規模化牛場牛附紅細胞體病治療觀察

武玲玲

（遼寧省北票市黑城子動物衛生監督所 122100）

附紅細胞體感染早在20 世紀20 年代就被人們發現，1928年Schilling 和Dingcr 同時在嚙齒動物體內發現了類球狀血蟲體。我國1981 年首先在家兔中發現附紅細胞體。以后相繼在豬、牛、綿羊、山羊、馬、兔、犬、貓、兔、猴、駱駝等哺乳物鳥類及人體中證實感染附紅細胞體。迄今為止，已發現并命名的附紅細胞體有數十種，本病已廣泛分布于世界許多國家和地區。該病嚴重威脅著畜牧業的發展和人類健康，并呈反范圍擴大趨勢。治療牛附紅細胞體病的藥物種類繁多，但目前該試驗養牛場還未有相關調查報告。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物

患病牛50 頭。

1.1.2 試驗試劑

瑞氏染色液、生理鹽水、磺胺間甲嘧啶鈉、鹽酸多西環素、氟苯尼考注射液、血蟲凈、咪唑苯脲、完全培養基(RPMI-1640 與犢牛血清按8:2 的比例混合而成)、需要在4℃冰箱內保存的90%以上感染的抗凝血。

1.2.2.2 藥物濃度的選擇

1.1.3 儀器設備

注射器、載玻片、蓋玻片、顯微鏡、微量移液器等。

1.2 試驗方法

1.2.1 制作涂片，染色鏡檢

在養牛場采集患病牛耳靜脈血液，在實驗室制成涂片，室溫條件下自然干燥，用甲醇固定3～5min 后滴加瑞氏染色液，并覆蓋涂片上1～3min，然后在滴加與染色液同等計量的磷酸緩沖液(pH=6.4)，輕輕晃動使其與染色液充分混合，5min 左右水洗，干燥后在油鏡下觀察。

1.2.2 藥敏試驗

1.2.2.1 體外培養方法

按照7:1 的比例混合完全培養基與抗凝血，裝進離心管（50ml）中，再用高壓滅菌的青霉素小瓶進行分裝，按照試驗要求濃度添加藥物，使混合液體積達到1ml，將混合液放置在37℃的普通培養箱內進行培養。

用生理鹽水對藥物進行稀釋（劑量遵照使用說明），按照等差的方法設置4 組不同的濃度藥物(每組濃度均設對照組)，每組液體混合物的總體積均要達到lml，并使藥物濃度分別達到所需濃度。即鹽酸多西環素：8、6、4、2μg/ml；氟苯尼考：4、3、2、1μg/ml；血蟲凈：12、9、6、3μg/ml；咪唑苯脲：4、3、2、1μg/ml；磺胺間甲嘧啶鈉：4、3、2、1μg/ml。每6h 觀察一次涂片，每組需要觀察5 次。

1.2.2.3 判定紅細胞的感染率

每次分別在4 組液體混合物取5μl 進行壓片檢查，利用高倍顯微鏡，每個壓片觀察5 個視野，每個視野觀察20 個紅細胞，最后取平均值，作為紅細胞感染率的樣本。

1.2.3 臨床療效觀察

選擇具有明顯患有附紅細胞體病的病牛50 頭，并將50 頭病牛隨機分5 個組。對前4 組注射敏感藥物，最后1 組作為空白對照。檢測期間，各組采取相同的飼養管理方式，最后判定結果。

2 結果

2.1 涂片染色鏡檢

血液涂片經瑞氏染色后，感染附紅細胞體的牛紅細胞瑞氏染色后紅細胞失去立體形，形態各異、大小不一，紅細胞邊緣不整齊，呈鋸輪狀、星芒狀。在紅細胞表面有圓形、月牙形、短桿形蟲體，紅細胞呈淡紫紅色，蟲體可染成淡藍色，且發出亮亮的光彩。一般每個紅細胞附有蟲體3～4 個，多者達10～14個。用顯微鏡觀察到紅細胞邊緣有鋸齒狀或星芒狀時，可確診病牛為陽性。

2.2 藥敏試驗

2.2.1 鹽酸多西環素藥敏試驗結果

該鹽酸多西環素治療牛附紅細胞體病的使用說明劑量為3～5mg/kg。根據以上分組試驗結果表明，當鹽酸多西環培養液的濃度為6μg/ml (實際治療劑量為6mg/kg) 時，對牛附紅細胞體的抑制和殺死作用最強大。

