阿司匹林與丹紅注射液的藥動學相互作用特征研究

李建萍，徐雪君，張沁瑜，郭建明*，段金廒*

1.南京中醫藥大學 江蘇省中藥資源產業化過程協同創新中心，江蘇 南京 210023

2.南京中醫藥大學 中藥資源產業化與方劑創新藥物國家地方聯合工程研究中心，江蘇 南京 210023

藥物相互作用是指2 種或者2 種以上的藥物聯合使用時藥物之間產生的相互影響，主要包括藥效學相互作用和藥動學相互作用。潛在的藥物相互作用會對藥物的安全性和有效性產生巨大的影響。例如，米貝拉地爾與辛伐他汀聯合用藥會產生橫紋肌溶解的風險，因為米貝拉地爾可顯著抑制細胞色素P450 酶的代謝能力，導致辛伐他汀的暴露量增加，在無法控制藥物相互作用風險的情況下，米貝拉地爾已經被撤出了醫藥市場[1]。又如，丙磺舒與青霉素聯合用藥會產生抗菌作用增強的效應，因為丙磺舒可顯著抑制有機陰離子轉運體的轉運功能，導致青霉素的排泄減少[2]。因此，明確潛在的藥物相互作用及機制，對于確保臨床用藥的安全性和有效性具有重要意義。

阿司匹林（aspirin，acetylsalicylic acid）是經典的解熱鎮痛、抗炎藥，小劑量阿司匹林（＜325 mg/d，其中100 mg/d 是最為常用的劑量）被認為是“關鍵和基礎”的抗血小板藥物，臨床上廣泛用于治療心絞痛、缺血性心臟病、心肺梗死、腦血栓等疾病。丹紅注射液（Danhong Injection，DHI）由丹參和紅花2味中藥組成，主要功效是活血化瘀、通脈舒絡，臨床廣泛用于治療冠心病、心絞痛、心肌梗死、腦血栓等疾病。丹紅注射液和阿司匹林是治療心腦血管疾病的中西藥代表，臨床聯合用藥頻率很高。有學者基于醫院信息系統分析丹紅注射液的聯合用藥情況，發現與丹紅注射液聯合使用的最常用藥物就是阿司匹林，聯合使用頻次高達90%以上[3]。在丹紅注射液與阿司匹林高頻率聯合用藥的情況下，藥物相互作用對用藥安全性和有效性帶來的影響也將是廣泛的。

本課題組前期采用代謝組學結合多變量數據分析的方法發現阿司匹林與丹紅注射液之間存在藥物相互作用[4]；丹紅注射液可以通過促進胃黏液分泌、降低胃蛋白酶活性以及降低活性氧簇水平來減輕阿司匹林引起的胃黏膜損傷[5]；丹紅注射液可以通過抑制有機陰離子轉運體的基因轉錄、蛋白表達以及轉運功能來減少水楊酸的腎臟排泄[6]。本研究基于藥動學相互作用，進一步探討阿司匹林與丹紅注射液的藥物相互作用特征，評價阿司匹林與丹紅注射液聯合使用對丹紅注射液中主要丹酚酸類成分藥動學的影響，以及對阿司匹林主要代謝產物腎臟排泄的影響。

1 材料

1.1 動物

SPF 級雄性SD 大鼠，12 周齡，體質量350～400 g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號SCXK（京）2012-0001。大鼠飼養在南京中醫藥大學藥物安全性評價中心，環境溫度為18～29 ℃，相對濕度為40%～70%，采光條件為l2 h明/l2 h 暗，照度為150～300 lx。所有動物實驗均符合南京中醫藥大學動物倫理委員會的標準（批準號201805A023）。

1.2 藥品、試劑與儀器

阿司匹林原料藥（質量分數＞99%，批號27383）購自阿拉丁化學有限公司，每天給藥前用蒸餾水配制成質量濃度為3.2 mg/mL 的溶液。丹紅注射液（10 mL/支，批號15081038）由菏澤步長制藥有限公司提供。對照品水楊酸（質量分數＞99%，批號BW2024）、丹酚酸 A（質量分數＞98%，批號PCS0265）、丹酚酸 B（質量分數＞99%，批號BW1690）、迷迭香酸（質量分數＞99%，批號BW2065）、丹參素（質量分數＞98%，批號BW1693）、龍膽酸（質量分數＞98%，批號SH-1022）、O-羥基馬尿酸（質量分數＞98%，批號SH-B25661）、氯霉素（質量分數＞98%，批號BW1830）以及鹽酸苯海拉明（質量分數C＞98%，批號BW2015）均購自中國食品藥品檢定研究院。

