抑瘤素M、Id?1、Foxp3在胃癌組織中的表達及與病理特征的相關性

黃莎莎 韓崢 譚潔 劉蒙 田霞

武漢大學附屬同仁醫院（武漢市第三醫院）消化內科（武漢430060）

胃癌是臨床常見的消化系統惡性腫瘤，具有高發病率、高病死率的特點，被列為十大惡性腫瘤首位［1-2］。據相關流行病學調查數據顯示，我國胃癌發病率一直居高不下，每年新增病例連年上升［3］。中老年人群為胃癌發病主要人群，但是近年來我國胃癌患者年齡逐漸趨于年輕化，引起廣大專家學者的重視［4］。胃癌發病早期無特異性、明顯臨床癥狀，難以引起患者重視，致使胃癌癥狀早期診斷率較低，確診時病情已出現惡化現象，導致治療難度變大，患者預后較差，因此早診斷、早治療對胃癌患者臨床治療以及預后改善具有重要意義［5-6］。本研究中對胃癌患者手術切除癌組織標本中抑瘤素M、Id?1、Foxp3 表達進行檢測，旨在探究抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在胃癌組織中的表達及與病理特征相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年6月?2020年6月于我院進行手術治療的胃癌患者72 例，包括男46 例，女26 例，年齡45 ～67 歲，平均年齡（56.2±8.9）歲。72例胃癌患者包括Ⅰ期患者26例，Ⅱ期患者27 例，Ⅲ期患者11 例，Ⅳ期患者8 例；漿膜內浸潤患者47 例，漿膜外浸潤患者25 例；淋巴結轉移情況：淋巴結轉移患者27 例，無淋巴結轉移患者45 例；癌組織分化程度：高分化41 例，中分化22 例，低分化9 例。本研究所有患者及家屬均知情同意，并獲我院倫理委員會批準。納入標準：所有患者均符合中華醫學會對胃癌的診斷標準［7］，無手術禁忌癥，均接受手術治療。排除標準：（1）病歷資料不全者；（2）心、肝、腎、肺等功能不全者；（3）3 個月內接受過相關治療者；（4）并發其他消化系統疾病患者；（5）接受過放化療治療患者。

1.2 方法

1.2.1 標本采集、免疫組化染色手術切除胃癌患者癌組織、距癌組織5 cm 癌旁組織制作標本，4%中性福爾馬林固定、石蠟包埋，厚度3 μm，連續切片作免疫組化標記。待測標本脫蠟、水化處理后浸泡于0.01 mol/L、95 ℃枸櫞酸緩沖液中，3%H2O2環境下培育10 min，滴入山羊血清，26 ℃環境中培養30 min，抽離封閉液、添加一抗，5 ℃環境過夜培養，次日加入二抗，37 ℃恒溫箱中培養0.5 h，清洗后進行DAB 顯色、封片。

1.2.2 抑瘤素M、Id?1、Foxp3相對表達量檢測使用Western blot 法檢測。提取50 μg 蛋白，煮沸5 min使蛋白變性后用SDS?PAGE 凝膠電泳，然后依據蛋白分子大小把凝膠切開并轉移至PVDF 膜上，用Western 封閉液把待測蛋白和內參蛋白封閉90 min在室內，按1∶1 000 加到待測蛋白抗體，內參抗體以1∶2 000 加入抗體，孵育過夜，使用Western 洗滌液洗滌5次，每10 min 1次。按1∶5 000加入稀釋山羊抗兔IgG，孵育60 min 室溫水平搖床，Western 洗滌液洗滌5 次，每10 min 1 次。經過ECL 顯色和曝光后，進行BIO?RAD 成像，使用Image J 圖像分析系統檢測條帶的灰度值，以內參條帶灰度值與蛋白比值為結果統計分析。

1.3 統計學處理使用SPSS 26.0 軟件，計量資料以（）描述，多組對比行F檢驗，組間對比行獨立樣本t檢驗，P＜0.05 具有統計學意義。相關性采用Pearson 相關性分析。

