多次單采血小板對(duì)獻(xiàn)血者血常規(guī)等指標(biāo)的影響*

陳蘭蘭 張燕華 車(chē)進(jìn) 張嘉洪 麻靜敏 李鳳

為了預(yù)防和治療因血小板數(shù)量減少或功能異常而引起的出血，單采血小板輸注是一種常見(jiàn)的血液治療措施。獻(xiàn)血者每次捐獻(xiàn)1個(gè)治療量或2個(gè)治療量，每個(gè)治療量約250 mL～300 mL，至少含有2.5×1011個(gè)血小板，單采后外周血血小板計(jì)數(shù)下降，但隨著機(jī)體儲(chǔ)存血小板的釋放及再生，獻(xiàn)血后約7天左右血小板數(shù)量可恢復(fù)至獻(xiàn)血前水平[1-4]。由于單采血小板的采集時(shí)間長(zhǎng)、體外循環(huán)過(guò)程中使用了一定量的枸櫞酸鈉抗凝劑等原因，多次捐獻(xiàn)可能會(huì)影響血常規(guī)指標(biāo)和血小板相關(guān)因子水平。本研究通過(guò)比較多次單采血小板捐獻(xiàn)者獻(xiàn)血前血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞比容（HCT）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）及血小板生成素（Thromboietin，TPO）、血小板活化因子（Platelet activation factor，PAF）、血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）、血漿β-血小板球蛋白（β-thromboglobulin，β-TG）、血小板第4因子（Platelet factor 4，PF4）等指標(biāo)，分析多次捐獻(xiàn)單采血小板對(duì)獻(xiàn)血者血常規(guī)指標(biāo)及血小板相關(guān)因子的影響，內(nèi)容如下。

對(duì)象與方法

1 研究對(duì)象 通過(guò)查詢(xún)北京市通州區(qū)中心血站血液管理系統(tǒng)相關(guān)數(shù)據(jù)，以過(guò)去一年內(nèi)捐獻(xiàn)單采血小板≥20次且無(wú)獻(xiàn)血不良反應(yīng)史的無(wú)償獻(xiàn)血者60例作為研究組，從檔案中查詢(xún)研究組獻(xiàn)血者初次捐獻(xiàn)單采血小板以及一年前的獻(xiàn)血資料并記錄。28例首次單采血小板捐獻(xiàn)者作為對(duì)照組。

2 儀器與試劑

2.1 儀器：全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（sysmex，XS-500i型）、酶標(biāo)儀（澳斯邦，340RT型）。

2.2 試劑：血常規(guī)檢測(cè)用的配套試劑均來(lái)自sysmex公司。血小板生成素（TPO）、血小板活化因子（PAF）、血管性血友病因子（vWF）、β-血小板球蛋白（β-TG）、血小板第4因子（PF4）等酶聯(lián)免疫分析試劑盒購(gòu)自上海晶抗生物工程有限公司。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

3 方法

3.1 血常規(guī)檢測(cè)：兩組人群均符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》（GB18467-2011），在捐獻(xiàn)單采血小板前采集靜脈血5 mL，用EDTA-K2抗凝，全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè)。血常規(guī)檢測(cè)用的儀器每日進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，并且參加了國(guó)家衛(wèi)健委臨檢中心的室間質(zhì)評(píng)，根據(jù)《獻(xiàn)血者健康檢查要求》（GB18467-2011）對(duì)獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前進(jìn)行外周血血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞比容（HCT）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）等指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。

