梁木NcEXPA8基因提高擬南芥種子萌發速度的研究

廖嘉明 包鈺韜 陳媛 張登 李華強 歐陽昆唏 陳曉陽

摘?要：?為探究NcEXPA8基因的分子功能，該文以在黃梁木形成層區域中高表達的擴展蛋白基因NcEXPA8為研究對象，研究其在黃梁木種子萌發過程中的表達及其過表達對擬南芥種子萌發的影響。該文以黃梁木和擬南芥野生型（WT）（Col-0）種子以及轉NcEXPA8基因的擬南芥T3代純合體種子為實驗材料，利用實時熒光定量RT-qPCR分析NcEXPA8基因在黃梁木種子萌發不同階段的表達量，并分析NcEXPA8基因和擬南芥種子萌發內源相關基因在擬南芥WT和轉基因不同株系萌發種子中的表達量，且對擬南芥WT種子和轉基因T3代純合體種子在不同處理和不同時間的萌發率進行比較。結果表明：NcEXPA8基因在黃梁木種子萌發不同階段的表達量存在差異，在種殼破裂時表達量最高，隨后降低。與擬南芥WT相比，過表達NcEXPA8基因不僅顯著提高了種子的萌發速度，而且提高了對赤霉素的敏感性，降低了對脫落酸的敏感性，但未影響擬南芥內源相關結構基因的表達。該研究初步分析了黃梁木NcEXPA8基因在種子萌發中的功能，但其最終確定還需在黃梁木中進行驗證。

關鍵詞： 黃梁木， NcEXPA8基因， 種子萌發， 擬南芥

中圖分類號：?S722

文獻標識碼：?A

文章編號：?1000-3142（2021）04-0654-08

Abstract：?In order to explore the molecular function of NcEXPA8 gene， which is highly expressed in the cambium region of N. cadamba， NcEXPA8 gene expression during seed germination of N. cadamba and the effect of its overexpression on seed germination of Arabidopsis thaliana were studied. The seeds of Neolamarckia cadamba， Arabidopsis thaliana wild type （WT， Col-0） and T3 homozygote of A. thaliana overexpressing NcEXPA8 gene were selected as experimental materials. Quantitative real-time polymerase chain reaction （RT-qPCR） was used to analyze the expression of NcEXPA8 gene in different stages during seed germination of Neolamarckia cadamba， and also its expression level and that of endogenous related genes in the germinating seeds of A. thaliana WT and T3 transgenic homozygotes. Furthermore， the germination rates of WT and T3 homozygous seeds of Arabidopsis thaliana were compared at different treatments and different time. The results were as follows： The expression level of NcEXPA8 gene was different among different stages during seed germination of Neolamarckia cadamba， and its?expression level was the highest when the seed coat was broken， and then decreased. Compared to wild type of Arabidopsis thaliana， the?overexpression of NcEXPA8 gene not only significantly increased seed germination speed， but also increased the sensitivity to GA and reduced the sensitivity to ABA， but did not affect the expression of endogenous related structural genes in A. thaliana. This study preliminarily analyzes the function of NcEXPA8 gene in seed germination， but its final determination still need to be verified in Neolamarckia cadamba.

Key words： Neolamarckia cadamba， NcEXPA8 gene， seed germination， Arabidopsis thaliana

植物擴展蛋白（expansin， 簡稱EXP）首次在黃瓜下胚軸中被發現，是一類負責酸性誘導細胞壁伸展的細胞壁蛋白，但不具有細胞壁水解活性（Mcqueen-Mason et al.， 1992）。對植物而言，細胞壁是一種極其重要的結構，提供植物所需的機械支持，同時為植物組織器官生長發育提供可塑性;植物的生長發育需要改變細胞的大小和形狀，這就需要對細胞壁的可塑性進行調節（Marowa et al.， 2016）。盡管對于擴展蛋白生化作用機理的了解還不徹底，但大家普遍認為擴展蛋白參與了細胞壁可塑性的調節，即通過打斷細胞壁微纖絲與基質間的非共價鍵而使細胞壁軟化，允許細胞壁多聚物在細胞膨壓作用下“蠕動”導致細胞快速伸展（Cosgrove， 2000， 2015）。隨著研究的深入，認為擴展蛋白對植物各個組織生長發育都有重要作用，例如：根（Yu et al.， 2011; Boron et al.， 2015）、莖（Boron et al.， 2015; Li et al.， 2017）、葉（Devi et al.， 2015; Zhou et al.， 2015）和果實（Minoia et al.， 2016）的生長發育。