2 結果

2.1 抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在胃癌組織、癌旁組織中的表達對比如表1、圖1、2 所示，與癌旁組織相比，胃癌組織中抑瘤素M、Id?1 相對表達量較高，差異具有統計學意義（P＜0.05）；與癌旁組織相比，胃癌組織中Foxp3 相對表達量較低，差異具有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 抑瘤素M、Id?1、Foxp3 表達與胃癌患者病理特征的關系如表2 所示，與無淋巴結轉移患者相比，有淋巴結轉移胃癌患者抑瘤素M、Id?1 相對表達量較高，Foxp3 相對表達量較低，差異具有統計學意義（P＜0.05）；與漿膜內浸潤患者相比，漿膜外浸潤胃癌患者抑瘤素M、Id?1 相對表達量較高，Foxp3 相對表達量較低，差異具有統計學意義（P＜0.05）；與Ⅰ、Ⅱ期患者相比，Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者抑瘤素M、Id?1 相對表達量較高，Foxp3 相對表達量較低，差異具有統計學意義（P＜0.05）；與高分化患者相比，中分化胃癌患者抑瘤素M、Id?1 相對表達量較高，Foxp3 相對表達量較低；與中分化患者相比，低分化胃癌患者抑瘤素M、Id?1 相對表達量較高，Foxp3 相對表達量較低，差異具有統計學意義（P＜0.05）。

表1 抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在胃癌組織、癌旁組織中的表達對比Tab.1 The expression contrast of oncostatin M，Id?1 and Foxp3 between gastric cancer tissues and adjacent tissues x±s

2.3 胃癌組織中抑瘤素M、Id?1、Foxp3 表達相關性如圖3 所示，對胃癌組織中抑瘤素M、Id?1、Foxp3 表達相關性進行分析。胃癌組織中抑瘤素M、Id?1 表達呈正相關（r= 0.310，P= 0.008）；胃癌組織中抑瘤素M、Foxp3 表達呈負相關（r=-0.422，P= 0.001）；胃癌組織中Id?1、Foxp3 表達呈負相關（r=-0.308，P=0.009）。

圖1 抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在癌旁組織中表達免疫組化染色圖Fig.1 Immunohistochemical staining of tumor suppressor m，Id?1 and Foxp3 in paracancerous tissues

圖2 抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在癌組織中表達免疫組化染色圖Fig.2 Immunohistochemical staining of tumor suppressor m，Id?1 and Foxp3 in cancer tissue

3 討論

臨床醫學將發生于機體胃粘膜組織的惡性腫瘤統稱為胃癌，具有發病率高、惡性程度高、治療難度大、病死率高的特點。世界衛生組織調查數據顯示，胃癌發病率、病死率均高居所有惡性腫瘤前兩位［8-9］。目前胃癌發病機制尚未明確，有研究表示，家族遺傳、生活環境、癌前病變、飲食習慣等均為胃癌發病危險因素［10］。胃癌患者發病早期無明顯臨床癥狀，早期診斷率較低，隨著病情的不斷發展和惡化，胃癌患者主要臨床表現為上腹部疼痛、不適、消化道出血、貧血、消瘦等，嚴重影響患者身體健康和生活質量，而此時臨床治療難度大幅提升，對患者臨床治療和預后造成嚴重影響［11-12］。因此，越來越多的專家學者開始通過分子生物學、基礎醫學等途徑對胃癌發病機制進行研究［13-14］。

作為一種多功能細胞因子，抑瘤素M 是IL?6細胞因子家族的重要組成成員，主要由機體巨噬細胞、T 細胞、中性粒細胞等分泌產生，在細胞多種生物學行為中均具有重要作用［15-16］。有研究表示，抑瘤素M 與其受體相結合，介導信號傳導，對細胞增殖、生長等生物學行為以及機體炎癥反應、免疫系統變化以及細胞外基質重塑中均具有重要作用。近年來，越來越多的學者致力于抑瘤素M表達變化與惡性腫瘤發生發展相關性的研究。有研究表示，抑瘤素M 在不同惡性腫瘤組織中具有不同的作用，在宮頸癌、卵巢癌等婦科惡性腫瘤中，抑瘤素M 能夠促進癌細胞增殖、侵襲，對疾病發展起到促進作用，但是關于抑瘤素M 表達變化與胃癌發生演進相關性的研究還鮮有報道。本文研究結果顯示，相比癌旁組織，胃癌癌組織中抑瘤素M 相對表達量較高，說明抑瘤素M 在胃癌中呈現異常高表達，可能參與胃癌的發生發展。本文研究還發現，有淋巴結轉移、漿膜外浸潤、Ⅲ、Ⅳ期、低分化胃癌患者抑瘤素M 相對表達量較高，這一研究結果說明抑瘤素M 表達變化與胃癌組織淋巴結轉移、浸潤程度、病理分期、分化程度等臨床特征具有一定的相關性，參與胃癌的發生演進過程因此，抑瘤素M 能夠作為胃癌潛在的診斷指標和治療靶點，為胃癌癥狀的診斷、臨床治療提供新的研究方向。