3.2 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)：上述進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè)后的樣本離心后利用酶聯(lián)免疫試驗(yàn)進(jìn)行血小板TPO、PAF、vWF、β-TG、PF4等相關(guān)因子的定量檢測(cè)[5-8]。通過(guò)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，然后根據(jù)樣本OD值計(jì)算出樣本濃度。所有實(shí)驗(yàn)操作均按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，試驗(yàn)過(guò)程中設(shè)置空白對(duì)照孔，只有當(dāng)直線(xiàn)回歸方程式的確定系數(shù)R2＞0.99（ OD值與濃度具有很強(qiáng)的線(xiàn)性關(guān)系）才能通過(guò)該回歸方程計(jì)算出樣品中的TPO、PAF、vWF、β-TG、PF4濃度。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析。研究組與對(duì)照組初次捐獻(xiàn)單采血小板前HGB、HCT、PLT分別采用t檢驗(yàn)進(jìn)行比較，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)研究組不同年齡組和不同獻(xiàn)血次數(shù)組獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前HGB、HCT、PLT結(jié)果進(jìn)行分析時(shí)，將獻(xiàn)血者一年前的HGB、HCT、PLT結(jié)果作為協(xié)變量進(jìn)行方差分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)獻(xiàn)血者外周血TPO、PAF、vWF、β-TG、PF4濃度進(jìn)行分析時(shí)，對(duì)年齡及累計(jì)獻(xiàn)血次數(shù)進(jìn)行多因素分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 捐獻(xiàn)年齡與次數(shù) 研究組60例多次捐獻(xiàn)單采血小板的獻(xiàn)血者，本次獻(xiàn)血時(shí)平均年齡41.62±9.40歲，最小25歲，最大57歲，本次獻(xiàn)血之前的12個(gè)月內(nèi)平均累計(jì)捐獻(xiàn)單采血小板21.75次。對(duì)照組28例獻(xiàn)血者均為首次單采血小板捐獻(xiàn)者，平均年齡32.89±9.87歲，最小21歲，最大54歲。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 研究組與對(duì)照組初次獻(xiàn)血情況比較：雖然研究組平均年齡（41.62±9.40）歲高于對(duì)照組（32.89±9.87）歲（P＜0.05），但是研究組獻(xiàn)血者的初次獻(xiàn)血年齡（35.75±8.67）歲與對(duì)照組（32.89±9.87）歲無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)對(duì)研究組和對(duì)照組初次捐獻(xiàn)單采血小板的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，研究組初次捐獻(xiàn)單采血小板前血紅蛋白（HGB1）、紅細(xì)胞比容（HCT1）、血小板計(jì)數(shù)（PLT1）與對(duì)照組初次捐獻(xiàn)單采血小板前的情況無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞ 0.05），結(jié)果如表1所示。

表1 研究組初次捐獻(xiàn)單采血小板前與對(duì)照組獻(xiàn)血前血常規(guī)指標(biāo)的比較

2.2 研究組獻(xiàn)血者血常規(guī)指標(biāo)分析

2.2.1 將研究組60例獻(xiàn)血者（一年內(nèi)捐獻(xiàn)20～24次血小板）一年前的HGB2、HCT2、PLT2作為協(xié)變量，對(duì)獻(xiàn)血者本次獻(xiàn)血前HGB3、HCT3、PLT3進(jìn)行4個(gè)年齡組協(xié)方差分析，結(jié)果如表2所示。一年內(nèi)捐獻(xiàn)20次～24次血小板，不同年齡組獻(xiàn)血者外周血HGB3、HCT3、PLT3變化均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表2 研究組不同年齡組獻(xiàn)血者本次捐獻(xiàn)單采血小板血常規(guī)指標(biāo)協(xié)方差分析結(jié)果

2.2.2 將研究組60例獻(xiàn)血者（一年內(nèi)捐獻(xiàn)20次～24次血小板）一年前的HGB2、HCT2、PLT2作為協(xié)變量，對(duì)獻(xiàn)血者本次獻(xiàn)血前HGB3、HCT3、PLT3進(jìn)行3個(gè)不同累計(jì)獻(xiàn)血次數(shù)組的協(xié)方差分析，結(jié)果如表3所示，三組獻(xiàn)血者外周血血小板計(jì)數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.142）。累計(jì)獻(xiàn)血次數(shù)51～100次的獻(xiàn)血組HCT3、PLT3高于另外兩組（P= 0.033 ，P= 0.023）。