黃梁木（Neolamarckia cadamba），又名團花樹，隸屬茜草科（Rubiaceae）團花屬（Neolamarckia），常綠大喬木，原產中國廣東、廣西和云南南部以及越南、緬甸、馬來西亞等地，由于其生長十分迅速，在1972年的第七屆世界林業大會上，被各國專家譽為“奇跡樹”，而且該樹種材質好，是膠合板、纖維板和制漿造紙等的理想原料（鄧小梅等，2012）。克隆到黃梁木形成層中高表達的擴展蛋白基因NcEXPA8，并構建過表達載體Pbi121-NcEXPA8轉化擬南芥，發現NcEXPA8基因的過量表達促進了擬南芥植株生長以及莖段纖維細胞的伸長（Li et al.， 2017）。

種子萌發起始于干種子吸水，結束于胚根突破包裹胚的種皮（Nonogaki， 2019）。萌發過程分為2個連續的步驟：種皮沿著已經裂開的縫破裂，然后僅留胚乳帽覆蓋胚根（Liu et al.， 2005），只有在胚乳帽充分軟化后才能被胚根生長穿破，這也標志著萌發過程的結束（Nonogaki， 2019）。前人研究表明，種子萌發過程中，編碼修飾細胞壁蛋白的木葡聚糖基轉移酶/水解酶（XTHs）、擴展蛋白在擬南芥（Arabidopsis thaliana）、番茄（Lycopersicon esculentum）、芹菜（Lepidium sativum）的胚乳帽區域均為特異表達（Chen et al.， 2002; Voegele et al.， 2011; Sánchez-Montesino et al.， 2019），且GA缺乏的突變體（gib-1）種子只有在外源GA存在時才能萌發，在吸脹12 h內GA誘導LeEXP4的表達（Chen et al.， 2002），說明通過細胞壁修飾引起胚乳帽區域軟化對種子萌發起到的促進機理具有較高的保守性。

已有研究表明，在擬南芥擴展蛋白家族基因中，AtEXPA2基因在擬南芥萌發的種子中特異高表達，參與種子萌發（Yan et al.， 2014; Sánchez-Montesino et al.， 2019）。此外，還有其他結構基因，如AtMAN7、AtTZF4等也參與了種子萌發的過程，其中AtTZF4對種子的萌發起到抑制作用;赤霉素誘導AtMAN7表達上調，但下調AtTZF4的表達;ABA誘導AtTZF4表達上調，但對AtMAN7表達無調控作用（ Iglesias-Fernandez et al.， 2011; Iglesias-Fernandez et al.， 2013; Bogamuwa et al.， 2013）。因此，本研究分析了NcEXPA8基因在黃梁木種子萌發過程中不同時期的相對表達量，并分析了擬南芥WT和轉基因植株中NcEXPA8基因和參與擬南芥種子萌發的內源相關基因AtEXPA2、AtMAN7和AtTZF4在空白處理和植物激素GA3和ABA處理下的相對表達量，以及探究了GA3和ABA對擬南芥WT和轉基因種子萌發的影響，試圖為后續研究NcEXPA8基因在黃梁木種子萌發中的功能奠定基礎。

1?材料與方法

1.1 材料

本研究以當年收集的黃梁木的種子、擬南芥野生型WT（Col-0）以及已獲得的轉NcEXPA8基因的擬南芥T3代純合體種子（Li et al.， 2017）為材料。

1.2 總RNA的提取與cDNA合成

利用植物RNA試劑盒（Omega）提取總RNA，用40 μL的DEPC水洗脫RNA，于-80 ℃保存備用。PrimeScript TM RT Master Mix試劑盒（Takara，大連）說明書，將總RNA（0.5 μg）逆轉錄為第1鏈cDNA，于-20 ℃保存備用。