β-葡萄糖醛酸酶（批號 G0251）購自美國Sigma-Aldrich Co.LLC.。β-葡萄糖醛酸酶常用于水解酚基葡萄糖醛酸苷，1 個Sigma 單位的β-葡萄糖醛酸酶在適宜的孵育條件下（pH 5.0，37 ℃）每小時能從酚酞葡萄糖醛酸苷中水解出1.0 μg 的酚酞。血栓烷B2（thromboxane B2，TXB2，批號B001）和6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α，批號H204）檢測試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

Microfuge 22R 臺式微量冷凍離心機（美國貝克曼庫爾特公司）；ML204 電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；PV-1 迷你渦旋混勻器（英國格蘭特公司）；TS100 恒溫混勻儀（杭州瑞誠儀器有限公司）。

2 方法

2.1 分組及給藥

將24 只大鼠隨機分為空白組、阿司匹林組、丹紅注射液組和阿司匹林-丹紅注射液聯合使用組，每組6 只。空白組大鼠每天規律給水喂食；阿司匹林組大鼠每天ig 阿司匹林溶液1 次（10.41 mg/kg），連續ig 14 d；丹紅注射液組大鼠每天尾iv 丹紅注射液1 次（4.16 mL/kg），連續注射14 d；聯合使用組大鼠每天尾iv 丹紅注射液（4.16 mL/kg）后立即ig阿司匹林溶液（10.41 mg/kg），連續給藥14 d。阿司匹林和丹紅注射液每天的給藥劑量相當于體質量60 kg 的患者每天服用100 mg 的阿司匹林或者滴注40 mL 的丹紅注射液[7]。大鼠尾iv 丹紅注射液的速度控制在1 mL/min。動物實驗共進行3 個批次，其中1 個批次用于采集血漿樣品，測定血漿樣品中水楊酸及4 種丹酚酸的含量；第2 個批次用于收集尿液樣品，測定尿液樣品中5 種阿司匹林代謝產物的含量；第3 個批次用于采集血漿樣品，測定血漿樣品中TXB2和6-keto-PGF1α水平。

2.2 血漿樣品的采集與處理

第14 天給藥結束后將所有大鼠禁食12 h，第15 天各組大鼠按照規定的給藥方式分別進行給藥，給藥后1、5、15、30、45 min 及1、1.5、2、4、6、9、12、24 h 分別從眼球后靜脈叢取血，每次的取血體積為0.3 mL，血液樣品置于裝有33 μL 枸櫞酸鈉溶液（3.8%）的離心管中。取血過程中每隔2 h ip一次生理鹽水，補充大鼠的循環血量[8]。

將血液樣品離心（15 000×g，10 min）后，取上清液，獲得血漿樣品。取100 μL 血漿樣品置于新的離心管中，加入100 μL 內標溶液和200 μL 甲醇溶液，充分渦旋30 s 后離心（15 000×g，10 min），取上清液用于UHPLC-MS/MS 分析。氯霉素和苯海拉明分別為ESI+和ESI-模式的內標，配制溶劑為甲醇，質量濃度分別為1.66、0.71 μg/mL。選擇氯霉素和苯海拉明作為內標的原因有3 個：（1）在血漿樣品處理和色譜分析過程中氯霉素和苯海拉明非常穩定；（2）氯霉素和苯海拉明的色譜保留時間與分析物接近；（3）氯霉素和苯海拉明的響應不會對分析物的測定產生干擾。

2.3 UHPLC-MS/MS 同時測定血漿樣品中水楊酸及4 種丹酚酸的含量

應用Acquity UHPLCTM系統（Waters Corp.，Milford，MA，USA）進行色譜分析。使用的色譜柱為UHPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）。柱溫和自動進樣器的溫度分別控制在35、4 ℃。流動相：甲酸-水溶液（1∶1000，A）和乙腈（B），梯度洗脫：0～1 min，3% B；1～6 min，3%～40% B；6～8 min，40%～95% B；8～9 min，95% B；9～9.2 min，95%～97% B。進樣體積為5 μL。

