半邊紅李炭疽病病害調查及病原菌鑒定

王 群，畢云青，何成興，郭志祥，鐘德衛，李君洪，陳乾昭，游繼華，黃正會，李進斌

（1云南省農業科學院農業環境資源研究所，昆明 650205；2云南省昭通市綏江縣農業農村局農技推廣中心，云南綏江 657700；3綏江縣漁業技術服務站，云南綏江 657700）

0 引言

李子(Prunussalicina)是薔薇科李屬植物，其果實含有豐富的營養成分，且酸甜可口，從而深受廣大消費者的喜愛[1]。半邊紅李(P.salicina‘Banbianhong’)在綏江已有70余年種植歷史，種植面積已超過5400 hm2，是綏江縣的主要支柱產業。由于其優良的品質及較高的經濟價值，現被引種到昭通多個縣區以及四川、重慶、貴州、江西等省份。但隨著種植面積的不斷擴大，綏江半邊紅李病害每年都有發生。主要的病害有炭疽病、紅點病、褐腐病和穿孔病等，其中炭疽病尤為嚴重。炭疽病病菌主要為害葉片、嫩芽及果實，會導致葉片腐爛、枯萎以及果實掉落，嚴重的時候影響李子的生長和產量。

炭疽病的病原菌為炭疽菌屬Colletotrichum真菌，種類十分的復雜繁多，在全球范圍均有分布，寄主十分廣泛，涉及糧食、經濟、果樹、花卉、蔬菜等重要作物[2-3]，對作物生產安全造成重要影響。自19世紀30年代Corda建立炭疽菌屬以來[4]，其分類一直較混亂。炭疽菌屬發展的初期，分類依據以寄主范圍為主，750個新種被描述[4]，導致了許多異名同物的出現。20世紀50年代，Arx J.von對所報道的絕大多數真菌標本作了細微的觀察與比較后，主要依據寄主上病原菌孢子、產孢細胞等顯微形態特征，并結合純培養特征等將750余種合并為11個種[5]。由于Arx分類系統中種的范圍太大，導致了同名異物的出現，實際運用非常不便。20世紀八、九十年代，Sutton在Arx系統的基礎上，以純培養物上產生的分生孢子和附著孢形態特征、大小為主，結合純培養物特征和寄主范圍，把Arx系統中的11個種擴展到39個種，其中包含了部分復合種，如C.gloeosporioides、C.acutatum和C.dematium[3,6]。Sutton的分類系統普遍得到了真菌研究者的認可，但該分類系統中許多形態相似的種仍然難以區分。因此，炭疽菌的分類鑒定一直是菌物學家的研究熱點。近年來，分子生物學技術對炭疽菌屬的分類鑒定方法產生了重要的影響，屬下分類單元也不斷增加。目前該屬的分類主要包括膠孢炭疽復合群C.gloeosporioidesspecies complex、博寧炭疽復合群C.boninensespecies complex、尖孢炭疽復合群C.acutatumspecies complex、暹羅炭疽復合群C.siamensespecies complex、長直孢炭疽復合群C.gigasporumspecies complex、禾生炭疽復合群C.graminicolaspecies complex、圓孢炭疽復合群C.orbicularespecies complex、平頭炭疽復合群C.truncatumspecies complex、白蠟樹炭疽復合群C.spaethianumspecies complex、毀滅炭疽復合群C.destructivumspecies complex、束狀炭疽復合群C.dematiumspecies complex和尾狀炭疽復合群C.caudatumspecies complex等12個復合群和部分獨立種[7-16]。真菌rDNA由18S、5.8S、28S三個亞基組成，三亞基之間的內轉錄間隔區(Internal transcribed spacer，ITS)是核糖體DNA(rDNA)上的非編碼區。18S、5.8S及28S rDNA序列進化緩慢且相對保守，但3個基因序列之間的ITS序列則進化相當迅速，因而核糖體rDNA序列廣泛用于真菌各級水平的系統學研究[17-18]。ITS區具有鑒定范圍最廣、成功率最高及種內、種間變異具有最清晰明確的條形碼間隔等特點，可作為通用的真菌條形碼標記[19]。ITS序列分析現已廣泛應用于炭疽菌、疫霉菌、銹菌等植物病原真菌的分類和系統發育的研究。因此，炭疽菌ITS序列對種及種以下的劃分具有一定的意義[20-21]。

