廣州地區獻血人群ABO及Rh血型檢測的回顧性分析*

黃伯泉，鄭優榮，王 淏，李仲平，黃志健，梁浩堅

(廣州血液中心/廣州市醫學重點實驗室 510095)

ABO、Rh血型系統是人類血液系統中最重要的兩個血型系統，在臨床輸血安全中至關重要?！东I血者健康檢查要求》(GB18467-2011)要求采供血機構在獻血前對獻血者進行ABO正定型篩查，獻血后對ABO正反定型和Rh血型進行檢測和確認，所以精準判讀這兩個血型系統的血型，是保障臨床輸血安全的首要前提，也是給獻血者提供優質服務的需要。本研究回顧性分析2016-2019年本中心獻血者常規血型檢測及其中的錯血型、疑難血型檢測數據，旨在了解廣州地區獻血人群ABO及Rh血型的檢測狀況、本地區人群的ABO血型構成分布及Rh陰性血型分子生物學狀況，作為積累本地區人群血型大數據資料的同時完善獻血者告知服務，為合理安排獻血招募及規范獻血者血型篩查提供依據，以保障臨床用血的安全、有效。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2019年12月廣州血液中心無償獻血者的全血標本進行研究，獻血者知情同意相關血型的檢測。標本采集為EDTA-K2抗凝試管，并以3 000 r/min離心10 min。

1.2 方法

1.2.1主要試劑和儀器

單克隆抗-A、抗-B抗血清(上海血液生物醫藥有限公司)，抗-D(IgM)抗血清及ABO血型反定型紅細胞試劑(北京金豪)，直接抗球蛋白試劑(珠海貝索)、抗M、抗N、抗P1、抗體鑒定譜細胞(上海血液生物醫藥有限公司)，單克隆抗-D(IgM+IgG)試劑(IgM克隆號：TH-28；IgG克隆號：MS-26；英國Millipore)，抗球蛋白微柱凝膠卡(GRIFOLS),Rh血型分型卡(江陰力博),人源抗-A和抗-B血清和不規則抗體篩選細胞(本中心血型室自制)，凝聚胺微柱凝膠檢測卡(長春博訊)，凝聚胺(珠海貝索生物技術有限公司),DNA抽提試劑盒(QuickGene DNA whole blood kit S,日本Kurabo),以上試劑均批批檢合格并在有效期內使用；貝克曼PK7300血型分析儀(美國，Beckman Coulter)，STAR 8CH自動加樣儀(山東煙臺，奧斯邦)、久保田平板離心機(日本，Kubota)、久保田KA-2200血清學專用離心機(日本，Kubota)、振蕩器、恒溫水浴箱，PCR儀(Veriti，ABI)，核酸測定儀(德國，Implen)，3130XL型基因序列分析儀(美國，ABI),酶標比色儀340RT(奧地利，Anthos公司)。

1.2.2血型檢測方法

ABO血型及Rh血型檢測均按照《全國臨床檢驗操作規程(第三版)》和《血站技術操作規程(2012版)》要求和本中心實驗室標準操作規程(SOP)進行操作。具體如下：(1)貝克曼PK 7300全自動血型儀采用梯度形微孔板法檢測血型，在同一塊梯形微孔板上同時檢測ABO正反定型及Rh血型。正反定型一致，則準備判讀該標本的血型結果，不一致或任意一孔為“？”則打“？”，由兩名工作人員共同對梯形板的結果與微機判斷結果進行核對。(2)ABO 正反定型及Rh標本手工方法,使用 STAR 8CH自動加樣儀在96孔血型板中按程序加樣，震蕩、1 000 r/min離心1 min，再震蕩后酶標儀中根據凝集格局判讀結果，由兩名工作人員復核。對以上檢測中所有Rh陰性可疑標本及有疑問的標本(正反不一致，O指示細胞凝集等)留待在本中心臨床輸血研究所血型參比實驗室進行確證定型，作為最終結果，對于實驗室中ABO正反一致而與外采初篩有異的標本對相應血袋血液復核血型再作判定。中心血型室對ABO疑難血型和Rh陰性可疑血型的血型血清學確認、基因測序程序和方法均參照文獻[1-3]。外采人員初篩血型與實驗室篩查后不一致血型，包括Ⅰ類血型錯誤：外采初篩血型與實驗室篩查(正反一致)不一致血型，即外采人員操作造成的血型錯誤；Ⅱ類血型錯誤：實驗室篩查后仍呈可疑血型(正反不一致，O型指示紅細胞凝集等)，需要在中心血型參比實驗室作系統血清學確認。

2 結 果

2.1 ABO血型分布情況

2016年1月至2019年12月廣州地區共獻血1 412 960(人)份，ABO血型中A、B、O和AB型分別為381 235份(26.98%)、357 262份(25.28%)、578 590份(40.95%)和95 873份(6.76%)；篩查1 412 960份Rh血型，Rh陰性血型5 727份(0.41%)，RhD變異型156份(0.01%)。