應用Xevo Triple Quadrupole Mass Spectrometer（Waters Corp.，Milford，MA，USA）進行質譜分析。檢測參數設置：毛細管電壓3.0 kV，離子源溫度150 ℃，脫溶劑溫度550 ℃，錐孔氣流速度50 L/h，脫溶劑氣流速度1000 L/h。水楊酸、丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸和丹參素的最佳檢測條件見表1。

表1 水楊酸、丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、丹參素、氯霉素和苯海拉明的UHPLC-MS/MS 分析最佳檢測條件Table 1 Optimal detection conditions for salicylic acid,salvianolic acid A,salvianolic acid B,rosmarinic acid,tanshinol,chlormycetin,and diphenhydramine by UHPLC-MS/MS analysis

配制含有水楊酸、丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸及丹參素的質控樣品（高、中、低3 個濃度水平），根據美國食品藥品管理局（FDA）的生物分析方法驗證指南進行方法學考察，方法學考察包括選擇性、準確度、精密度、回收率、基質效應、穩定性和標準曲線。

2.4 尿液樣品的收集與處理

第14 天給藥結束后將大鼠放入代謝籠，收集24 h 的尿液樣品，并記錄尿液樣品的體積。整個尿液收集過程中尿液收集管都置于冰上。收集的尿液樣品立即離心（800×g、10 min），取上清液置于-80 ℃冰箱保存備用。

2.5 酶水解結合UHPLC-MS/MS 法測定尿液樣品中阿司匹林5 種代謝產物的含量

色譜及質譜分析條件及方法學考察參考本課題組前期建立的方法[9]。

水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸酚基葡萄糖醛酸苷的對照品無法通過商業化途徑獲得，因此，無法通過儀器分析方法直接測定尿液樣品中的含量。但是，可以應用本課題組前期建立的酶水解結合UHPLC-MS/MS 的分析方法，將水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸酚基葡萄糖醛酸苷用β-葡萄糖醛酸酶水解，通過測定釋放的水楊酸和O-羥基馬尿酸的含量，來間接測定尿液樣品中水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸酚基葡萄糖醛酸苷的含量。具體方法如下：（1）建立水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸酚基葡萄糖醛酸苷的UHPLC-MS/MS 檢測方法。采用阿司匹林組的尿液樣品（該尿液樣品中含有水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸酚基葡萄糖醛酸苷），根據水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸酚基葡萄糖醛酸苷的結構式和相對分子質量，對離子檢測模式、母離子、子離子、錐孔電壓及碰撞能量等質譜參數進行優化，最終確定水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷的最佳檢測條件：（ESI-）m/z313→m/z137，錐孔電壓20 kV，碰撞能量15 eV，保留時間1.68 min；O-羥基馬尿酸葡萄糖酚基醛酸苷的最佳檢測條件：（ESI+）m/z372→m/z196，錐孔電壓10 kV，碰撞能量10 eV，保留時間1.40 min。（2）優化酶解時間以確保水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸酚基葡萄糖醛酸苷完全水解。在β-葡萄糖醛酸酶濃度為10 kU/mL 以及溫度為37 ℃的反應條件下，水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷經過4 h 的酶解反應可以完全水解為水楊酸，O-羥基馬尿酸酚基葡萄糖醛酸苷經過8 h 的酶解反應可以完全水解為O-羥基馬尿酸。因此，將酶解時間設定為8 h 可以確保水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸酚基葡萄糖醛酸苷均完全水解。（3）樣品分析與數據處理，從同一份尿液樣品中制備2 份完全相同的檢測樣本，一份直接用于UHPLC-MS/MS 分析，測定尿液樣品中水楊酸、龍膽酸和O-羥基馬尿酸的含量。另一份酶水解后用于UHPLC-MS/MS 分析，測定尿液樣品中水楊酸和O-羥基馬尿酸的總量，根據酶解反應尿液樣品與非酶解反應尿液樣品的分析結果，計算水楊酸和O-羥基馬尿酸增加的濃度，分別就是尿液樣品中水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸酚基葡萄糖醛酸苷的濃度[9]。

2.6 血漿樣品中TXB2和6-keto-PGF1α水平的測定

第14 天給藥結束后，所有大鼠禁食24 h。第15天用10%水合氯醛溶液將所有大鼠麻醉（0.3 mL/100 g），進行頸總動脈取血。血液樣品置于裝有枸櫞酸鈉溶液（3.8%）的離心管中，離心（15 000×g、10 min）后取上清液獲得血漿樣品。采用 TXB2和6-keto-PGF1α試劑盒測定血漿TXB2和6-keto-PGF1α水平，具體操作過程參見試劑盒說明書。