2.2.2 氟苯尼考藥敏試驗結果

氟苯尼考治療牛附紅細胞體病的使用說明劑量為0.2ml/kg，根據以上試驗發現，該藥物在體外對牛附紅細胞體的抑制和殺死作用不強，牛附紅細胞體對氟苯尼考不敏感。

2.2.3 血蟲凈藥敏試驗結果

血蟲凈治療牛附紅細胞體病的使用說明用量為3～5mg/kg，根據以上試驗發現，該藥物6μg/ml 和12μg/ml 在體外對牛附紅細胞體抑制作用和殺死作用差別不大，且對牛附紅細胞體的抑制和殺死作用效果最強。

2.2.4 咪唑苯脲藥敏試驗結果

咪唑苯脲治療牛附紅細胞體病的使用說明劑量為1～2mg/kg，根據以上試驗發現，體外對牛附紅細胞體抑制作用和殺死作用差別不大，牛附紅細胞體均能被殺死。

2.2.5 磺胺間甲嘧啶鈉治療結果

磺胺間甲嘧啶鈉治療牛附紅細胞體病的使用說明劑量為0.2ml/kg，根據以上試驗發現，體外對牛附紅細胞體抑制和殺死作用差別不大，牛附紅細胞體可以被殺死。

2.3 臨床療效試驗

選擇患有附紅細胞體病的病牛50 頭，10 頭一組，分成5組。對前4 組注射敏感藥物，第5 組作為空白對照。對1、2、3、4 組持續給藥5h，用藥劑量分別為每天1 次肌肉注射鹽酸多西環素，使用劑量6mg/kg；每天1 次肌肉注射血蟲凈，使用劑量3mg/kg；每天1 次肌肉注射咪唑苯脲，使用劑量lmg/kg；每天2 次靜脈注射磺胺間甲嘧啶鈉，使用劑量0.2ml/kg。對試驗牛進行為期10d 的臨床觀察，對試驗動物采集血液做血涂片，記錄試驗結果。

2.3.1 判定標準

對血液中是否有附紅細胞體進行檢測，同時結合臨床癥狀檢查。采取治療后的牛耳靜脈血液進行涂片染色鏡檢，觀察紅細胞形態、是否有附紅細胞體存在。如觀察到紅細胞為球形、盤形或環形，并且紅細胞表面及邊緣沒有圓形、月牙形或短桿形的折光性蟲體，則表示附紅細胞體不存在。臨床癥狀檢查，體溫恢復到37.5～39.5℃，無貧血和黃疸癥狀，可視黏膜、精神狀況、飲食、排糞正常者為治愈。

2.3.2 藥物的治療效果

由附表可知，治療效果最好的藥物是鹽酸多西環素，其臨床治愈率為90%，其次是血蟲凈，臨床治愈率為80%，咪唑苯脲的臨床治愈率為70%，磺胺間甲嘧啶鈉的臨床治愈率為50%。

附表 藥物的治療情況

2.4 附紅細胞體鏡檢的討論

使用涂片染色鏡檢可提高檢出率，在血漿及紅細胞上觀察到不同形態的附紅細胞體為陽性。

2.5 藥敏試驗的討論

培養條件完全相同的情況下，不同藥物治療該病時，所使用的接近濃度(mg/kg) 都對牛附紅細胞體有抑制作用，但其具有不同的作用效果。所以，在用藥治療牛附紅細胞體時，應根據藥敏試驗結果選擇敏感藥物，按療程投藥，才能收到較好的治療效果。

2.6 臨床療效試驗討論

治療的4 種藥物中治療效果最好的是鹽酸多西環素，其次是血蟲凈和咪唑苯脲治療效果，最后是磺胺間甲嘧啶鈉治療效果。鹽酸多西環素注射液驅殺牛附紅細胞體作用明顯好于其他3 種藥物，治療率為90%。在生產實踐中，懷孕母牛不能用此藥。血蟲凈在治療時有少數中毒癥狀，應用阿托品、安乃近等緩解；治療妊娠母牛時個別會引起流產。咪唑苯脲可造成少數牛出現過敏現象，需要用地塞米松進行搶救，大多數都能搶救過來，使用咪唑苯脲治療牛附紅細胞體病時應多注意過敏反應。沒有太大治療效果的是磺胺間甲嘧啶鈉。在牛附紅細胞體病治療的過程中，除藥物治療外，還需對動物進行補血，增加紅細胞生長，提高動物免疫力，有效防止繼發感染等相應措施。