1.3 熒光定量（RT-qPCR）分析

將合成的第1鏈cDNA稀釋15倍備用，RT-qPCR在羅氏（Roche）LC480定量PCR儀上進行，每個點重復3次，取平均值分析，以ddH2O代替模板作為實驗的空白對照。RT-qPCR 20 μL反應體系如下：2×SYBR Premix Ex Taq II 10 μL，引物 F （10 μmol·L-1） 1 μL，引物R （10 μmol·L-1） 1 μL，cDNA 2 μL，ddH2O 6 μL。反應程序如下：95 ℃ 30 s;40個循環（95 ℃ 5 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s）;72℃ 2 min;進行58～95 ℃的熔解曲線分析;40 ℃冷卻30 s。黃梁木和擬南芥的內參基因分別為NcCyclophilin和AtPP2AA3（Li et al.， 2017），擬南芥AtEXPA2、AtMAN7和AtTZF4基因RT-qPCR引物參考已有的文獻（Iglesias-Fernandez et al.， 2013; Bogamuwa et al.， 2013; Yan et al.， 2014），所用引物見表1。

1.4 材料處理及萌發試驗

黃梁木種子泡于常溫的水中并置于37 ℃恒溫箱24 h;在培養皿中平鋪濾紙并吸足蒸餾水，將浸泡過的種子平鋪于濾紙上，蓋上蓋子，置于光照強度為1 500 lx、16 h光照/8 h黑暗光周期、25 ℃培養箱中培養，分別于培養3、6、7、8 d收集種子。根據Yan et al.（2014）的方法，收集于25 ℃空白處理（水）、10 μmol·L-1 GA3和ABA中浸泡24 h的擬南芥WT和轉NcEXPA8基因T3代純合體種子。每個樣品設3個生物學重復，樣品采集后放入液氮速凍，置于-80 ℃冰箱儲存備用。

根據Wang et al.（2016）的方法，在培養皿中平鋪濾紙并各自吸足蒸餾水、10 μmol·L-1 GA3和ABA，將擬南芥WT和轉NcEXPA8基因T3代純合體種子置于濾紙上，每個培養皿80～100粒種子，蓋上蓋子，4 ℃黑暗中處理3 d，再置于連續光照強度為1 500 lx、溫度為25 ℃的培養箱中培養。以胚根出現衡量種子已萌發，分別于12、18、24、48 h統計種子萌發率，每個基因型設4個生物學重復。采用SPSS 19統計軟件的t檢驗進行顯著性分析，并計算在18 h時，GA3和ABA對各基因型種子萌發的促進率和抑制率。

2?結果與分析

2.1 NcEXPA8基因在黃梁木種子萌發過程中的表達分析

黃梁木種子在培養6 d后，胚根才出現（圖1：B），在黃梁木種子萌發過程的不同階段，NcEXPA8基因的表達變化大。種子在培養3 d后，表達量較低;在培養6 d后，其表達量達到最高，此時胚根剛露白。隨后，胚根不斷生長，但NcEXPA8基因的表達卻顯著降低，并維持在較低水平（圖1：A）。

2.2 NcEXPA8、AtEXPA2、AtMAN7和AtTZF4基因在轉基因擬南芥中的表達

利用實時熒光定量RT-qPCR技術檢測了NcEXPA8、AtEXPA2、AtMAN7和AtTZF4基因在空白處理（水）、10 μmol·L-1 GA3和ABA處理下擬南芥WT和轉基因NcEXPA8株系萌發的種子（胚根剛露白階段）中的表達。由圖2可知，在轉基因T3代純合體萌發的種子中，各株系NcEXPA8基因的表達量都很高（圖2：B， C， D），而在擬南芥WT中沒有表達（圖2：A）。在相同處理下，AtEXPA2、AtMAN7和AtTZF4基因在擬南芥WT和各轉基因株系間相對表達量無差異。AtEXPA2和AtMAN7基因在擬南芥萌發的種子中特異表達，參與種子萌發（Yan et al.， 2014;Sánchez-Montesino et al.， 2019）。與空白處理（水）相比，在ABA處理下，AtEXPA2和AtMAN7基因在擬南芥WT和各轉基因株系的萌發種子中的表達無明顯差異，而AtTZF4則顯著提高;但在GA3處理下，AtEXPA2和AtMAN7基因在各基因型萌發種子的表達量顯著提高，而AtTZF4則表達量極低。

