防風飲片炮制工藝研究

李俊明，陳光宇，何 群，謝夢洲*

(1.中醫診斷學湖南省重點實驗室 湖南省藥食同源功能性食品工程技術研究中心， 湖南 長沙 410208；2.湖南中醫藥大學，湖南 長沙 410208)

防風，別名銅蕓、回云、回草、百枝、百種，為傘形科植物防風Saposhnikoviadivaricata(Turcz.) Schischk.的干燥根，春、秋二季采挖未抽花莖植株的根，除去須根和泥沙曬干。主產中國黑龍江、四川、遼寧、內蒙古、河北、寧夏、甘肅、陜西、山西、山東等省區，生長于草原、丘陵、多礫石山坡，根供藥用，在我國有數千年應用歷史，是中醫藥常用藥材，系中國東北地區著名藥材之一。有祛風解表、勝濕止痛、止痙的功效，用于感冒頭痛、周身關節痛、神經痛、風濕痹痛、風疹瘙癢、破傷風等癥，味辛、甘，微溫，被歷版《中國藥典》收載，現收載于2015版《中國藥典》一部149-150頁，防風的化學成分主要有色原酮類、香豆素類、揮發油和多糖類等，其中的色原酮是其發揮療效的物質基礎，主要有效成分為升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷系色原酮類主要成分，具有較好的解熱、鎮痛、抗炎、消腫等活性。2015版《中國藥典》一部150頁防風飲片炮制規定：“除去雜質，洗凈，潤透，切厚片，干燥。”各版本的中藥炮制規范中防風的炮制工藝基本上皆為凈制、軟化、切制和干燥，皆無確切的、具體的工藝參數，工藝變數大，欠規范，可操作性不強，批間差異大，重復性差，從而影響了防風飲片的質量。為使防風炮制工藝科學、客觀、量化、數字化、可操作性強，故本實驗以浸出物、升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷為評價指標，參照2015版《中國藥典》一部、各種炮制規范及相關文獻，對防風進行了炮制工藝參數優化研究，優選出科學、合理、穩定、可行的防風炮制工藝參數，為工業化生產提供質量一致的防風飲片。

1 儀器與藥材

1.1 儀器

Ultimate 3000高效液相色譜系統(賽默飛世爾科技(中國)有限公司；包括G1316A四元梯度泵，G1313A標準型自動進樣器，G1316A恒溫箱，G1314A紫外檢測器，Agilent Chemstation 色譜工作站)；中文液晶臺式超聲波清洗器(昆山美美超聲儀器有限公司)；ME204E型電子分析天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；TCS-100型電子臺秤(上海乾峰電子儀器有限公司)；PW135型中草藥粉碎機(天津泰斯特儀器有限公司)；SHH.W21電子三用水箱(北京中興偉業儀器有限公司)；QY-1中藥切片機(溫州頂歷醫療器械有限公司)；101-0AB型電熱鼓風干燥箱(北京中興偉業儀器有限公司)。

1.2 藥材及試劑

各批防風藥材經王智教授鑒定為傘形科植物防風Saposhnikoviadivaricata(Turcz.) Schischk.的干燥根；升麻素苷對照品(批號：111522-201712)購自中國食品藥品檢定研究院(國家藥品標準物質)，供含量測定用(升麻素苷含量96.2%)；5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品(批號：111523-201610)購自中國食品藥品檢定研究院(國家藥品標準物質)，供含量測定用(5-O-甲基維斯阿米醇苷含量96.1%)；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑皆為色譜純或分析純規格；液相色譜柱(月旭，Ultimate?XB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm)。

2 方法與結果

2.1 防風浸出物的測定

將防風飲片粉碎過二號篩，取防風飲片粉末4.000 g，精密稱定，用乙醇作溶劑，按照2015版《中國藥典》[1]四部通則2201浸出物測定法測定。

2.2 升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量測定[1]

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗 液相色譜柱(月旭，Ultimate?XB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm)；以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(40∶60)為流動相，檢測波長為254 nm，流速：1.0 mL·min-1，進樣量：10 μL；柱溫：30 ℃，理論板數按升麻素苷峰計算應不低于2 000。

2.2.2 升麻素苷對照品溶液的制備 取升麻素苷對照品約0.010 0 g，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含升麻素苷1.08 mg的升麻素苷濃溶液1；精密移取1 mL升麻素苷濃溶液1于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含升麻素苷0.108 mg的升麻素苷濃溶液2；精密移取6 mL升麻素苷濃溶液2于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含升麻素苷64.8 μg的對照品溶液，過0.22 μm微孔濾膜至進樣小瓶中。

2.2.3 5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液制備 取5-O-甲基維斯阿米醇苷約0.010 0 g，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含5-O-甲基維斯阿米醇苷1.02 mg的5-O-甲基維斯阿米醇苷濃溶液1；精密移取1 mL 5-O-甲基維斯阿米醇苷濃溶液1于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含5-O-甲基維斯阿米醇苷0.102 mg的5-O-甲基維斯阿米醇苷濃溶液2；精密移取6 mL5-O-甲基維斯阿米醇苷濃溶液2于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含5-O-甲基維斯阿米醇苷61.2 μg的對照品溶液，過0.22 μm微孔濾膜至進樣小瓶中，即得。

