不同抗原格局抗篩細胞聯合應用的意義探討*

閆燁 張勤 王麗娜 荊浩 呂毅 蘭炯采

紅細胞血型抗體分為規則抗體和不規則抗體，規則抗體是符合Landsteiner命名法則的血型抗體，不規則抗體是指不符合ABO血型系統Landsteiner命名法則的血型抗體[1]。此抗體大多為免疫性抗體，一般通過輸血、妊娠、免疫性疾病等途徑產生。不規則抗體是引起交叉配血困難和溶血性輸血不良反應的重要原因[2]。本研究采用不同實驗方法和不同抗原格局篩選細胞聯合應用，對擬輸血患者行不規則抗體篩查，預防不規則抗體漏檢，以期降低輸血不良反應的發生。

資料與方法

1 一般資料 選取1 200例擬輸血住院患者作為研究對象，其中男160例，女1 040例，年齡范圍7～85歲，平均年齡（43.61±6.57）歲。有輸血史24例，有妊娠史702例。

2 儀器與試劑 TD-A型血型血清學用離心機、FYQ型免疫微柱孵育器（長春博研科學儀器有限責任公司）；KA-2200型專用離心機（日本久保田技術有限公司）；抗人球蛋白檢測卡、2-巰基乙醇（2-Me）（長春博迅生物技術有限公司）；抗體篩選細胞2和3、譜細胞、抗人球蛋白（IgG，C3d）檢測試劑、木瓜酶（上海血液生物醫藥公司）；抗體篩選細胞1（長春博迅生物技術有限公司）；凝聚胺試劑（珠海貝索生物技術有限公司）；IgM+IgG抗-D（Dominion Bioiogicals Limited）；所用試劑均在有效期內使用。

3 方法 用抗人球蛋白檢測卡篩選出血漿抗體陽性標本，用譜細胞鑒定抗體特異性；血漿抗體陰性標本用鹽水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法、木瓜酶法和不同廠家篩選細胞再次進行檢測，以便發現漏檢抗體。

結 果

1 抗篩結果陰性標本選用兩種不同抗原格局篩選細胞檢測，抗體篩選細胞試劑1鹽水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法抗體檢測結果陰性見表1；抗體篩選細胞試劑2鹽水法、凝聚胺法抗體檢測結果陰性，抗人球蛋白法抗體檢測結果陽性見表2，經譜細胞鑒定檢出lea抗體1例見表3。表1和表2標本為同一患者血樣。

表1 抗體篩選細胞試劑1檢測結果（生產批號20171001）

表2 抗體篩選細胞試劑2檢測結果（生產批號20177039）

表3 lea抗體譜細胞鑒定結果（生產批號20171205）

2 在鹽水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法檢測抗體結果陰性情況下，加用兩步酶法，以O型紅細胞與AB型血漿為陰性對照，以O型紅細胞與IgM+IgG抗-D為陽性對照?？贵w篩選細胞3木瓜酶檢測結果陽性見表4，經譜細胞鑒定檢出lea抗體1例見表5。備注：表4檢測標本與表1和表2不是同一標本。

表4 抗體篩選細胞3檢測結果（生產批號20177043）

表5 患者抗體鑒定結果（生產批號 20171205）

3 1 200例病例中不規則抗體篩查總陽性率為0.75%（9/1 200），其中使用單一試劑檢出陽性率為0.58%（7/1 200），對其余抗篩結果陰性標本選用兩種不同抗原格局篩選細胞進行進一步檢測，檢出抗體陽性2例，漏檢率為0.17%（2/1 193）。

