精子質量參數與體外受精結局的相關性*

王家雄，沈麗燕，劉彩釗，王改改，鄭愛燕，孟慶霞，李紅，楊慎敏（南京醫科大學附屬蘇州醫院生殖與遺傳中心，江蘇蘇州215002）

精子形態學分析中精子形態與自然妊娠、輔助生殖結局以及胚胎質量相關［1-2］。臨床對于男性生育力的診斷不能僅僅局限于一個指標，如果患者的精子總數較高，即使正常形態精子百分率低，但是正常形態精子總數也未必異常。因此，我們認為正常形態精子總數、前向運動精子總數及正常形態前向運動精子總數比單一的百分率指標可能更有潛力成為較好的預測男性生育力的參數。在本研究中，我們統計比較了精子活動率、前向運動精子百分率、正常形態精子百分率、前向運動精子總數、正常形態精子總數及正常形態前向運動精子總數對體外受精（in vitro fertilization，IVF）結局的預測能力差異，從而為臨床提供更佳的診斷和預測指標。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取2018年1月至2019年12月于我院生殖與遺傳中心進行輔助生殖治療的患者共計2 768例，女方年齡23～51歲，平均31歲；男方年齡22～65歲，平均32歲。納入標準：（1）第一個治療周期；（2）促排卵方案為標準方案或常規長方案；（3）女方年齡小于35歲；（4）雙方均沒有染色體異常，女方因單純輸卵管因素就診。排除標準：（1）女方存在子宮、卵巢等生殖系統疾病；（2）雙方體重指數（body mass index，BMI）存在異常（＞23 kg/m2或＜18.5 kg/m2）；（3）女方存在遺傳缺陷、慢性疾病等。本研究經醫院倫理委員會批準通過（倫理審查號K2017028），患者均知情同意。

1.2 儀器與試劑 計算機輔助精液分析系統（computer-aided semen analysis system，CASA）（上海北昂醫藥科技公司）；改良巴氏染色液（南京欣迪生物公司）；重組人絨毛膜促性腺激素（hCG，英國默克雪蘭諾公司）。

1.3 方法

1.3.1 標本采集 患者禁欲2～7 d后來我院男科實驗室手淫取精，精液37℃保存。如多次采集，數據來自取卵前最后一次精液檢測結果。

1.3.2 精液常規與精子形態學分析 待精液完全液化后，用CASA進行精液常規分析，記錄精液量、精子總數、精子濃度、精子活動率、前向運動精子百分率等結果。按照《人類精液檢查與處理實驗室手冊》（第5版）要求，制備精子涂片，采用改良巴氏染色液對精子涂片進行染色后，用光學顯微鏡觀察并記錄精子頭部異常、中段異常、主段異常和正常形態精子百分率。通過精液量、精子濃度、前向運動精子百分率和正常形態精子百分率計算前向運動精子總數、正常形態精子總數及正常形態前向運動精子總數。整個檢驗過程均由富有經驗的檢驗人員操作，并嚴格進行質控。

1.3.3 輔助生殖 對患者的妻子執行標準方案或常規長方案促排卵。當優勢卵泡直徑≥18 mm時，肌肉注射250μg hCG，注射后34～36 h行陰道B超穿刺取卵，取卵后4～6 h與經密度梯度離心處理后的精子一起溫育直至受精。

1.4 統計學分析 采用SPSS19.0進行數據分析。呈正態分布的計量資料以±s表示。精子活動率、前向運動精子百分率、正常形態精子百分率、正常形態精子總數、正常形態前向運動精子總數、前向運動精子總數與IVF的受精率、種植率、優質胚胎率的相關性采用Pearson相關性分析；精子活動率、前向運動精子百分率、正常形態精子百分率、前向運動精子總數、正常形態精子總數、正常形態前向運動精子總數正常與異常組活產率的差異采用卡方分析；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般資料 通過納入、排除標準的夫婦一共546對，男方精液參數與IVF結局參數見表1。

