血清miR-760表達對早期胃癌的診斷價值

劉健

濟南市章丘區(qū)人民醫(yī)院，濟南 251200

胃癌是臨床上最常見的消化道惡性腫瘤之一，嚴重危害人類健康。外科手術(shù)切除是治療胃癌的重要方式，但胃癌起病隱匿，早期癥狀不明顯，發(fā)現(xiàn)時患者多為進展期，經(jīng)手術(shù)治療后其5年生存率仍不足25%［1-2］。研究顯示，早期診斷胃癌能夠有效提高胃癌的治療效果，提高患者生存率［3］。但目前傳統(tǒng)的腫瘤標志物如血清癌胚抗原（CEA）、糖類抗原-19（CA-199）等腫瘤標志物，診斷胃癌的敏感性、特異性不高，不能令人滿意［4］。而電子胃鏡病理活檢并不適宜作為胃癌早期病變的初篩手段。因此，探索新的胃癌腫瘤標志物對早期臨床診斷胃癌至關(guān)重要。研究顯示，微小RNA（miRNA）異常表達與惡性腫瘤的發(fā)生進展密切相關(guān)［5］。miRNA在循環(huán)血液系統(tǒng)不會被RNA酶消化，表達穩(wěn)定，可重復(fù)性高，因此血清中異常表達的miRNA有可能成為胃癌的腫瘤學標志物［6］。miR-760是近年發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)性mi RNA之一［7-8］，在胃癌組織中表達降低，作為抑癌基因發(fā)揮作用［9-10］，但在胃癌患者血清中的表達情況研究較少。因此，本研究探討了早期胃癌患者血清miR-760表達變化及其對早期胃癌的診斷價值，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年2月—2019年12月我院收治的151例胃部疾病患者作為研究對象，其中早期胃癌98例（早期胃癌組）、萎縮性胃炎53例（萎縮性胃炎組）。納入標準：臨床資料完整；有明確的病理學診斷；患者依從性強，配合各項檢查；年齡＞18歲。排除標準：合并其他腫瘤、消化系統(tǒng)疾病；既往有腹腔手術(shù)史，或檢查前已接受相關(guān)治療；合并自身免疫性疾病；入選前1個月內(nèi)服用過質(zhì)子泵制劑、H2受體拮抗劑等藥物；妊娠期、哺乳期女性。早期胃癌組男57例、女41例，年齡33～67（53.02±12.38）歲。早期胃癌定義為癌組織局限于胃黏膜層及黏膜下層，不論其范圍大小和有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移［11］。萎縮性胃炎組男37例、女16例，年齡30～65（52.83±12.50）歲。另選擇同時期體檢正常的30例健康者作為對照組，其中男19例、女11例，年齡30～68（52.97±12.44）歲。三組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學意義。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，入試者均知情同意。

1.2 檢測方法

1.2.1 樣本采集 抽取所有入試者空腹肘靜脈血5 mL，3 000 r/min離心10 min分離血清，-80℃冷存待檢。

1.2.2 血清miR-760檢測 采用實時熒光定量PCR技術(shù)。取部分血清標本，應(yīng)用血清mi RNA提取試劑盒（德國Amibion公司）提取血清總RNA，紫外分光光度計測定提取的RNA的濃度和純度，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（北京全式金生物技術(shù)有限公司）將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，最后應(yīng)用qRT-PCR檢測試劑盒（北京全式金生物公司）進行PCR擴增反應(yīng)。反應(yīng)條件：95℃5 min；95℃15 s，55℃30 s，70℃30 s，共40個循環(huán)。miR-760引物正向序列：5'-TATTGCTTAAGAATACGCGTAG-3'，反 向 序列：5'-AACTCCAGCAGGACCATGTGAT-3'；U6引 物 正向 序 列：5'-AGAAGGCTGGGGCTCATTTG-3'，反向序列：5'-AGGGGCCATCCACAGTCTTC-3'。以U6作為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計算血清miR-760相對表達量。

1.2.3 血清CEA、CA-199檢測 取部分血清標本，采用Access2全自動生化分析儀（美國貝克曼）以化學發(fā)光法檢測血清中的CEA、CA-199。

1.2.4 血清胃蛋白酶原（PG）Ⅰ、PGⅡ檢測 取部分血清標本，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定血清中的PGⅠ、PGⅡ，并計算PG比值（PGR），PGR=血清PGⅠ/PGⅡ，血清ELISA PGⅠ、PGⅡ檢測試劑盒購自上海盈公生物公司。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件。計量資料用xˉ±s表示，組間比較采用單因素方差分析；各指標之間的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析；采用受試者工作特征（ROC）曲線分析各指標對早期胃癌的診斷價值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清miR-760、CEA、CA-199、PGⅠ、PGⅡ、PGR比較 見表1。