2.7 數據處理

所有數據均用±s（n=6）表示。采用DAS 2.0計算各分析物的藥動學參數。采用Nonparametric Mann-Whitney Test 分析組間差異性，P＜0.05 表示顯著性差異，P＜0.01 表示極顯著性差異。

3 結果

3.1 阿司匹林與丹紅注射液聯合使用對彼此藥物代謝動力學的影響

基于UHPLC-MS/MS 建立的分析方法能快速分離并定量血漿樣品中的水楊酸、丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸和丹參素。空白血漿樣品中的內源性成分、內標成分不會對目標成分的測定產生干擾，目標成分之間也不會產生相互干擾（圖1）。水楊酸、丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸和丹參素的準確度（95.47%～102.68%）、精密度（3.66%～14.36%）、回收率（93.13%～108.21%）、基質效應（96.81%～102.49%）和穩定性（91.92%～104.01%）均在限定范圍內（表2）。在對應的標準曲線最低濃度水平，各成分均具有良好的儀器響應（信噪比＞10，準確度95.47%～103.33%，日內精密度5.00%～11.19%，日間精密度6.58%～12.21%），因此，將各成分標準曲線的最低濃度設定為各自的定量下限。水楊酸、丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸和丹參素的標準曲線、相關系數、線性范圍和定量下限見表3。方法學驗證結果顯示本方法能準確、精密、穩定、可靠地測定血漿樣品中水楊酸、丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸和丹參素的含量。

圖1 水楊酸、丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、丹參素、氯霉素和苯海拉明的UHPLC-MS/MS 色譜圖Fig.1 UHPLC-MS/MS chromatograms of salicylic acid,salvianolic acid A,salvianolic acid B,rosmarinic acid,tanshinol,chlormycetin and diphenhydramine

表2 水楊酸、丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸和丹參素UHPLC-MS/MS 分析的準確度、精密度、回收率、基質效應和穩定性Table 2 Accuracy,precision,recovery,matrix effect and stability of salicylic acid,salvianolic acid A,salvianolic acid B,rosmarinic acid,and tanshinol by UHPLC-MS/MS analysis

表3 水楊酸、丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸和丹參素UHPLC-MS/MS 分析的標準曲線、相關系數、線性范圍和定量限Table 3 Calibration curve,correlation coefficient,linear range and limit of quantification of salicylic acid,salvianolic acid A,salvianolic acid B,rosmarinic acid,and tanshinol by UHPLC-MS/MS analysis

阿司匹林與丹紅注射液聯用主要影響阿司匹林的代謝動力學特征（圖2），對丹紅注射液中主要丹酚酸類成分的代謝動力學特征無顯著影響（圖3）。阿司匹林在吸收過程中及吸收入血后，會迅速被胃黏膜、血漿、紅細胞及肝中的酯酶水解為水楊酸。因此，阿司匹林的血藥濃度低，血漿半衰期為15～20 min[10]。與阿司匹林組相比，聯合使用組水楊酸藥-時曲線下面積（AUC0-24）以及最大血藥濃度（Cmax）均顯著增加（P＜0.05，圖2-B）。但是，與丹紅注射液組相比，聯合使用組丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸以及丹參素的藥-時曲線下面積以及最大血藥濃度均無顯著變化（圖3）。

圖2 阿司匹林與丹紅注射液聯合使用對阿司匹林水解產物水楊酸代謝動力學特征的影響(±s,n=6)Fig.2 Effect of drug-herb interaction of aspirin and Danhong Injection on pharmacokinetics characteristics of aspirin hydrolyzed salicylic acid(±s,n=6)

圖3 阿司匹林與丹紅注射液聯合使用對丹紅注射液中主要丹酚酸的代謝動力學特征的影響(±s,n=6)Fig.3 Effect of drug-herb interaction of aspirin and Danhong Injection on metabolic kinetic characteristics of main salvianolic acids in Danhong Injection(±s,n=6)

