超高效液相色譜串聯質譜法測定土壤中的磺胺類、喹諾酮類和四環素類抗生素

（廣州華鑫檢測技術有限公司，廣東廣州 510663）

0.引言

磺胺類、喹諾酮類和四環素類抗生素被廣泛用于人和動物疾病的預防和治療，發揮了巨大作用。但是由于長期不合理的使用，大量的抗生素不能完全代謝，隨糞便和尿液排放到環境中[1]。低濃度的抗生素長期排入環境中，會使敏感菌產生抗藥性，抗藥基因在環境中不斷演化，對生態環境及人類健康造成潛在威脅。除了能引起細菌的抗藥性外，有的抗生素通過食物鏈富集后影響人體健康[2-4]。

因此建立同時檢測環境土壤中常見的磺胺類、喹諾酮類和四環素類抗生素的方法很有必要。本研究通過優化檢測條件和前處理方法，建立了同時測定土壤中8種磺胺類、喹諾酮類和四環素類抗生素的超高效液相色譜串聯質譜分析方法。

1.材料與方法

1.1 儀器與試劑

1290-6470A超高效液相色譜串聯質譜儀(Agilent公司)；超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器公司)；高速冷凍離心機(赫西儀器公司)；氮吹儀；固相萃取裝置；HLB小柱和SAX小柱(200mg/6ml,安譜公司)。

甲醇、乙腈(色譜純，MREDA公司)，超純水，其他試劑均為分析純。

標準品：環丙沙星、恩諾沙星、磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹噁啉、土霉素、四環素。

1.2 樣品前處理

稱取1.0g土壤樣品，加入0.4g EDTA和10ml體積比1+1的乙腈―磷酸鹽溶液(pH=3.0)，振蕩5min，超聲10min，4℃下10000rpm離心5min，收集上層提取液。重復提取1次，合并提取液，用氮氣吹至10ml左右，用水稀釋至100ml，用甲酸調節pH=3.0。SAX-HLB串聯固相萃取柱預先用6ml甲醇、水活化，將提取液上樣。用6ml水淋洗，棄去SAX小柱，擠干HLB小柱，用5ml甲醇洗脫，收集洗脫液，氮吹近干，加入1ml乙腈-0.2% 甲酸水溶液(1:9)溶解殘渣，過0.22μm有機相濾膜后上機分析。

1.3 液相色譜-質譜條件

C18柱（2.1×50 mm 1.8μm），流動相為0.1%甲酸溶液(A)和乙腈(B)，流速0.3ml/min，柱溫 35℃；梯度洗脫程序：0min～2.5min，10%～15% B；2.5min～5.0min，15% ～ 50% B；5.0min～ 5.5min，50% ～ 95% B；5.5min～6.5min，95% B；6.5min～8.0min，95%～10% B。

AJS電噴霧離子源；正離子模式；干燥氣流量：6 L/min，霧化氣壓力：45psi，鞘氣流速：11L/min，鞘氣溫度：300℃，干燥氣溫度：350℃；毛細管電壓4000V；MRM掃描模式，各化合物質譜參數見表1。

表1 待測抗生素的質譜檢測參數

2.結果與討論

2.1 流動相的選擇

分別比較了0.1%甲酸溶液、甲醇和乙腈的流動相組成，結果表明采用0.1%甲酸溶液和乙腈作為流動相，峰形和響應更好，8種抗生素的TIC譜圖如圖1所示。

圖1 8種抗生素的TIC譜圖

2.2 前處理條件優化

土壤中存在大量以陰離子形式存在的腐殖質，在質譜分析中會嚴重干擾抗生素的測定。在HLB柱前串聯SAX強陰離子交換柱，能有效吸附帶負電的腐殖質，降低基質效應[5]。

溶液的pH值會影響目標抗生素在HLB柱上的吸附效果。用甲酸調節pH值為1.0～7.0，考察回收率情況。結果表明，當pH=3.0時，3類抗生素綜合的回收率最佳。

2.3 方法學確認

（1）線性范圍和檢出限用空白提取液配制成濃度為1.0ng/ml～1000ng/ml的基質標準溶液，進行測定。8種抗生素的線性關系良好，相關系數在0.990～0.997，各化合物的檢出限見表2所示。

（2）方法的回收率往空白土壤樣品中添加濃度為10和50μg/kg的混合標準溶液進行回收率實驗，計算各抗生素的方法回收率如表2所示。

表2 檢出限、加標回收率和精密度實驗結果（n=6）

3.結語

建立了固相萃取-超高效液相色譜串聯質譜法測定土壤中的8種磺胺類、喹諾酮類、四環素類抗生素的分析方法。該方法靈敏度高、回收率和精密度較好，適合應用于土壤樣品中抗生素的測定。