表1 各組血清mi R-760、CEA、CA-199、PGⅠ、PGⅡ、PGR比較（xˉ±s）

2.2 早期胃癌組血清miR-76與CEA、CA-199、PGⅠ、PGⅡ、PGR的相關(guān)性 Pearson分析結(jié)果顯示：早期胃癌組血清miR-760與CEA、CA-199、PGⅠ、PGⅡ均呈負相關(guān)（r分別為-0.603、-0.231、-0.716、-0.450，P均＜0.05），而血清miR-760與PGR呈正相關(guān)（r=0.715，P＜0.05）。

2.3 血清miR-760、CEA、CA-199、PGR單獨及聯(lián)合對早期胃癌的診斷價值 見表2。

表2 miR-760、CEA、CA-199、PGR及四項聯(lián)合診斷早期胃癌的價值

3 討論

受飲食結(jié)構(gòu)、生活方式及自然環(huán)境的改變，我國胃癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，且趨于年輕化［12］。外科手術(shù)是治療胃癌的重要手段，但預(yù)后效果與臨床分期密切相關(guān)［13-14］，接受根治術(shù)的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者5年生存率分別為91.8%、80.2%及39.5%［15］，胃癌分期越晚，預(yù)后越差。目前胃癌的病死率仍處于較高水平，主要因為胃癌不易早期發(fā)現(xiàn)，患者確診時大多錯失了最佳治療時機。CEA、CA-199是目前篩查監(jiān)測胃部腫瘤常用的輔助血清腫瘤標志物，特異性較差。血清PGⅠ、PGⅡ及PGR近期研究較多，證實在胃癌的診斷、術(shù)后監(jiān)測及預(yù)后評估起一定作用［16］。但這些標志物在早期胃癌診斷中的價值仍然有限，尚不能滿足目前臨床需求。

miRNA是一類小分子非編碼單鏈RNA，其本身并不翻譯蛋白質(zhì)，但可調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因表達從而參與細胞增殖、分化、侵襲、遷移等多種生物學過程。國內(nèi)外大量研究表明，在胃癌、乳腺癌、胰腺癌等眾多惡性腫瘤患者血清中均存在miRNA的差異表達［17］。血清中miRNA穩(wěn)定性好，可能成為早期胃癌診斷的生物學標志物，已經(jīng)成為目前的研究熱點［19-20］。miR-760是近期發(fā)現(xiàn)的與惡性腫瘤密切相關(guān)的miRNA成員之一，在胃癌組織中表達下降，過表達miR-760能夠抑制胃癌的發(fā)生進展［9］。GE等［10］發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中miR-760的表達下降與胃癌患者的不良預(yù)后密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，早期胃癌組血清miR-760、PGR低于萎縮性胃炎組和對照組，血清CEA、PGⅠ、PGⅡ高于萎縮性胃炎組和對照組，提示早期胃癌患者血清miR-760異常低表達。萎縮性胃炎與胃癌之間的關(guān)系是消化領(lǐng)域的研究熱點之一，且目前非萎縮性胃炎→萎縮性胃炎→腸化生→異型增生→胃癌的病變過程已經(jīng)得到公認［21-22］，本研究也發(fā)現(xiàn)，萎縮性胃炎組miR-760水平低于正常組，提示在胃癌病變發(fā)生前，便已經(jīng)發(fā)生了血清miR-760水平的改變。血清CEA、CA-199、PGⅠ、PGⅡ及PGR與胃癌的關(guān)系已經(jīng)得到較多的研究的驗證，本研究通過Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，早期胃癌患者血清miR-760水平與PGR呈正相關(guān)，與CEA、CA199、PGⅠ、PGⅡ呈負相關(guān)，提示血清miR-760水平與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

ROC曲線是用于反映連續(xù)變量敏感性和特異性的綜合指標，為了進一步探索血清miR-760對早期胃癌的診斷價值，本研究通過ROC曲線分析顯示，血清miR-760、CEA、CA199、PGR診斷早期胃癌的AUC分別為0.894、0.920、0.819、0.789，均具有一定的預(yù)測價值，四項指標聯(lián)合診斷早期胃癌的AUC為0.976，四項指標聯(lián)合診斷早期胃癌的價值明顯優(yōu)于單一指標，這說明多指標聯(lián)合檢測能夠提高早期胃癌的診斷效能，具有更高的敏感性和特異性，在臨床上篩查早期胃癌方面更具有優(yōu)勢。

總之，早期胃癌患者血清miR-760表達降低，并且血清miR-760聯(lián)合CEA、CA-199、PGⅠ、PGⅡ檢測有助于提高早期胃癌的診斷效果。