國內外對李樹炭疽病病原菌鑒定研究較少。根據病原菌形態、培養特性和致病性，布朗李(P.americana)炭疽病菌有性世代鑒定為Glomerella cingulata，無性世代為C.gloeosporioides[22]。利用形態學和分子系統學，韓國研究者從日本李(P.salicina)果實上分離鑒定了4種炭疽菌，分別屬于膠孢炭疽復合群中的C.gloeosporioidessensu stricto(s.s.)、暹羅炭疽復合群中的C.siamense、尖孢炭疽復合群中的C.nymphaeae和C.foriniae[23]，其中C.siamense和C.foriniae首次在李炭疽病中報道。國內對李樹(P.salicina)產區的炭疽菌種類還未見報道。本研究對綏江縣半邊紅李炭疽病的為害進行了初步調查，并對其病原菌進行了采集、分離，結合致病性測定、純培養物上產生的分生孢子形態特征及核糖體ITS序列對其進行初步鑒定，為李樹炭疽病的診斷及防治提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試劑及實驗地點

CTAB購自Sigma公司；ITS引物合成自上海生工公司；2×Taq PCR Master Mix試劑、Marker DL2000，購自天根生化科技（北京）有限公司；DNA回收試劑盒，購自北京百泰克公司；其他試劑均為國產分析純。病害調查于2018年7月云南省昭通市綏江縣半邊紅李主要種植區進行，病原菌分離、培養、鑒定及ITS序列分析實驗均于2018年8月—2019年12月在云南省農業科學院農業環境資源研究所作物病害實驗室進行。

1.2 主要儀器

Sorvall Legend Micro 21R離心機，德國Themo Scientific公司生產；C1000 Touch DNA擴增儀，美國Bio-Rad公司生產；BIO-RAD PowerPacTM Basic電泳儀，美國Bio-Rad公司生產；DYCP-31DN電泳槽，北京六一儀器廠；ChemiDocTM XRS+凝膠成像系統，美國Bio-Rad公司生產；MGC-400B光照培養箱，上海一恒科學儀器有限公司；Nikon 80i顯微鏡，日本Nikon公司生產。

1.3 炭疽病病害調查及標樣的采集

2018年7月，采用5點取樣法分別對云南省昭通市綏江縣半邊紅李2個主要種植區會儀鎮及新灘鎮各3個果園進行炭疽病的病害調查。每點隨機選取5株，每株從東南西北4個方向每個方向隨機采集10片葉片調查病害發病級別。根據病斑面積占葉面積的比例，李子炭疽病病害分級標準參照辣椒炭疽病的0～9級分級標準[24]。分級標準如下：

0級：無病斑；高抗

1級：1%～2%的葉片病斑侵染面積或有一個水浸狀病斑；抗病。

3級：壞死性病斑葉面積＞2%～5%，可能出現分生孢子盤，或5%的葉片出現水浸狀病斑；中抗。

5級：壞死性病斑葉面積＞5%～15%，有分生孢子盤，或25%的葉片出現水浸狀病斑；中感。

7級：壞死性病斑葉面積＞15%～25%，有分生孢子盤；感病。

9級：壞死性病斑葉面積＞25%，有大量分生孢子盤；高感。

發病率和病情指數分別用公式(1)和公式(2)計算[25-26]。

采集炭疽病癥狀典型的發病葉片為標樣，病害標樣在病菌分離前4℃儲存。

1.4 病原菌組織、單孢菌株的分離及分生孢子形態觀察

病原菌組織分離參照楊樹炭疽菌的分離方法[27]。方法如下：健康組織和病變組織交界面切取3個5×5 mm的樣品，用70%乙醇浸泡1 min，然后用1%次氯酸鈉浸泡3～4 min，用無菌水洗滌3次。然后將葉段置于馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養基表面，在25℃下培養。1～2天后將葉段發育的真菌菌絲生長邊緣轉移到新的PDA平板上以供后續研究使用。

單胞分離參照方中達的方法分離[28]。蘸取分生孢子團至無菌水中，稀釋至105孢子/mL，取10 μL上述孢子液均勻涂布在WA（1%水瓊脂）平板上，25℃培養12 h后在光學顯微鏡下挑取萌發的單孢子接種于PDA平板上，5天后觀察菌株菌落及分生孢子形態。各菌株隨機選取10個孢子利用ImageJ軟件測量孢子大小，并計算長度及寬度的比值，采用Duncan’s新復極差測驗進行多重比較。