2.3 擬南芥種子萌發率分析

按照Wang et al.（2016）的方法，進行種子萌發率比較，由表2可知，4 ℃黑暗處理3 d后（0 h），擬南芥WT和3個轉NcEXPA8基因T3代純合體的種子，都未萌發。在25 ℃培養箱中培養12 h后，10 μmol·L-1 ABA處理的WT種子仍未萌發，轉基因種子有個別開始萌發，但數量極少，一個培養皿中最多只有4粒，其余處理的種子都有部分開始萌發，且轉基因種子的萌發率顯著高于WT。在培養箱中培養18 h后，除ABA處理外，其余處理的擬南芥WT和轉基因種子大部分都已萌發;此時空白處理（水）的轉基因3個株系種子萌發率都極顯著地高于擬南芥WT;與空白處理相比，10 μmol·L-1 ABA處理的各基因型種子萌發率低，其中擬南芥WT僅有20.17%，而10 μmol·L-1 GA3處理的各基因型種子萌發率顯著提高，且各轉基因種子分別在一半的培養皿中已全部萌發。培養24 h后，除了ABA處理，其余處理的各基因型種子全已萌發。培養48 h后，各處理的各基因型種子全都萌發。因此，過量表達NcEXPA8基因只是加速種子萌發。

GA3和ABA對擬南芥WT和轉基因種子萌發的影響結果見表2。經10 μmol·L-1 GA3處理的WT和3個轉基因株系的種子萌發都顯著提高，且3個轉基因株系的種子萌發促進率為31.47%～32.09%，大于擬南芥WT的萌發促進率20.92%;而經10 μmol·L-1 ABA處理的各基因型種子萌發率顯著降低，但轉基因種子的萌發抑制率（47.6%～48.73%）小于擬南芥WT的萌發抑制率70.8%，說明過量表達NcEXPA8基因提高了GA3對種子萌發的促進率，降低了ABA對種子的萌發抑制率。

3?討論與結論

模式植物基因組含有許多EXP基因（https：//homes.bio.psu.edu/expansins/genes.htm），但在不同的組織器官以及不同生長發育階段，這些基因的表達水平存在差異，因此它們的具體功能也各有差異。如擬南芥中的AtEXPA10基因在幼嫩的葉片中高表達，它的過表達和反義植株在很大程度上增加和降低了葉片的大小（Cho & Cosgrove， 2000）;AtEXPA7、AtEXPA18與AtEXPA17以高豐度表達在根毛的起始和根的生長中起著決定性的作用（Cho & Cosgrove， 2002; Lee & Kim， 2013）;在葉片保衛細胞特異表達的AtEXPA1，通過改變保衛細胞壁的結構調控氣孔開關（Wei et al.， 2011; Zhang et al.， 2011）;在萌發種子中高表達的AtEXPA2，參與種子的萌發（Yan et al.， 2014; Sánchez-Montesino et al.， 2019）。此外，在其他植物不同的組織器官以及不同生長發育階段中高表達的EXP基因，都參與相應組織器官的生長發育，如番茄（Rose et al.， 2000; Chen et al.， 2001）、水稻（Cho & Kende， 1997; Choi et al.， 2003; Ma et al.， 2013）等。

