早期胃癌患者血清microRNA-633和microRNA-601的表達及臨床價值分析

黃婷婷 彭鑫 符鑫 廖雪霞 羊明娟

早期胃癌是一種癌組織浸潤僅限于粘膜層及粘膜下層的惡性腫瘤，一般無明顯癥狀，部分患者可出現上腹隱痛、飽脹不適、食欲不振、消化不良等臨床表現，易被誤診為普通胃炎而被忽視，錯過最佳治療時機[1]。因而，尋找一種早期胃癌篩查的生物學標志物對胃癌的早發現、早治療尤為重要。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）是一類長度在21～25 nt的非編碼小分子RNA，參與細胞增殖、分化、凋亡和新陳代謝等過程，在胃腸道腫瘤的發生發展中起到重要的作用[2]。近年來的研究發現，miR-633及miR-601在胃腸道腫瘤患者中異常表達，并能通過調控多種信號通路參與胃腸道腫瘤的發生發展，可能在胃腸道腫瘤的診斷、治療和預后方面扮演重要角色[3，4]。糖類抗原72-4（carbohydrate antigen 72-4，CA72-4）及糖鏈抗原19-9（carbohydrate antigen 19-9，CA19-9）是胃腸道腫瘤最常見的血清腫瘤標志物，在胃癌診斷及預后評估中具有一定的作用[5，6]。本研究通過檢測早期胃癌血清miR-633、miR-601的表達及CA72-4、CA19-9的水平，分析其對早期胃癌的診斷價值，以期為早期胃癌的篩查提供指導。

資料與方法

1 研究對象 選取2016年1月1日～2019年12月31日儋州市人民醫院收治的胃癌患者116例，其中男性80例，女性36例，年齡30～77歲，平均年齡（57.20±10.65）歲。116例胃癌的病理類型為腺癌84例，印戒細胞癌21例，粘液癌11例。納入標準：（1）根據胃鏡檢查及組織病理學結果診斷為胃癌，參照WHO胃癌的病理學分類；（2）各指標檢測前均未接受放療、化療、免疫治療及手術切除者。排除合并其他惡性腫瘤、血液系統疾病、免疫系統疾病及嚴重肝腎疾病者。另選取同期50例健康體檢者作為對照組，其中男性32例，女性18例，年齡35～75歲，平均年齡（58.42±10.15）歲。本研究經我院倫理委員會批準（倫理審批號：2016-1128），并與患者簽署知情同意書。

2 分組方法 根據胃癌患者病情進展程度，分為早期胃癌組48例和進展期胃癌組68例，早期胃癌和進展期胃癌的診斷參考《2014版胃癌臨床實踐指南》[7]。早期胃癌指腫瘤局限于胃粘膜的粘膜層和粘膜下層，未突破基底膜，臨床癥狀較輕，可出現腹部飽脹、上腹疼痛、消化不良等不適；進展期胃癌指癌組織浸潤到粘膜下層，進入肌層或已穿過肌層達漿膜者，臨床癥狀有上腹疼痛劇烈，嚴重者難以忍受，可有出血存在。

3 觀察指標 所有研究對象均采集空腹靜脈血5 mL置于未加抗凝劑的離心管中，離心分離血清，-80℃低溫冰箱保存待測。在ABI 7500型熒光定量PCR儀（美國ABI公司）上進行實時熒光定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）。反應體系為20 μL：TaqMan MicroRNA Assay 1.00 μL，cDNA 1.33 μL，TaqMan 2× Universal PCR Master Mix 10.00 μL，dd H2O 7.67 μL，混合后離心放入定量PCR儀。擴增條件為：95 ℃預變性10 min、95 ℃變性15 s、60 ℃復性60 s進行45個循環，實驗重復3次。以U6為內參照，采用2-△△Ct法計算miR-633及miR-601的相對表達水平，其中△Ct=Ct目的基因-CtU6。另采用羅氏E411電化學發光免疫分析儀及配套試劑盒，化學發光法測定血清CA72-4及CA19-9水平。

結 果

1 各組血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平比較 胃癌組血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平均明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.001）。見表1。

表1 各組血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平比較

表1 各組血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平比較

組別 n miR-633 miR-601 CA72-4（U/mL） CA19-9（U/mL）對照組 50 0.62±0.14 3.80±1.27 3.28±0.85 15.60±5.83胃癌組 116 1.93±0.86 9.16±2.50 30.74±7.35 51.38±12.95 t值 13.635 17.412 13.984 9.206 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2 進展期胃癌組和早期胃癌組血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平比較 進展期胃癌組血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平均明顯高于早期胃癌組和對照組，且早期胃癌組血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平均明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.001）。見表2。

表2 進展期胃癌組和早期胃癌組血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平比較

表2 進展期胃癌組和早期胃癌組血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平比較

注：與對照組比較，aP＜0.01；與早期胃癌組比較，bP＜0.01

組別 n miR-633 miR-601 CA72-4（U/mL） CA19-9（U/mL）對照組 50 0.62±0.14 3.80±1.27 3.28±0.85 15.60±5.83早期胃癌組 48 1.24±0.57a 7.15±1.96a 16.65±4.70a 36.20±10.18a進展期胃癌組 68 2.58±1.16ab 10.92±3.48ab 40.52±10.35ab 64.15±17.42ab t值 10.240 14.610 11.513 7.517 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