1.5 半邊紅李炭疽病病原菌致病性鑒定

病原菌致病性鑒定根據柯赫氏法則進行。采集半邊紅李樹健康葉片，自來水清洗葉片表面，再用無菌水沖洗3～4次；將分離的菌株活化后，接種到PDA平板上，25℃培養3天，用直徑為5 mm的無菌打孔器沿菌落邊緣打取菌絲塊，接種到葉片上。對照為直徑5 mm的清水培養基塊。由于炭疽病菌具有潛伏侵染特性且潛伏期較長，采用刺傷法（接種針刺破葉片表皮，但不刺穿葉片）接種，保持濕度90%以上，溫度23℃。接種4天后，移去菌株塊，7天后記錄發病情況。并鏡檢病原菌形態，與分離菌比較。

1.6 半邊紅李炭疽病菌的分子鑒定

1.6.1 菌絲的收集及基因組DNA的提取 菌絲培養：將培養3天的菌株沿菌落邊緣挑取5個菌絲塊，移入裝有80 mL PDB（配方同PDA培養基，但不含瓊脂）的三角瓶中，在100 r/min的搖床上25℃培養5天，4層紗布過濾收集病原菌的菌絲，-80℃保存。用CTAB法提取基因組DNA[29]。

1.6.2 病原菌rDNA基因轉錄間隔區序列(ITS)的PCR擴增及測序 利用真菌ITS通用引物ITS1(5'TCCGTAGGTGAACCTGCGG 3')和 ITS4(5'TCCTCC GCTTATTGATATGC 3')[30]，以病原菌基因組DNA為模板擴增包含ITS1、5.8S rDNA、ITS2、部分18S rDNA和28S rDNA的DNA片段。PCR反應體系為30 μL，包含Mix 15 μL，引物各1 μL，DNA模板1 μL，ddH2O 12 μL，于 DNA擴增儀上進行擴增。PCR擴增反應程序為：98℃預變性3 min；98℃變性10 s，55℃退火10 s，72℃延伸10 s，共35個循環；最后72℃延伸5 min，4℃保存。用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增結果。利用DNA回收試劑盒回收PCR擴增產物，方法參見試劑盒說明書。PCR產物送昆明碩擎生物科技有限公司進行測序，每個反應重復3次。

1.6.3 病原菌ITS片段的序列分析 用LasergenV7.1.0中的seqman軟件對序列進行拼接，并手工校正，兩端進行修剪。將拼接的序列導入Genbank中進行Blast分析，下載同源性高的序列進行比對分析。序列比對在CLUSTAL W 1.81中進行[31]；系統進化分析利用MEGA7.0[32-33]，采用極大似然法構建系統樹。基于Tamura-Nei model的核酸替代模型，各位點間的進化速率為一致，缺失或空位記為完全缺失。

Bootstrap法進行系統樹檢驗，重復次數為1000。

2 結果與分析

2.1 炭疽病病害調查結果

炭疽病危害葉片的癥狀主要有兩類：一類沿葉緣開始發病，病斑由小至大，典型病斑成輪紋狀擴展；另一類病斑多在葉片尖端開始發病，葉片邊緣發病較少，病斑較大，典型的輪紋狀病斑，病斑邊緣紫褐色。炭疽病病害調查結果見表1。由表1可以看出，會儀鎮黃坪村3個果園炭疽病的發病率為20%，病情指數為20.4；新灘鰱魚村3個果園炭疽病的發病率達到50%，病情指數為78.5。同時，從海拔梯度來看，500～700 m海拔危害程度最嚴重，其次是700～900 m海拔，380～500 m海拔發病程度最輕，表明會儀鎮黃坪村和新灘鎮鰱魚村的半邊紅李果園有不同程度的炭疽病危害，其中新灘鎮鰱魚村比會儀鎮黃坪村的危害程度嚴重，不同海拔果園炭疽病的危害程度也不相同。