對于種子萌發和休眠以及相關分子網絡已經被廣泛地研究，種子萌發分別受植物激素GA和ABA的誘導和打破休眠的調控;種子萌發起始于水分的吸取，導致種殼的破裂，最后胚根伸出（Finch-Savage & Leubner-Metzger， 2006; Holdsworth et al.， 2008）。盡管EXP對種子萌發作用的細節尚不清楚，但已有研究證實，在種子萌發中需要細胞壁的軟化以及EXP參與珠孔胚乳的軟化和胚根生長（Morris et al.， 2011; Voegele et al.， 2011）;而EXP具有軟化細胞壁導致細胞快速伸展的功能（Cosgrove， 2000， 2015）。因此，可以推斷EXP在種子的萌發中起著重要的作用。在黃梁木種子萌發的過程中，NcEXPA8基因的表達量在種子剛萌發時最高，而后在胚根的生長中極顯著降低，并維持在較低水平。這些結果表明，NcEXPA8基因可能參與了黃梁木種子的萌發，尤其是胚乳帽區域的軟化。

為了鑒定基因功能，轉基因技術是常用的有效手段之一，尤其是對擬南芥模式植物的轉化。由于其轉化技術成熟、基因組小、生長周期短、植株小等優點，對其容易進行表型觀測、生理生化指標測定以及基因表達檢測，已被廣泛應用于基因功能的檢測（Zhang et al.， 2011; Lu et al.， 2013; Bae et al.， 2014; Boron et al.， 2015）。在我們的前期研究中，已獲得了過表達黃梁木NcEXPA8基因的擬南芥T3代純合體種子（Li et al.， 2017）。

在本研究中，NcEXPA8基因在3個轉基因株系萌發的種子中都存在很高的表達，其表達水平顯著高于在種子萌發中特異表達的AtEXPA2、AtMAN7和AtTZF4基因，但與擬南芥WT相比，轉基因并未改變這些內源基因的表達。參與種子萌發的內源基因AtEXPA2、AtMAN7和AtTZF4，其中AtTZF4對種子的萌發起到抑制作用（Bogamuwa et al.， 2013），在GA3處理下，萌發種子中AtEXPA2和AtMAN7的相對表達量提高，AtTZF4的表達被抑制;在ABA處理下，AtTZF4的表達量提高，但對AtEXPA2和AtMAN7的表達無明顯影響。此外，在GA3處理下，轉基因種子的萌發促進率明顯高于擬南芥WT; 而在ABA處理下，轉基因種子的萌發抑制率明顯低于擬南芥WT。這些結果表明，種子萌發速度的改變，是NcEXPA8基因過表達的直接結果，內源相關基因的表達并未受到轉基因的影響;過表達NcEXPA8基因不僅促進了擬南芥種子的萌發，而且提高了其對GA的敏感性，降低了對ABA的敏感性。因此，這些信息進一步加深了NcEXPA8基因參與黃梁木種子萌發的推斷。為了進一步了解NcEXPA8基因的功能，對轉基因的純合體植株表型和細胞形態進行觀察分析發現，過表達NcEXPA8基因還促進了擬南芥莖葉的生長、纖維細胞的伸長等多效的表型（Li et al.， 2017）。這些發現，暗示著NcEXPA8具有促進多類細胞軟化伸展，從而促進植物的生長功能。

但要了解NcEXPA8基因在黃梁木中的真正功能，還需在黃梁木自身個體中進行功能驗證，利用包括基因過表達以及CRISPR/Cas9基因敲除（Hsu et al.， 2014）等技術創造黃梁木NcEXPA8基因的突變體。目前，我們已建立了黃梁木的遺傳轉化體系（Li et al.， 2019），為在黃梁木中開展基因功能驗證奠定基礎。因此，先前對NcEXPA8基因的研究（Li et al.， 2017）以及本研究將為在黃梁木中開展NcEXPA8基因的研究奠定基礎。

參考文獻：

BAE JM， KWAK MS， NOH SA， et al.， 2014. Overexpression of sweetpotato expansin cDNA （IbEXP1） increases seed yield in Arabidopsis[J]. Transgenic Res， 23（4）：657-667.

