上皮性卵巢癌患者血清miR-222-3p、HE4及CA125的表達及其臨床意義*

蘇紅娥 鐘慶吉 符春麗 薛萬興 林元

上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC）是女性生殖系統常見的惡性腫瘤之一，其發病隱匿，病情進展迅速。中國的癌癥統計數據顯示，2015年中國卵巢惡性腫瘤發病率為52.1/10萬，死亡率為22.5/10萬，可見卵巢惡性腫瘤對女性的生命健康造成極大的危害[1]。因此，尋找一種能早期篩查EOC的腫瘤標志物對EOC患者盡早治療和改善預后具有重要意義。目前研究發現，微小核糖核酸（microRNA，miRNA）參與細胞增殖、分化、凋亡和新陳代謝等生物學過程，在EOC的發生發展中起到重要的作用，有望成為新的腫瘤生物標志物[2，3]。近期的研究表明，miR-222-3p在EOC中異常表達，其通過調控多種信號通路參與腫瘤細胞的增殖、侵襲和遷移，可能在EOC的發生發展中扮演重要角色[4]。人附睪蛋白4（human epididymis protein 4，HE4）是一種新型腫瘤標志物，在良性腫瘤及正常組織中含量極低，但在EOC中含量較高，對于早期鑒別和診斷EOC具有重要的價值[5]。糖類抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）是目前診斷EOC的常用腫瘤標志物，其在EOC中高度表達，對EOC的診斷、化療監測及預后評估具有一定作用[6]。本研究通過檢測EOC患者血清miR-222-3p、HE4及CA125水平，分析其與EOC患者臨床病理特征的聯系，判斷其診斷EOC的價值，旨在為EOC的診治及靶向治療提供參考依據。

資料與方法

1 研究對象 選取2017年1月1日～2019年12月31日本院收治的EOC患者118例，年齡35～77歲，平均（55.84±10.36）歲。納入標準：①符合國際婦產科聯合會（FIGO）分類標準和WHO分級標準[7]增加引用，且經病理確診為EOC；②初治EOC，能配合本次研究及病歷資料完整者。排除標準：①術前已行放療、化療或激素治療者；②合并其他惡性腫瘤及自身免疫疾病，無法配合本次研究者。另選取同期與EOC患者年齡匹配的上皮性卵巢良性腫瘤患者105例作為良性組和正常健康女性60例作為對照組。本研究經我院倫理委員會批準（批準號：2017-215），并與患者或家屬簽署知情同意書。

2 標本采集和處理 所有研究對象均于治療前，住院次日采集空腹靜脈血5 mL，置于未加抗凝劑的離心管中，采用LG-25M立式離心機3 500 r/min、離心半徑12.5 cm，離心10 min。收集血清放入-80℃低溫冰箱保存待測，剔除溶血標本。

3 miR-222-3p檢測 miR-222-3p引物：上游5'-AGCTAGGATCTAGTGACGAG-3'，下游5'-GCATGACGCATGCAGTCTAG-3'。在ABI 7500型熒光定量PCR儀（美國ABI公司）上進行實時熒光定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）。反應體系為20 μL：1 μL引物及探針Mix（20×），10 μl TaqMan通用混合物溶液（2×），1.33 μL反向轉錄脫氧核糖核酸，7.67 μL雙蒸餾水。擴增條件：95℃預變性10 min、95℃變性15 s、60℃復性60 s進行45個循環，實驗重復3次。以U6為內參照，采用2-△△Ct法計算miR-222-3p的相對表達水平，其中△Ct=Ct目的基因-CtU6。

4 HE4及CA125檢測 采用羅氏E601電化學發光免疫分析儀及配套試劑，化學發光法測定血清HE4及CA125水平，HE4＞150 pmol/L為陽性，CA125＞35 U/mL為陽性，操作過程嚴格按照試劑說明書及儀器操作規程進行。

結 果

1 各組臨床一般資料比較 EOC組、良性組和對照組三組間一般資料比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組臨床一般資料比較

2 各組血清miR-222-3p、HE4及CA125水平比較 EOC組血清miR-222-3p、HE4及CA125水平均明顯高于良性組和對照組，差異均有統計學意義（P＜0.001）；而對良性組與對照組血清miR-222-3p、HE4及CA125水平進行比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 各組血清miR-222-3p、HE4及CA125水平比較±

表2 各組血清miR-222-3p、HE4及CA125水平比較±

注：與對照組比較，aP＜0.001；與良性組比較，bP＜0.001

組別 對照組 60 0.73±0.24 48.60±9.75 20.72±9.40良性組 105 0.84±0.35 53.46±11.63 26.83±11.56 EOC組 118 1.62±0.74ab 346.20±58.72ab 307.60±94.25ab F值 13.218 16.574 11.370 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

3 EOC患者血清miR-222-3p、HE4及CA125表達與臨床病理特征的關系 隨著EOC臨床分期增高，血清miR-222-3p、HE4及CA125水平逐漸升高，Ⅲ～Ⅳ期EOC患者血清miR-222-3p、HE4及CA125水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期，差異均有統計學意義（P＜0.01）；低分化EOC患者血清miR-222-3p、HE4及CA125水平明顯高于中高分化，差異均有統計學意義（P＜0.01）；有淋巴結轉移EOC患者血清miR-222-3p、HE4及CA125水平明顯高于無淋巴結轉移，差異均有統計學意義（P＜0.01）。而對漿液性囊腺癌、子宮內膜樣癌、混合型上皮癌三組間miR-222-3p、HE4和CA125的表達水平進行比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表3。