2.2 1 412 960份獻血中出現的血型錯誤

1 412 960份獻血中出現2 148份ABO血型錯誤，其中，Ⅰ類血型錯誤1 328份[61.82%(1 328/2 148)]，總發生頻率為0.094%(1 328/1 412 960)；Ⅱ類血型錯誤820份(38.18%)，總發生頻率為0.058%(820/1 412 960)。Ⅱ類血型錯誤中ABO亞型原因占血型錯誤總數的6.84%(147/2 148)，不規則抗體陽性占13.18%(283/2 147)。2016-2019年廣州地區獻血人群中ABO血型錯誤情況，見表1。本地區ABO亞型主要是B類亞型(B亞+AB亞)，占比為61.90%(91/147)。147份ABO血型亞型分布及分類，見表2。Rh陰性表型確認5 727份[0.41%(5 727/1 412 960)]中ccdee為51.65%(2 958/5 727)、Ccdee為35.88%(2 055/5 727)、CCdee為7.44%(426/5 727)、CcdEe為1.73%(99/5 727)、ccdEe為2.85%(163/5 727)、CCdEe為0.45%(26/5 727)。

表1 2016-2019年廣州地區獻血人群中ABO血型錯誤情況[n(%)]

表2 147份ABO血型亞型分布及分類

3 討 論

2009年PEYRARD等[4]報道紅細胞血型系統為30個，紅細胞抗原308個，ABO和Rh血型系統是人類血型系統中兩個非常重要和復雜的紅細胞血型系統。ABO血型系統是人類紅細胞血型系統中抗原性最強，臨床輸血中最重要的血型系統。經對廣州地區獻血人群ABO血型的統計分析發現本地區獻血人群血型構成比為O型(40.95%)>A型(26.98%)>B型(25.28%)>AB型(6.76%),這與武漢[5]、福州[6]等南方城市的基本一致，洛陽就以B型(43.75%)最多[7]。這符合中國人ABO血型基因分布典型特征，中國南方人群有較高的O基因頻率，北方則有較高的B基因頻率[8]。

2016-2019年廣州地區1 412 960份獻血中共出現血型錯誤2 148份，Ⅰ類血型錯誤1 328份(1 328/2 148,61.82%)成為主要原因,提示外采血型篩查的質量控制應該得到足夠重視，關鍵控制點、人員培訓等需要嚴格執行并持續改進。本研究結果顯示，此類錯誤有逐年減少的趨勢。作者認為可能原因有:(1)當次獻血者人數多，導致外采人員縮短ABO正定型的檢測時間，被測者血球與抗血清反應時間不足；(2)抗血清長時間在室外導致效價降低；(3)末梢血量少導致錯判；(4)冬天時外采點溫度過冷導致冷凝集；(5)外采人員責任心不足，新上崗外采人員錯判。ABO亞型是人類A、B、O和AB這4種血型之下細分的一種血型，亞型必須有遺傳基礎，而且有明確的血清學特點[9]。Ⅱ類血型錯誤有820份(占總血型錯誤的38.18%),Ⅱ類血型錯誤總發生頻率為0.058%(820/1 412 960)，高于洛陽的0.021%[7]，低于劉二雄等[10]報道的0.131%，存在地區差異。Ⅱ類血型錯誤標本進行系統血清學或者基因型的確認，其中ABO亞型147例，以B亞+AB亞(91/147,61.90%)最多，檢出不規則抗體陽性283份，其他為抗原或抗體減弱、冷凝集等也是造成血型錯誤的原因。據報道，我國B亞型明顯多于A亞型，各種AB亞型的檢出率高于期望值，A、B基因存在相互作用[11]。由于工作量及試劑的限制，本研究未對不規則抗體陽性標本進行細分檢測，不規則抗體的產生可能與多次或大量輸血、妊娠等有關，其分布具有多態性和復雜性特點，而且導致血型鑒定和配型困難，引起溶血性輸血反應及新生兒溶血病，嚴重的還可以導致自身免疫溶血性疾病(AIHA)[12]，所以為保證輸血安全，采供血機構應對不規則抗體的檢測給予足夠的重視。

Rh血型系統是紅細胞最復雜的血型系統之一，在臨床輸血工作中的重要性僅次于ABO血型系統。Rh 血型系統中最重要的抗原有5 種,分別是：C、c、D、E、e抗原，其中以RhD抗原的免疫原性最強，一旦產生免疫應答，會引起非常嚴重的輸血反應、自身免疫性溶血貧血癥和新生兒溶血癥等疾病[1,13]。本研究結果顯示，廣州地區獻血人群Rh陰性有5 727份(0.41%),高于武漢[5]的0.38%；Rh陰性表型以ccdee為主(51.65%)，RhD變異型也發現156份。RhD變異型是近年國內外研究比較熱的一個項目，不斷有新的RhD變異型的發現，國外研究比較成熟，有一套完善的RhD變異型患者(特別是妊娠婦女)的輸血程序[14]，國內相關研究報道中國人群中越來越多的RhD變異型等位基因被發現[2,15]。本中心也在相關研究中不斷發現新的基因型并且對部分變異型進行深入研究，如國內首次發現并進行全面研究的RHD*960A[1]，弱D72[3]、弱D25[16]等的深入研究，給臨床應用提供了理論支持。另外，通過精準的血型檢測與研究，能將詳細的資料告知獻血者，可更好地為獻血者服務。

綜上所述，通過回顧性分析本地區獻血人群ABO和Rh血型，不但為本地人類遺傳學積累有關數據，而且可系統地了解獻血者的ABO構成，血型錯誤的主要原因，可更好地為本中心獻血招募和持續改進提供依據，并不斷提高獻血服務質量。