BOGAMUWA S， JANG JC， 2013. The Arabidopsis tandem CCCH zinc finger proteins AtTZF4， 5 and 6 are involved in light-， abscisic acid-?and gibberellic acid-mediated regulation of seed germination[J]. Plant Cell Environ， 36（8）： 1507-1519.

BORON AK， VAN LOOCK B， SUSLOV D， et al.， 2015. Over-expression of AtEXLA2 alters etiolated Arabidopsis hypocotyl growth[J]. Ann Bot， 115（1）：67-80.

CHEN F， DAHAL P， BRADFORD KJ， 2001. Two tomato expansin genes show divergent expression and localization in embryos during seed development and germination[J]. Plant Physiol， 127（3）：928-936.

CHEN F， NONOGAKI H， BRADFORD KJ， 2002， A gibberellin-regulated xyloglucan endotransglycosylase gene is expressed in the endosperm cap during tomato seed germination[J]. J Exp Bot， 53（367）： 215-223.

CHO HT， COSGROVE DJ， 2000. Altered expression of expansin modulates leaf growth and pedicel abscission in Arabidopsis thaliana[J]. Proc Natl Acad Sci USA， 97（17）：9783-9788.

CHO HT， COSGROVE DJ， 2002. Regulation of root hair initiation and expansin gene expression in Arabidopsis[J]. Plant Cell， 14（12）：3237-3253.

CHO HT， KENDE H， 1997. Expression of expansin genes is correlated with growth in deep water rice[J]. Plant Cell， 9（9）：1661-1671.

CHOI D， LEE Y， CHO HT， et al.， 2003. Regulation of expansin gene expression affects growth and development in transgenic rice plants[J]. Plant Cell， 15（6）：1386-1398.

COSGROVE DJ， 2000. Loosening of plant cell walls by expansins[J]. Nature， 407（6802）：321-326.

COSGROVE DJ， 2015. Plant expansins： Diversity and interactions with plant cell walls[J]. Curr Opin Plant Biol， 25：162-172.

DENG XM， ZHAN YL， ZHANG Q， et al.， 2012. Study on tissue culture of Neolamarckia cadamba[J]. J S Chin Agric Univ， 33（2）：216-219.[鄧小梅，詹艷玲，張倩，等，2012. 黃梁木組培快繁技術研究[J]. 華南農業大學學報，33（2）：216-219.]

DEVI MJ， TALIERCIO EW， SINCLAIR TR， 2015. Leaf expansion of soybean subjected to high and low atmospheric vapour pressure deficits[J]. J Exp Bot， 66（7）：1845-1850.

FINCH-SAVAGE WE， LEUBNER-METZGER G， 2006. Seed dormancy and the control of germination[J]. New Phytol， 171（3）：501-523.

HOLDSWORTH MJ， BENTSINK L， SOPPE WJ， 2008. Molecular networks regulating Arabidopsis seed maturation， after-ripening， dormancy and germination[J]. New Phytol， 179（1）：33-54.

HSU PD， LANDER ES， ZHANG F， 2014. Development and applications of CRISPR-Cas9 for genome engineering[J]. Cell， 157（6）：1262-1278.

IGLESIAS-FERNANDEZ R， BARRERO-SICILIA C， CARRILLO-BARRAL N， et al.， 2013. Arabidopsis thaliana bZIP44： A transcription factor affecting seed germination and expression of the mannanase-encoding gene AtMAN7[J]. Plant J， 74（5）： 767-780.

IGLESIAS-FERNANDEZ R， RODRIGUEZ-GACIO MC， BARRERO-SICILIA C， et al.， 2011. Three endo-β-mannanase genes expressed in the micropylar endosperm and in the radicle influence germination of Arabidopsis thaliana seeds[J]. Planta， 233（1）： 25-36.

LEE HW， KIM J， 2013. EXPANSINA17 up-regulated by LBD18/ASL20 promotes lateral root formation during the auxin response[J]. Plant Cell Physiol， 54（10）：1600-1611.

LI JC， HU XS， HUANG XL， et al.， 2017. Functional identification of an EXPA gene （NcEXPA8） isolated from the tree Neolamarckia cadamba[J]. Biotechnol Biotechnol Equip， 31（6）：1116.