表2 抑瘤素M、Id?1、Foxp3 表達與胃癌患者病理特征的關系Tab.2 Relationship between expression of oncostatin M，Id?1 and Foxp3 and pathological features of gastric cancer patients x±s

圖3 胃癌組織中抑瘤素M、Id?1、Foxp3 表達相關性Fig.3 Correlation between expression of oncostatin M，Id?1 and Foxp3 in gastric cancer

Id?1 是DNA 結合抑制因子家族的重要組成成員［17-18］。有研究表示，Id?1 具有永生性基因的特性，具有調控細胞增殖、分化、周期分布的作用。大量實驗研究表示，Id?1 在肝癌、乳腺癌等惡性腫瘤中呈現異常高表達，并且其表達變化與癌組織分化程度具有一定相關性［19-20］。本文研究結果顯示，相比癌旁組織，胃癌癌組織中Id?1 相對表達量較高，說明Id?1 在胃癌中呈現異常高表達，可能參與胃癌的發生發展。本文研究中還對Id?1 在不同臨床病理特征胃癌中的表達進行比較，結果發現，有淋巴結轉移、漿膜外浸潤、Ⅲ、Ⅳ期、低分化胃癌患者Id?1 相對表達量較高，這一研究結果說明Id?1表達變化與胃癌癌組織淋巴結轉移、浸潤程度、病理分期、分化程度等臨床特征具有一定的相關性，參與胃癌的發生演進過程。因此，本研究認為Id?1可作為胃癌潛在的診斷指標和治療靶點，檢測Id?1表達對胃癌的診斷、臨床治療具有重要意義。

Foxp3 是Fox 家族的重要組成成員，具有調節Treg 細胞生長發育的作用［21-23］。大量研究結果表明，Foxp3 在腫瘤細胞中表達出現異常，因此Foxp3表達變化與腫瘤組織發生發展之間相關性成為許多專家學者的研究方向。有研究表明，Foxp3 在乳腺癌、肺癌等惡性腫瘤中均呈異常表達，其表達變化與癌組織細胞增殖、轉移具有密切聯系［24-25］。本文研究結果顯示，相比癌旁組織，胃癌癌組織中Foxp3 相對表達量較低，說明Foxp3 表達變化參與胃癌的發生發展。本文研究還發現，有淋巴結轉移、漿膜外浸潤、Ⅲ、Ⅳ期、低分化胃癌患者Foxp3相對表達量較低，這一研究結果說明Foxp3 低表達與胃癌癌組織淋巴結轉移、浸潤程度、病理分期、分化程度等臨床特征具有一定的相關性，參與胃癌的發生演進過程，Foxp3 能夠作為胃癌潛在的診斷指標和治療靶點，為胃癌癥狀的診斷、臨床治療提供了新的研究方向。

本文研究還對抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在胃癌組織中表達相關性進行研究，結果顯示，抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在胃癌組織中具有一定相關性，說明抑瘤素M、Id?1、Foxp3 可能共同參與胃癌的發展演進。

綜上所述，抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在胃癌中均呈異常表達，三者相對表達量變化與胃癌患者淋巴結轉移情況、浸潤程度、TNM 分期、分化程度相關，三者表達之間具有一定相關性，共同參與胃癌發展演進過程，并且抑瘤素M、Id?1、Foxp3 能夠作為胃癌潛在的診斷指標和治療靶點，為胃癌的診斷、治療提供新的研究方向。