表3 研究組不同累計(jì)獻(xiàn)血次數(shù)的獻(xiàn)血者本次獻(xiàn)血前血常規(guī)指標(biāo)協(xié)方差分析結(jié)果

2.3 研究組與對(duì)照組酶免試驗(yàn)結(jié)果：根據(jù)不同年齡及不同累計(jì)捐獻(xiàn)單采血小板次數(shù)分組，88例獻(xiàn)血者本次獻(xiàn)血前外周血TPO、PAF、vWF、β-TG和PF4結(jié)果如表4所示。多因素方差分析結(jié)果表4所示，不同年齡及不同累計(jì)獻(xiàn)血次數(shù)的獻(xiàn)血者本次獻(xiàn)血前外周血TPO、PAF、vWF、β-TG和PF4均無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異學(xué)（P＞ 0.05）。

表4 88例獻(xiàn)血者外周血TPO、PAF、vWF、β-TG和PF4多因素方差分析

討 論

據(jù)統(tǒng)計(jì)，首次獻(xiàn)血者流失與獻(xiàn)血?jiǎng)訖C(jī)、獻(xiàn)血過(guò)程感受、時(shí)間地點(diǎn)不方便等因素有關(guān)[9]，隨著獻(xiàn)血次數(shù)的增加，流失比例逐漸降低[10]。與全血采集相比，單采血小板的采集時(shí)間長(zhǎng)、血液體外循環(huán)等因素導(dǎo)致新獻(xiàn)血者招募任務(wù)艱巨，但是臨床單采血小板需求量卻在不斷增長(zhǎng)。本研究中的研究組60名獻(xiàn)血者平均捐獻(xiàn)單采血小板87.22次（平均164.33個(gè)治療量），他們?cè)谂R床患者輸注治療上給予了極大貢獻(xiàn)。但是，近年來(lái)固定獻(xiàn)血者流失問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)重，而害怕多次獻(xiàn)血對(duì)身體有害是主要原因之一。初次單采血小板獻(xiàn)血者平均年齡32.89歲，小于多次單采血小板獻(xiàn)血者41.62歲（P＜0.05），如果這些初次獻(xiàn)血者能夠加入固定獻(xiàn)血者隊(duì)伍定期捐獻(xiàn)單采血小板，將有助于緩解血液供應(yīng)壓力，使更多的患者能及時(shí)獲得血小板輸注。固定獻(xiàn)血者保留的前提是多次捐獻(xiàn)單采血小板不會(huì)對(duì)獻(xiàn)血者機(jī)體產(chǎn)生損傷、獻(xiàn)血者自身的安全能夠得到保障。據(jù)《獻(xiàn)血者健康檢查要求》（GB18467-2011）和《全血及成分血質(zhì)量要求》（GB18469-2012），單采血小板獻(xiàn)血間隔期為不少于14天，不大于24次/年，每個(gè)治療量單采血小板≥2.5×1011個(gè)。獻(xiàn)血者每次可捐獻(xiàn)1～2個(gè)治療量血小板，獻(xiàn)血后血小板計(jì)數(shù)降低，但仍然在正常范圍內(nèi)，獻(xiàn)血后約7天左右血小板數(shù)量可恢復(fù)獻(xiàn)血前水平。獻(xiàn)血過(guò)程中由于枸櫞酸鈉抗凝劑的使用，部分獻(xiàn)血者游離鈣離子會(huì)暫時(shí)性降低，一般可通過(guò)給予口服葡糖糖酸鈣進(jìn)行預(yù)防。多個(gè)研究顯示定期捐獻(xiàn)血小板對(duì)獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞、白細(xì)胞、免疫球蛋白、血清蛋白、電解質(zhì)等指標(biāo)無(wú)明顯影響[11-13]。有研究發(fā)現(xiàn)頻采獻(xiàn)血者其血小板明顯增多[6]，可能是由于多次捐獻(xiàn)單采小板促使獻(xiàn)血者血小板再生功能增強(qiáng)有關(guān)。本次研究中通過(guò)協(xié)方差分析發(fā)現(xiàn)，不同年齡組獻(xiàn)血者一年內(nèi)多次捐獻(xiàn)單采血小板以后，獻(xiàn)血前血紅蛋白、紅細(xì)胞比容、血小板計(jì)數(shù)均無(wú)顯著變化。不同累計(jì)獻(xiàn)血次數(shù)的獻(xiàn)血者，一年內(nèi)多次捐獻(xiàn)單采血小板后，其外周血血小板計(jì)數(shù)無(wú)顯著變化，但累計(jì)獻(xiàn)血次數(shù)在50～100次的獻(xiàn)血者，其血紅蛋白和紅細(xì)胞比容稍高于累計(jì)20～50次獻(xiàn)血組和累計(jì)大于100次獻(xiàn)血組，但都處于正常參考值范圍，引起這種差異的原因還未可知，需要更大樣本量來(lái)進(jìn)行分析。