討 論

多次輸血或妊娠可誘導機體產生不規則抗體致血型鑒定困難、交叉配血不合及輸血反應發生。避免不規則抗體漏檢在輸血治療中非常重要，尤其是對有多胎史、輸血史的女性或腫瘤患者[3，4]。輸血史、妊娠史是紅細胞無效輸注的高危因素，漏檢的低效價不規則抗體也可以引起紅細胞無效輸注[5]，因此不規則抗體篩查需要有一套既準確又敏感的實驗方法，本研究用抗人球蛋白檢測卡篩選出抗體陽性標本，用譜細胞鑒定出抗-lea1例，抗-M 2例，抗-E 1例，抗-D 1例，抗-Jka1例，未確定其特異性1例。將抗體陰性標本分別采用鹽水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法選用不同抗原格局篩選細胞進行抗體篩查，經譜細胞鑒定出抗-lea1例；在以上三種方法檢測抗體陰性的情況下，加用木瓜酶法檢測經譜細胞鑒定出抗-lea1例。 1 200例病例中不規則抗體篩查總陽性率0.75%（9/1 200），抗體漏檢率為0.17%（2/1 193）。

Rh系統是紅細胞血型系統中最為復雜、最富有遺傳多態性的血型系統，Rh系統最易產生血型不規則抗體，占不規則抗體的47.06%[7]，是引起新生兒溶血病和免疫性溶血性輸血反應最常見的不規則抗體。Kidd系統抗體不易檢出，抗-Jka常與其他抗體混合存在，且在體內產生后消失很快，極易漏檢并可引起速發性溶血性輸血反應[8，9]。多次輸血產生免疫性抗-Jka和抗-Jkb也可引起嚴重的遲發性輸血反應[10]。lea抗體通常是“自然發生的”，多數為IgM抗體，純粹IgG性質的抗體非常少見，很少能通過抗人球蛋白試驗檢出。盡管lea抗體較常見，卻很少引起溶血性輸血反應[11]。近年來文獻報道Lewis抗體漏檢率高達28.5%，IgG抗體明顯增多，干擾血型鑒定和交叉配血試驗，影響臨床輸血效果[12]。

不規則抗體漏檢與所選篩選細胞的抗原有關，篩選細胞不含有抗體對應的抗原導致抗體漏檢，在抗體篩選時盡量選擇抗原分布廣適合本地特點的不同抗原格局的抗體篩選細胞，使抗原互補避免不規則抗體漏檢。抗體的漏檢與選擇的試驗方法有很大關系，酶可以破壞紅細胞膜上的抗原，會造成M、N、S、s、Fya、Fyb等抗原的漏檢。對ABO、P、Lewis、H、I等血型系統影響較小。酶試劑易失活, 不易保存，應用中會受干擾，試驗中酶標準化，設置陰陽性對照可避免假陽性出現。同一患者標本血樣表1中lea純合子抗人球蛋白法檢出陰性，而表2中lea雜合子時檢出陽性，考慮有以下原因：①該標本血漿Lewis抗體活性弱；抗體不能和具有相應抗原的紅細胞都出現陽性反應。②Lewis抗原不是由紅細胞合成的，來源于血漿中的可溶性Lewis糖脂被動吸附在紅細胞膜上，表1中lea純合子試劑抗原量可能減少。③試劑儲存中保存液的pH或其他特性也會影響抗原減弱的速度。保存液不同，某些抗體與不同廠家的試劑紅細胞呈不同的反應。本研究在抗篩陰性的情況下，選擇不同抗原格局抗篩細胞聯合應用，加用木瓜酶提高抗體檢出率能有效避免抗體的漏檢。

綜合上述情況建議：①抗體篩選時選擇不同廠家不同抗原格局的篩選細胞，使抗原互補。②選擇抗原分布廣適合本地特點的不同抗原格局的抗體篩選細胞。③選擇靈敏的實驗方法，必要時多種方法聯合應用。④對于低效價的抗體盡量用純合子抗原檢測。

不規則抗體引起的溶血性輸血反應可危及患者的生命安全。輸血是急危重癥患者搶救的關鍵，對輸血治療患者選擇適合的實驗方法進行抗體篩選和鑒定，對檢出抗體者避開特異性抗原，輸血時選擇紅細胞上無相應抗原的血液輸注，以保障臨床輸血安全。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突