3 血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平對早期胃癌的診斷價值 血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平診斷早期胃癌的最佳截斷值分別為1.08、6.28、12.50 U/mL、28.42 U/mL，四項聯合診斷早期胃癌的曲線下面積（0.917，95%CI：0.857～0.975）明顯高于單項miR-633（0.811，95%CI：0.750～0.871）、miR-601（0.842，95%CI：0.783～0.902）、CA72-4（0.820，95%CI：0.762～0.878）及CA19-9（0.725，95%CI：0.663～0.783），差異有統計學意義（Z=5.208，4.850、4.975、7.216，P＜0.05），其敏感度和特異度為95.7%和82.6%。見表3和圖1。

圖1 血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平診斷早期胃癌的ROC曲線

表3 血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平對早期胃癌的診斷價值

4 早期胃癌患者血清miR-633、miR-601水平與CA72-4及CA19-9的相關性 Pearson相關分析顯示，早期胃癌患者血清miR-633水平與CA72-4、CA19-9均呈正相關（r=0.760，P＜0.001；r=0.712，P＜0.001），miR-601水平與CA72-4、CA19-9均呈正相關（r=0.828，P＜0.001；r=0.725，P＜0.001）。見圖2。

討 論

早期胃癌是我國最常見的消化道腫瘤之一，其臨床癥狀不明顯，發病早期易誤診和漏診，而患者出現明顯的臨床癥狀時，多屬于進展期胃癌，致使其預后差、病死率高。CA72-4及CA19-9是胃腸道腫瘤常用的血清腫瘤標志物，對晚期胃癌的診斷及預后判斷具有較好的臨床價值[8]，但這些腫瘤標志物在早期胃癌診斷中的敏感度較低，單項指標診斷早期胃癌的價值有限，聯合應用生物學標志物可對早期胃癌的診療提供新的思路。miRNA是一類在轉錄后水平調節基因表達的非編碼單鏈小分子RNA，參與惡性腫瘤的發生發展過程，有望成為惡性腫瘤診斷和治療的重要靶點[9]。另有研究表明，miR-633及miR-601參與惡性腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲，在腫瘤轉移的調控中發揮一定作用，對惡性腫瘤的診斷、轉移及預后判斷等方面具有重要的價值[10，11]。

本研究顯示，胃癌組血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平均明顯高于對照組，提示血清miR-633及miR-601在胃癌患者中異常高表達，其可能通過發揮癌基因的作用來調節胃癌的發生發展過程。ZOU等[12]研究指出，miRNA異常表達可能影響胃黏膜上皮細胞的增殖、分化和凋亡，進而影響胃癌的發生、發展和轉移，可作為胃癌診斷及靶向治療和預后的生物標志物。YU等[13]研究發現，胃癌患者血清CA72-4及CA19-9水平高于胃良性疾病組和對照組，提示CA72-4及CA19-9水平變化與胃癌發病有關。本研究中進展期胃癌組血清miR-633及miR-601水平均明顯高于早期胃癌組，分析其原因可能是進展期胃癌患者腫瘤負荷較大，腫瘤組織可釋放更多具有原癌基因作用的miR-633及miR-601進入血液。這提示miR-633及miR-601與胃癌進展有關，水平升高可能會促進胃癌的病情進展。KONG等[14]研究表明，miRNA在胃癌患者中明顯升高，其可能參與胃癌的發生和發展，其表達差異與腫瘤復發及淋巴結轉移密切相關，是影響胃癌患者總生存率的獨立預后因素。另有研究認為，miRNA表達水平與胃癌的臨床分期、淋巴結轉移及預后密切相關，可能是胃癌診斷、預后評估及靶向治療的新型生物學標志物[15]。本研究應用ROC曲線分析，結果顯示血清miR-633及miR-601水平對早期胃癌的診斷具有良好的價值，聯合傳統腫瘤標志物CA72-4及CA19-9檢測有助于提高早期胃癌的診斷效能。相關分析顯示，早期胃癌患者血清miR-633、miR-601水平與CA72-4及CA19-9均呈正相關，這說明miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9四項聯合檢測對早期胃癌的診斷具有重要的價值。MIN等[16]研究發現，miR-601在胃癌組織和細胞中的表達明顯高于對照組，miR-601的高表達可促進胃癌的進展，與胃癌患者生存率低有關，可作為胃癌預后預測的生物學標志物。另有研究表明，miRNA表達異常與胃癌的發生和淋巴結轉移有關，對早期胃癌的診斷較好，可作為檢測早期胃癌的新型非侵入性生物標志物[17]。

綜上所述，早期胃癌患者血清miR-633及miR-601水平明顯升高，聯合傳統腫瘤標志物CA72-4及CA19-9檢測有助于提高早期胃癌診斷的敏感度，為早期胃癌篩查提供了一種非侵入性的輔助診斷方法。但這些研究仍處于初步探索階段，未來仍需更多的多中心、大樣本的臨床研究來驗證。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突