表1 546對不育夫婦男方精液參數結果及IVF結局（±s）

表1 546對不育夫婦男方精液參數結果及IVF結局（±s）

參數 結果精液量（mL） 3.22±1.36精子濃度（×106/mL） 55.88±37.62精子活動率（%） 53.35±18.53前向運動精子百分率（%） 44.23±16.93前向運動精子總數（×106） 80.89±69.14正常形態精子百分率（%） 3.47±2.37正常形態前向運動精子總數（×106） 2.89±3.86正常形態精子總數（×106） 5.81±6.32受精率（%） 60.44±22.95種植率（%） 70.02±37.44優質胚胎率（%） 90.64±48.87臨床妊娠率（%） 88.28

2.2 精子質量參數與IVF結局的關系 對546對夫婦男方正常形態精子百分率、正常形態精子總數、正常形態前向運動精子總數、精子活動率、前向運動精子百分率、前向運動精子總數與IVF結局進行相關性分析顯示，正常形態精子百分率與受精率、種植率、優質胚胎率無相關性（P＞0.05），而精子活動率、前向運動精子百分率與受精率呈正相關（r分別為0.092、0.093，P＜0.05），正常形態精子總數、前向運動精子總數與受精率呈正相關（r分別為0.159、0.498，P＜0.01），與優質胚胎率亦呈正相關（r分別為0.157、0.119，P＜0.01），僅正常形態前向運動精子總數與受精率、種植率和優質胚胎率均呈正相關（r分別為0.201、0.196、0.112，P＜0.01）。

2.3 精子質量參數與妊娠結局的關系 正常形態精子總數、正常形態精子百分率、正常形態前向運動精子總數、精子活動率、前向運動精子百分率、前向運動精子總數正常與異常組經卡方檢驗分析，臨床妊娠率差異無統計學意義，見表2。

表2 精子質量參數與臨床妊娠率的關系

3 討論

精子形態對精子功能起著至關重要的作用，因此精子形態的觀察被認為是對精子質量最為直觀的反映［3］。對于精子形態的評估標準不斷在改進和發展，上世紀90年代Menkveld和Kruger開發了嚴格標準的形態學評定系統，曾一度被廣泛使用［4］。之后WHO推出了基于該標準的評定準則，將正常形態精子百分率參考值定為4%［5］。但對于WHO第5版4%的參考值，許多研究者都持保留意見，Jensen等［6］通過統計發現許多患有不同男性生殖系統疾病的不育患者正常形態精子百分率卻都大于4%。而van den Hoven等［7］通過統計發現，正常形態精子百分率從1984年的大約30%～80%下降到2004年后的0%～10%，但這種下降主要歸因于形態學評估標準的變化，對輔助生殖結局沒有預測作用。

目前越來越多的專家學者傾向于多因素聯合判斷精子質量，而非僅僅依賴一項檢測的一個數值［8］，或納入新指標，如精子DNA完整性［9］。如果精子總數夠多，即使正常形態精子百分率低，但是正常形態的精子仍然是一個龐大的數量，也足以完成受精的任務。也有研究者發現運動精子總數要比單獨的精子濃度、精子活動率對生育力有更好的指導作用［10］。因此，我們認為正常形態精子總數會比相應的百分率更為可靠和具有臨床意義，而如果加入前向運動精子百分率，采用正常形態前向運動精子總數預測效果可能更好，分析結果證實了推論，前向運動精子總數和正常形態精子總數與IVF受精率和優質胚胎率呈正相關（P＜0.01），僅正常形態前向運動精子總數與受精率、種植率和優質胚胎率均呈正相關（P＜0.01）。但我們同時發現，這些參數對于臨床妊娠率沒有預測作用，可能是因為影響臨床妊娠率的因素較多，其中女方因素影響更大。

本研究仍存在一些不足，如樣本量有限、檢測指標尤其是正常形態精子百分率的結果可能仍有偏差，可能會導致分析結果出現偏移。另外，我們未使用精液優化處理后的精子參數與妊娠結局進行相關性分析，優選前后精子質量的差異如何，將是未來需要研究的內容之一。