LI JJ， ZHANG D， QUE QM， et al.， 2019. Plant regeneration and agrobacterium-mediated transformation of the miracle tree Neolamarckia cadamba[J]. Ind Crops Products， 130：443-449.

LIU P， KOIZUKA N， HOMRICHHAUSEN TM， et al.， 2005. Large-scale screening of Arabidopsis enhancer-trap lines for seed germination-associated genes[J]. Plant J， 41（6）：936-944.

LU P， KANG M， JIANG X， et al.， 2013. RhEXPA4， a rose expansin gene， modulates leaf growth and confers drought and salt tolerance to Arabidopsis[J]. Planta， 237（6）：1547-1559.

MA N， WANG Y， QIU S， et al.， 2013. Overexpression of OsEXPA8， a root-specific gene， improves rice growth and root system architecture by facilitating cell extension[J]. PLoS ONE， 8（10）： e75997.

MAROWA P， DING A， KONG Y， 2016. Expansins： Roles in plant growth and potential applications in crop improvement[J]. Plant Cell Rep， 35（5）：949-965.

MCQUEEN-MASON S， DURACHKO DM， COSGROVE DJ， 1992. Two endogenous proteins that induce cell wall extension in plants[J]. Plant Cell， 4：1425-1433.

MINOIA S， BOUALEM A， MARCEL F， et al.， 2016. Induced mutations in tomato SlExp1 alter cell wall metabolism and delay fruit softening[J]. Plant Sci， 242：195-202.

MORRIS K， LINKIES A， MULLER K， et al.， 2011. Regulation of seed germination in the close Arabidopsis relative Lepidium sativum： A global tissue-specific transcript analysis[J]. Plant Physiol， 155（4）：1851-1870.

NONOGAKI H， 2019. Seed germination and dormancy： The classic story， new puzzles， and evolution[J]. J Integr Plant Biol， 61（5）：541-563.

ROSE JK， COSGROVE DJ， ALBERSHEIM P， et al.， 2000. Detection of expansin proteins and activity during tomato fruit ontogeny[J]. Plant Physiol， 123（4）：1583-1592.

SNCHEZ-MONTESINO R， BOUZA-MORCILLO L， MARQUEZ J， et al.， 2019. A regulatory module controlling GA-mediated endosperm cell expansion is critical for seed germination in Arabidopsis[J]. Mol Plant， 12（1）：71-85.

VOEGELE A， LINKIES A， MULLER K， et al.， 2011. Members of the gibberellin receptor gene family GID1 （GIBBERELLIN INSENSITIVE DWARF1） play distinct roles during Lepidium sativum and Arabidopsis thaliana seed germination[J]. J Exp Bot， 62（14）：5131-5147.

WANG Z， CHEN F， LI X， et al.， 2016. Arabidopsis seed germination speed is controlled by SNL histone deacetylase-binding factor-mediated regulation of AUX1[J]. Nature Comm， 7（1）：13412.

WEI PC， ZHANG XQ， ZHAO P， et al.， 2011. Regulation of stomatal opening by the guard cell expansin AtEXPA1[J]. Plant Signal Behav， 6（5）：740-742.

YAN A， WU M， YAN L， et al.， 2014. AtEXP2 is involved in seed germination and abiotic stress response in Arabidopsis[J]. PLoS ONE， 9（1）： e85208.

YUZM， KANG B， HE XW， et al.， 2011. Root hair-specific expansins modulate root hair elongation in rice[J]. Plant J， 66（5）：725-734.

ZHANG XQ， WEI PC， XIONG YM， et al.， 2011. Overexpression of the Arabidopsis alpha-expansin gene AtEXPA1 accelerates stomatal opening by decreasing the volumetric elastic modulus[J]. Plant Cell Rep， 30（1）：27-36.

ZHOU S， HAN YY， CHEN Y， et al.， 2015. The involvement of expansins in response to water stress during leaf development in wheat[J]. J Plant Physiol， 183：64-74.

（責任編輯?李?莉）