表3 EOC患者血清miR-222-3p、HE4及CA125表達與臨床病理特征的關系

4 血清miR-222-3p、HE4及CA125水平對EOC的診斷價值 血清miR-222-3p、HE4及CA125水平診斷EOC的最佳截斷值分別為1.16、187.50 pmol/L、162.80 U/mL，三項聯合診斷EOC的曲線下面積（0.948，95%CI：0.887～0.995）明顯高于單項miR-222-3p（0.842，95%CI：0.784～0.903）、HE4（0.866，95%CI：0.804～0.926）及CA125（0.797，95%CI：0.742～0.856），差異有統計學意義（Z=5.816、4.974、6.735，P＜0.05），其敏感度和特異度為96.8%和89.5%。見表4和圖1。

表4 血清miR-222-3p、HE4及CA125水平對EOC的診斷價值

圖1 血清miR-222-3p、HE4及CA125水平診斷EOC的ROC曲線

5 EOC患者血清miR-222-3p表達水平與HE4及CA125的相關性 Pearson相關分析顯示，EOC患者血清miR-222-3p表達水平與HE4（r=0.847，P＜0.001）和CA125（r=0.793，P＜0.001）分別呈正相關。見圖2。

圖2 血清miR-222-3p表達水平與HE4及CA125的相關性

討 論

EOC是常見的婦科惡性腫瘤之一，也是婦科惡性腫瘤中死亡率最高的腫瘤，其發生發展是一個多階段、多因素共同作用的結果，涉及原癌基因和抑癌基因的遺傳學和表觀遺傳學改變。miRNA作為一類非編碼小RNA，廣泛存在于真核生物中，通過在轉錄后水平調控靶基因的表達，參與調控細胞的增殖、凋亡、侵襲、遷移和分化等過程，在EOC的發生發展中發揮著重要的作用，有望成為EOC診斷和治療的重要靶點[8，9]。LIU等[10]研究發現，miRNA在EOC細胞中過表達，其通過促進Erk1/2和ART的磷酸化，從而激活MAPK和PI3K/AKT信號通路，進而促進EOC細胞的增殖和侵襲轉移。ZHANG等[11]研究認為，miRNA在卵巢癌組織和細胞中均呈高表達，其通過抑制SOCS1和p21的表達，增加Cyclin D1的表達，增強SKOV3和OVCAR3細胞株的生長能力，增加細胞克隆代數，從而促進卵巢癌的發生發展。另有研究表明，卵巢癌組織和細胞中miRNA呈高表達，其通過抑制SFRP1、AXIN2和ICAT的表達，啟動WNT/β-catenin信號通路，從而促使卵巢癌細胞向腫瘤干細胞轉化，為卵巢癌的篩查及靶向治療提供新的方向[12]。

本研究顯示，EOC組血清miR-222-3p、HE4及CA125水平均明顯高于良性組和對照組，提示血清miR-222-3p、HE4及CA125水平在EOC患者中異常高表達，其可能通過發揮癌基因的作用來參與EOC的發生發展。楊堃等[13]研究也顯示，EOC患者血清HE4及CA125水平高于良性組和對照組，而良性組和對照組之間無顯著差異，提示HE4及CA125水平變化與EOC發生發展有關。另有研究認為，miR-222-3p在EOC中表達異常，在EOC的發病機制中發揮關鍵作用，可能成為EOC潛在的治療靶點[14]。本研究中，在高臨床分期、低分化程度及有淋巴結轉移的EOC患者，miR-222-3p、HE4及CA125水平均明顯升高，提示miR-222-3p、HE4及CA125水平升高可能促進EOC的病情進展，其高表達可導致一系列靶向的癌基因過度激活，從而參與EOC的發生發展。唐梅等[15]研究發現，血清HE4及CA125水平升高與EOC患者的分化程度、臨床分期及淋巴結轉移密切相關，是影響EOC患者預后的獨立因素。另有研究認為，miRNA表達水平與EOC的臨床分期、淋巴結轉移及預后密切相關，可能是EOC診斷及預后判斷的新型生物學指標[16]。

本研究應用ROC曲線進行分析，結果顯示血清miR-222-3p、HE4及CA125水平診斷EOC的最佳截斷值分別為1.16、187.50 pmol/L、162.80 U/mL，單項檢測對EOC診斷的敏感度和特異度均不高，其臨床應用具有一定的局限性，三項聯合診斷EOC的曲線下面積高達0.948（95%CI：0.887～0.995），其敏感度和特異度為96.8%和89.5%。相關分析顯示，EOC患者血清miR-222-3p表達水平與HE4及CA125均呈正相關（P＜0.001），可見三者之間具有良好的相關性，三項聯合檢測有助于提高EOC診斷的價值。王丹等[17]研究顯示，血清腫瘤標志物HE4及CA125水平在EOC患者中明顯升高，其聯合檢測優于HE4、CA125單項檢測，能為EOC的診斷及病情評估提供更好的價值。MONTAGNANA等[18]研究表明，血清miRNA表達水平上調與EOC發生、發展有關，可作為診斷EOC的潛在生物標志物，在未來有較好的應用前景。

綜上所述，miR-222-3p水平在EOC患者中明顯升高，且與EOC的發生發展密切相關，聯合傳統腫瘤標志物HE4及CA125檢測有助于提高EOC診斷的敏感度和特異度，同時也為了解EOC的發病機制及靶向治療提供新的思路。但這些研究仍處于初步探索階段，未來仍需更多大規模多中心的臨床研究來進一步證實血清miR-222-3p在EOC中的臨床應用價值。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突