海南地區妊娠期高血壓疾病患者母胎LMP和HLA-DM基因共享率研究

韓貞艷 陳建林 關紅瓊

妊娠期高血壓疾病是一種常見的妊娠期疾病，嚴重影響孕婦和胎兒的身體健康，也是孕產婦和圍生兒發病和死亡的主要原因之一。妊娠期高血壓疾病的發生有特殊的遺傳學和免疫遺傳學因素[1]。研究發現，人類白細胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)特異性的基因表達與妊娠期高血壓的發生具有密切的關系[2]。巨大多功能蛋白酶體(large multifunctional protease，LMP) 在物理圖譜上與HLA 基因連鎖，其表達產物參與HLA 抗原加工遞呈。研究發現LMP和HLA-DM與孕婦重度子癇前期發生有關，且夫妻間的基因共享與疾病發生具有顯著關系[3]。也有研究發現，母胎共享LMP基因與重度子癇前期有關[4]。但是，母胎LMP和HLA-DM基因共享與妊娠期高血壓疾病發生是否存在關聯尚無定論。不同地區人群存在基因多態性，基因表達存在一定的差異[5]。本研究針對海南地區妊娠期高血壓疾病患者母胎LMP和HLA-DM基因共享率進行了相關研究，期望為臨床診斷和治療提供幫助。對于基因篩查，早期疾病預防具有重要的臨床意義。

對象與方法

一、研究對象

選擇2016年8月—2018年8月在海南醫學院第二附屬醫院產科住院分娩的妊娠期高血壓疾病母胎共60對，所有患者依據《妊娠期高血壓疾病診治指南(2015)》[6]確診為妊娠期高血壓疾病。年齡(26～42)歲，平均年齡(30.1±3.2)歲，平均分娩孕周(35.4±3.7)周。排除糖尿病、慢性高血壓及嚴重心腦血管疾病病史，精神障礙類疾病史，存在不良生活習慣(如吸煙、酗酒、濫用藥物)。另外選擇在同期本院分娩的正常產婦和胎兒200對作為對照組，年齡(23～40)歲，平均年齡(28.6±5.2)歲，平均分娩孕周(36.31±2.88)周。兩組研究對象一般基本資料沒有統計學差異(P>0.05)。

二、研究方法

1. DNA提取與保存:所有研究對象進行血樣采集，用EDTA抗凝采血管抽取孕婦靜脈血2 mL及胎盤娩出前臍靜脈血2 mL，離心分離血漿，采用酚/氯法提取外周血白細胞DNA。

2.基因檢測:首先進行PCR 擴增:引物設計、PCR反應條件如表1所示。PCR擴增后進行基因測序。

3.基因分型及母胎共享測定:采用LMP和HLA基因數據庫，通過Utype分型軟件對測序峰圖進行序列分析確定基本基因型。母胎同時存在相關的LMP和HLA基因型即可認定為母胎共享。

表1 HLA-DM、LMP各位引物、探針序列及檢測方法Table 1 HLA-DM, LMP primers, probe sequences and detection methods

結 果

一、妊娠期高血壓疾病患者與對照組母胎共享HLA-DM和LMP各基因型數量比較

通過比較妊娠期高血壓疾病患者和正常產婦母胎共享HLA-DM和LMP各基因型數量，結果發現，當HLA-DM為2個共享時，妊娠期高血壓疾病組比例明顯高于正常組，具有顯著性差異(P<0.01)。當LMP為4個共享時，妊娠期高血壓疾病比例明顯高于正常組，差異有統計學意義(P<0.01)，具體見表2所示。

表2 妊娠期高血壓疾病患者與對照組母胎共享HLA-DM和LMP各基因型數量比較[例(%)]Table 2 Comparison of the number of HLA-DM and LMP genotypes between women with pregnancy-induced hypertension and controls[n(%)]

二、HLA-DM各位點基因型在兩組母胎間共享率比較

通過比較HLA-DM各位點基因型在兩組母胎間共享率，結果發現，在HLA-DMB* 0103位點妊娠期高血壓疾病組患者基因共享率最高，與對照組比較具有顯著性差異(P<0.05)。其余位點共享率沒有顯著性差異(P>0.05)，如表3所示。

表3 HLA-DM各位點基因型在兩組母胎間共享率比較[例(%)]Table 3 Comparison of the sharing rate of HLA-DM each genotype between women with pregnancy-induced hypertension and controls[n(%)]

三、LMP各位點基因型在兩組母胎間共享率比較

妊娠期高血壓疾病患者LMP2-R/H基因型共享率明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。其他LMP各位點基因共享率沒有統計學差異(P>0.05)，如表4所示。

表4 LMP各位點基因型在兩組母胎間共享率比較[例(%)]

討 論

妊娠期高血壓疾病屬于孕婦常見的高危疾病，是孕產婦死亡的主要原因之一。妊娠期高血壓疾病與基因相關。眾所周知，胎兒攜帶一半父親基因，妊娠的正常需要依賴于母體的免疫耐受。在妊娠過程中，基因共享率越高，母胎相容性越大，那么, 母體就不能識別胚胎抗原，就不能產生封閉抗體, 胚胎得不到封閉抗體的保護而遭到了排斥, 即產生病理妊娠, 如:流產、不孕、子癇前期、早產等。因此，研究母胎基因共享率，對于早期預防和診斷孕婦相關疾病具有重要的意義。

HLA-DM是早期發現的一個基因位點，具有維持未裝載抗原肽的空MHC-II類分子的穩定。同時具有促進MHC-II類分子相關穩定和鏈胎的釋放、增強CD4細胞識別和延長抗原肽暴露時間[7]。近年研究發現HLA-DM與子癇前期的發生具有一定關系。朱薏[8]等研究發現，子癇前期夫婦雙方共享2個HLA-DM等位基因，子癇前期比例明顯升高，說明HLA-DM夫婦基因共享與子癇前期發病存在一定關系。但是，HLA-DMA和HLA-DMB的基因共享率與妊娠期高血壓疾病的關系尚不得知。本研究結果發現，妊娠期高血壓患者存在HLA-DM為2個共享的比例更高，同時HLA- DMB* 0103位點的比例也高于正常人，說明如果存在HLA-DM共享且超過2個以上，孕婦出現妊娠期高血壓發病的風險較高。同時，HLA-DMB* 0103共享率高可能與妊娠期高血壓疾病發病存在密切關系。

LMP基因是一種能夠加工抗原酶體的亞基，位于人的第6對染色體上的MHC區域上。編碼兩個活性蛋白LMP2和LMP7。LMP基因使不同個體對同一抗原的免疫應答表現出個體差異，或保護性免疫傾向，或免疫耐受傾向，或自身免疫傾向[9]。張嵩卉[10]等研究發現，LMP基因多態性及其在母胎間共享與子癇前期有顯著關聯。但沒有文獻報道LMP基因與妊娠期高血壓疾病的關系。本研究發現，當LMP為4個共享時，妊娠期高血壓疾病比例顯著高于正常組。同時，妊娠期高血壓疾病患者LMP2-R/H基因型共享率顯著高于對照組。在妊娠期高血壓母胎存在LMP基因共享的比例較高，與妊娠期高血壓疾病發病存在一定的關系。

綜上所述，海南地區妊娠期高血壓疾病發病與母胎HLA-DM和LMP共享率具有一定的關系，母胎HLA-DM、LMP基因共享率高對妊娠期高血壓疾病的發病率有重要影響。