3.2 阿司匹林與丹紅注射液聯合使用對阿司匹林代謝產物腎臟排泄的影響

阿司匹林與丹紅注射液聯用顯著減少水楊酸的腎臟排泄量（P＜0.01，圖4-A），但對阿司匹林其他代謝產物（龍膽酸、O-羥基馬尿酸、水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸酚基葡萄糖醛酸苷）的腎臟排泄無顯著影響（圖4-A）。與阿司匹林組相比，聯合使用組水楊酸、龍膽酸、O-羥基馬尿酸、水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸酚基葡萄糖醛酸苷這5 種代謝產物的腎臟排泄總量無顯著變化[阿司匹林組（91.16±15.63）μmol，聯合使用組（89.70±20.82）μmol]。但是，除水楊酸以外的其他4 種代謝產物的腎臟排泄量均有增加的趨勢，將這4 種代謝產物的尿液排泄量作為整體進行比較，發現阿司匹林與丹紅注射液聯用會導致除水楊酸以外的其他4 種代謝產物的尿液排泄總量顯著增加[阿司匹林組（66.92±16.44）μmol，聯合使用組（86.65±5.76）μmol]，所占阿司匹林代謝產物腎臟排泄總量的比例也由73%增加到82%（圖4-B）。

圖4 阿司匹林與丹紅注射液聯合使用對阿司匹林代謝產物腎臟排泄的影響(±s,n=6)Fig.4 Effect of drug-herb interaction of aspirin and Danhong Injection on renal excretion of aspirin metabolites(±s,n=6)

3.3 阿司匹林與丹紅注射液聯合使用對阿司匹林抗血小板作用的影響

阿司匹林通過抑制血小板環氧化酶（cyclooxygenase，COX）活性，減少TXA2生成，發揮抑制血小板聚集的作用[11]。阿司匹林通過乙酰化作用抑制COX 活性被認為是阿司匹林發揮抗血小板作用的關鍵[12]。阿司匹林乙酰化血小板COX 時存在2個獨立位點：一是結合位點（鐵離子-血紅素陽離子位點，Fe2+-heme cationic site），阿司匹林首先快速可逆地與鐵離子-血紅素陽離子位點結合；阿司匹林與鐵離子-血紅素陽離子位點的結合過程可以被其他藥物競爭性拮抗，鄰羥基苯甲酸是藥物拮抗阿司匹林與COX 結合所需要的最小有效基團[13-14]。二是催化位點（絲氨酸殘基530 位點，serine residue 530），阿司匹林與鐵離子-血紅素陽離子位點結合后通過對臨近的絲氨酸殘基530 位點進行緩慢不可逆的乙酰化作用發揮對COX 的抑制作用。

水楊酸沒有乙酰基團，因此對COX 不具有乙酰化作用，但是水楊酸對陽離子結合位點的親和力與阿司匹林相當，因此水楊酸對血小板COX 也具有微弱的抑制作用[15]：在全血中，阿司匹林抑制TXA2生成以及抑制血小板聚集的能力分別是水楊酸的74 倍和2136 倍[16]。此外，與鐵離子-血紅素陽離子位點的強親和力導致水楊酸與阿司匹林發生競爭性拮抗，阻止阿司匹林與鐵離子-血紅素陽離子位點結合，進一步阻止阿司匹林對絲氨酸殘基530 位點的催化作用[12-15]。因此，阿司匹林是發揮抗血小板作用的有效成分，當水解為水楊酸之后就幾乎失去了抗血小板作用，而且水楊酸還會濃度相關性地拮抗阿司匹林的抗血小板作用（圖5-A）[16]。水楊酸拮抗阿司匹林抗血小板作用伴隨著潛在的風險信號，前期已經有臨床研究證實，除阿司匹林外還服用雙氯芬酸、布洛芬以及吲哚美辛等其他非甾體抗炎藥的患者，發生心肌梗死等心血管疾病的風險將增加2.8 倍[17-19]，因為這些非甾體抗炎藥均會拮抗阿司匹林的抗血小板作用。那么，阿司匹林與丹紅注射液聯用導致水楊酸血藥濃度增加，是否會影響阿司匹林的抗血小板作用應進一步探討。

圖5 阿司匹林與丹紅注射液聯合使用對阿司匹林抗血小板作用的影響(±s,n=6)Fig.5 Effect of drug-herb interaction of aspirin and Danhong Injection on antiplatelet effect of aspirin(±s,n=6)