2.2.4 供試品溶液制備的藥典法 將防風原藥材敲除去泥沙灰塵，去除雜草、非藥用部位和蟲蛀、霉敗品，切片后粉碎，取過五號篩(80目)的防風原藥材細粉，約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10 mL，稱定重量，水浴回流2 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，取4 mL離心5 min，吸取上清液，過0.22 μm微孔濾膜至進樣小瓶中，即得。

2.2.5 測定法 分別精密吸取對照品溶液各3 μL與供試品溶液2 μL，注入液相色譜儀，測定，見圖1、圖2、圖3、圖4。

圖1 升麻素苷對照品圖譜

圖2 5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品圖譜

圖3 防風藥材HPLC圖譜

圖4 陰性對照品(甲醇空白)圖譜

2.3 防風藥材前處理方法

取防風藥材，除去泥沙、雜草、非藥用部位和蟲蛀、霉敗、腐爛品，將其放入瀝箕內，用自來水淋濕，旋轉瀝箕(模擬滾筒式洗藥機)1 min，再用自來水沖洗1 min，如此操作數次，直至洗凈為止(無肉眼可見泥沙灰塵等)，總計約11 min，使潔凈度符合規定，甩干水，待切制。

2.4 正交設計試驗優選防風最佳切片(炮制)工藝參數

2.4.1 正交設計試驗因素水平的確定 影響飲片炮制質量的主要因素有鼓風干燥溫度、飲片厚度(藥典規定切厚片，故從2～4 mm中選擇)、鋪層厚度、翻動次數。考察因素水平見表1。

表1 防風切片工藝正交試驗結果

2.4.2 正交設計試驗安排及數據統計處理 以浸出物、升麻素苷(A)和5-O-甲基維斯阿米醇苷(B)總和含量為評價指標，采用L9(34)正交設計試驗安排表進行試驗，其組合方案見表2。飲片樣品制備：取洗凈藥材約1 000 g，按大小品質均分為9份，每份100 g，分別淋洗11 min，甩干水，1、4、7號切2 mm片，2、5、8號切3 mm片，3、6、9號切4 mm片，濕飲片按表1因素水平與表2組合試驗號進行實驗，對9個試驗號所得飲片按照2.1～2.2評價指標及測定方法，結果見表2，極差分析見表3，因素間方差分析見表4，對有統計意義的因素進行水平間方差分析見表5。

表2 防風飲片炮制正交試驗結果 (%)

由表3、表4、表5結果可知，以浸出物含量為評價指標時，因素水平皆無統計意義，各因素可取任意水平；以升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷總量為評價指標時，B因素有統計學意義，C因素影響最小，作為誤差項，A、D因素無統計學意義，可取任意水平；對有統計意義的B因素進行水平間方差分析見表5，其水平取值按最高值確定，B因素取1水平或2水平，從經濟學角度考慮，A因素取3水平，C因素取3水平，D因素取1水平；綜合分析可得，A因素取3水平，B因素取1水平或2水平，C因素取3水平，D因素取1水平，最終確定最佳組合為A3B1或B2C3D1，即防風最佳切制炮制工藝為60 ℃鼓風干燥，切2～3 mm厚片，堆放3 cm厚，翻動1次。

表3 防風飲片炮制正交設計試驗極差分析結果

表4 防風飲片炮制正交試驗因素間方差分析(完全隨機模型)

表5 防風飲片炮制正交設計試驗水平間 方差分析(完全隨機模型)

2.4.3 防風炮制正交設計驗證試驗 對15批防風飲片炮制工藝進行了放大驗證試驗，即每批1 000 g，首先將防風藥材去除雜質泥沙，淋洗11 min，瀝干，再按照防風最佳切制炮制工藝：60 ℃鼓風干燥，切2～3 mm厚片，鋪層(堆放)3 cm厚，翻動1次進行防風炮制正交設計驗證實驗，結果見表6，評價指標增加了指紋圖譜相似度一項。由表6結果可知，所有項目的量值傳遞率均在90%以上。

表6 防風藥材-飲片量值傳遞結果

3 討論

防風中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量測定系以干燥品計算，故在測定的同時必須測定樣品的含水量，將樣品重量減去含水量計算含量。

最初采用手工切制工藝，防風必須洗凈悶潤軟化后才能切片，后來由于使用了切藥機，所以防風除雜清洗甩干水后可以直接切片干燥，無須悶潤，節約時間，防止污染，縮短防風炮制生產周期，縮短時間，提高炮制效率。

由防風飲片炮制實驗結果可知，切片厚度對飲片質量影響較顯著，藥典規定切厚片，即從2～4 mm中選擇，實驗結果表明2～3 mm優于4 mm。

防風從藥材到飲片的指紋圖譜相似度反映其炮制前后質量屬性的變化，防風量值傳遞率平均值均達100%以上，說明防風從藥材到飲片量值傳遞率高。