血小板生成素（TPO）又名巨核細(xì)胞生長(zhǎng)因子，由肝細(xì)胞分泌產(chǎn)生的一種調(diào)節(jié)血小板水平的生理因子，它的分泌受外周血小板數(shù)量的影響，與血小板計(jì)數(shù)呈負(fù)相關(guān)。血小板活化因子、血管性血友病因子、β-血小板球蛋白和血小板第4因子是反映血小板活化的主要指標(biāo)。PAF生物學(xué)功能主要是血小板激活的指標(biāo)，是一種強(qiáng)的血小板活化劑，可誘導(dǎo)血小板聚集。vWF是由血小板α顆粒和內(nèi)皮細(xì)胞W-P小體釋放的一種粘附蛋白分子，促進(jìn)血小板粘附。血漿vWF升高是血栓性疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。β-TG和PF4，是血漿中血小板特異產(chǎn)物，貯存于血小板α顆粒，血小板受刺激激活時(shí)被釋放入血漿。有研究顯示單采血小板獻(xiàn)血者獻(xiàn)血后血漿TPO水平明顯低于獻(xiàn)血前[6]，頻繁單采血小板獻(xiàn)血者由于TPO消耗增多導(dǎo)致其血漿水平降低[14，15]。但葛健民等[8]報(bào)道獻(xiàn)血間隔期≥1個(gè)月的獻(xiàn)血者，多次捐獻(xiàn)單采血小板后，其TPO和PAF在獻(xiàn)血前后均無(wú)顯著性變化。暫未發(fā)現(xiàn)其他關(guān)于多次捐獻(xiàn)單采血小板后血漿vWF、β-TG、PF4的研究報(bào)道。本研究中通過(guò)多因素方差分析，獻(xiàn)血者外周血TPO、PAF、vWF、β-TG和PF4在不同累計(jì)獻(xiàn)血次數(shù)組和不同獻(xiàn)血年齡組并未顯著差異，說(shuō)明多次捐獻(xiàn)單采血小板對(duì)血小板刺激和激活并不明顯。

由于本研究實(shí)驗(yàn)期間捐獻(xiàn)單采血小板的88例獻(xiàn)血者只有9例為女性獻(xiàn)血者，導(dǎo)致未能分析性別在捐獻(xiàn)單采血小板過(guò)程中對(duì)各種觀(guān)察指標(biāo)的影響。因此，我們有必要在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中擴(kuò)大樣本量減小偏倚，以便獲得更加科學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)論用于獻(xiàn)血者宣傳與招募。

綜上所述，多次捐獻(xiàn)單采血小板對(duì)獻(xiàn)血者外周血血紅蛋白、紅細(xì)胞比容、血小板計(jì)數(shù)無(wú)明顯影響，年齡及獻(xiàn)血次數(shù)對(duì)血小板相關(guān)因子無(wú)明顯影響。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突