實驗結果顯示，與空白組相比，阿司匹林組和丹紅注射液組的血漿TXB2水平均顯著降低（P＜0.01，圖5-B），其中，丹紅注射液對血漿TXB2水平的抑制作用要略強于阿司匹林（阿司匹林組抑制率為35.5%，丹紅注射液組抑制率為36.3%）。阿司匹林與丹紅注射液聯合使用組的血漿TXB2水平進一步下降，與阿司匹林組相比下降了30.4%，與丹紅注射液組相比下降了29.5%（P＜0.01，圖5-B）。但是，無論是阿司匹林組、丹紅注射液組，還是聯合使用組，均對血漿6-keto-PGF1α水平無顯著影響（圖5-B）。因此，與阿司匹林組或丹紅注射液組相比，聯合使用組的血漿TXB2/6-keto-PGF1α水平顯著降低（P＜0.01，圖5-C），提示阿司匹林與丹紅注射液聯用并不會拮抗阿司匹林的抗血小板作用，反而增強了整體的抗血小板作用，具體作用機制還需進一步實驗研究。

4 討論

阿司匹林與丹紅注射液聯用導致水楊酸血藥濃度顯著增加，但對丹紅注射液中丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸以及丹參素等主要丹酚酸類成分的代謝動力學無顯著影響。因此，本實驗進一步探討了阿司匹林與丹紅注射液聯用對阿司匹林水解產物水楊酸腎臟排泄的影響，發現阿司匹林與丹紅注射液聯用后會導致水楊酸的腎臟排泄量顯著減少。水楊酸是阿司匹林唯一的水解產物，除了以原型進行腎臟排泄外，還會被代謝成龍膽酸、O-羥基馬尿酸、水楊酸酰基葡萄糖醛酸苷、水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷、O-羥基馬尿酸酚基葡萄糖醛酸苷以及龍膽尿酸等[9]，這些I相和II相代謝產物均具有完整的腎臟排泄過程（圖6）。因此，本實驗進一步探討了相互作用對龍膽酸、O-羥基馬尿酸、水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷以及O-羥基馬尿酸酚基葡萄糖醛酸苷腎臟排泄的影響，發現阿司匹林與丹紅注射液聯用導致水楊酸腎臟排泄量減少，水楊酸血藥濃度增加，血液循環中增加的水楊酸則通過轉化為其他代謝產物進行代償性排泄，導致龍膽酸、O-羥基馬尿酸、水楊酸酚基葡萄糖醛酸苷和O-羥基馬尿酸酚基葡萄糖醛酸苷的腎臟排泄總量顯著增加。

圖6 阿司匹林的體內代謝過程示意圖[9]Fig.6 Metabolic pathway of aspirin in vivo[9]

阿司匹林是發揮抗血小板作用的有效成分，當水解為水楊酸后就幾乎失去了抗血小板作用，而且水楊酸還會濃度相關性地拮抗阿司匹林的抗血小板作用[16]。因此，阿司匹林與丹紅注射液相互作用是否會影響阿司匹林的抗血小板作用值得進一步探討。本實驗通過測定血漿TXB2和6-keto-PGF1α水平初步評價了阿司匹林與丹紅注射液聯用對阿司匹林抗血小板作用的影響。前列腺素合酶是一個雙功能酶，同時具有環加氧酶活性和過氧酶活性。花生四烯酸在環加氧酶活性作用下轉化成前列腺素G2（prostaglandin G2，PGG2），PGG2在過氧酶作用下還原成前列腺素H2（PGH2），PGH2在血栓合酶作用下生成血栓素A2（thromboxane A2，TXA2），在前列環素合酶作用下生成前列環素I2（PGI2），TXA2具有誘導血小板聚集和縮血管作用，而PGI2具有抗血小板聚集和舒血管作用，血小板聚集和解聚過程受TXA2和PGI2調控。TXA2和PGI2是評價藥物抗血小板作用的黃金指標，但是TXA2的生物半衰期只有 30 s，會迅速轉化成更加穩定的 TXB2，6-keto-PGF1α是PGI2的水解產物，常用作標記物來評價PGI2的生物合成。因此，本實驗通過測定TXB2和6-keto-PGF1α水平來評價阿司匹林與丹紅注射液聯用后整體的抗血小板作用。結果顯示，阿司匹林與丹紅注射液相互作用并沒有拮抗阿司匹林的抗血小板作用，反而增強了整體的抗血小板作用，具體的作用機制還需進一步實驗探討。

本研究基于健康動物探討了阿司匹林與丹紅注射液相互作用的藥動學一般規律，初步發現了阿司匹林與丹紅注射液聯用對阿司匹林水解產物水楊酸藥動學的影響，后期將基于心血管疾病模型進一步評價阿司匹林與丹紅注射液的相互作用特征，以期為阿司匹林與丹紅注射液臨床聯合用藥提供充實的實驗基礎。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突