表1 基于0～9級分級標準的綏江6個半邊紅李果園炭疽病發病率及病情指數

2.2 半邊紅李炭疽病菌形態學鑒定

對綏江縣會儀黃坪鎮黃坪村、新灘鎮鰱魚村半邊紅李果園采集的癥狀典型的炭疽病葉片進行了單孢分離，共獲得15株分離株。根據分生孢子形態，發現4種類型的分生孢子（圖1），其代表菌株分別為18-8-D1、18-4-C2、18-8-C1及18-5-B1。其中18-5-B1菌株的分生孢子梭形，直孢，末端鈍；18-8-C1菌株的分生孢子為圓柱狀，直孢；18-8-D1菌株的分生孢子為彎孢型，端鈍，有3-5隔；18-4-C2菌株的分生孢子為紡錘型，兩端漸尖，2隔，具1-3根附屬絲。平板菌落形態沒有明顯的差異，菌落白色，菌絲生長茂密厚實，菌落背面中心顏色較深，為淡黃色或黑綠色（圖1）。4種分生孢子大小測量結果見表2。表2可以看出，分生孢子長度以菌株18-8-D1最長，達21.94±2.25 μm，其次是菌株18-4-C2；除18-5-B1與18-8-C1長度差異不明顯外，其余菌株間長度差異均達極顯著。分生孢子寬度以菌株18-4-C2最寬，達4.72±0.64 μm，其次是18-5-B1(4.35±0.53)，18-8-D1最窄(2.62±0.52)；除18-4-C2與18-5-B1、18-5-B1與18-8-C1之間寬度差異不顯著外，其余菌株間均達極顯著；分生孢子長寬比以菌株18-8-D1為最大，其中18-8-D1與其他菌株間差異極顯著，其他菌株間差異均不顯著。

圖1 半邊紅李炭疽病菌株18-5-B1、18-8-C1、18-8-D1和18-4-C2菌落及分生孢子形態

表2 云南綏江半邊紅李炭疽病分離菌株分生孢子大小

2.3 李炭疽菌的Korho驗證

根據柯赫氏法則，將分離到的病原菌接種在健康的李樹葉片進行了離體鑒定，部分結果見圖2。回接的鑒定結果表明前述分離到的病原菌均產生了特征明顯的炭疽病病斑，并從病斑上分離獲得與接種相同的病原菌。這個結果說明本研究成功分離到了李炭疽病的致病菌，且分離到的菌株均致病。

圖2 半邊紅李炭疽病分離菌株18-8-C1、18-5-B1接種離體葉片9天后的發病癥狀

2.4 李炭疽病病原菌ITS序列分析

利用真菌通用引物ITS1和ITS4分別擴增了15個菌株的rDNA ITS片段，部分擴增結果見圖3。除去1個菌株沒有擴增產物外，其余14個菌株均成功擴增出了ITS區段。

圖3 部分半邊紅李炭疽病菌分離株ITS引物PCR擴增電泳圖

對4種分生孢子類型的代表菌株18-5-B1、18-8-C1、18-8-D1和18-4-C2的ITS PCR擴增產物進行了測序，在Genbank中對其序列進行了同源性比較(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)，發現這4條序列與炭疽菌屬ITS序列同源性較高。鑒于Genbank中炭疽菌ITS序列數量巨大，物種信息及ITS序列質量難以獲得保障，為了進一步鑒定半邊紅李炭疽菌，選擇經過模式標本和序列質量、長度驗證后重新注釋和格式化后的參考序列（refseq，Genbank中序列前綴為NR-）為主，已發表論文中引用的Genbank序列為輔，下載了12個炭疽菌復合群內的110種、2亞種共139條ITS序列進行系統分析，Genbank序列號見附錄1。下載序列中，膠孢炭疽復合群包括23種2亞種27條序列，博寧炭疽復合群15種15條序列，尖孢炭疽復合群32種37條序列，暹羅炭疽復合群6種11條序列，長直孢炭疽復合群7個種7條序列，禾生炭疽復合群1個種1條序列，圓孢炭疽復合群7個種7條序列，平頭炭疽復合群1種1條序列，白蠟樹炭疽復合群1種1條序列，毀滅炭疽復合群11種11條序列，束狀炭疽復合群1種1條序列，尾狀炭疽復合群5種20條序列。構建的ML系統樹為無根樹（圖4），SBL=0.4998，似然比值(log likelihood=-1744.35)，模型為 TN93，Ts/Tv=2.1680。由圖4可以看出，半邊紅李分離到的4個菌株（18-8-D1、18-4-C2、18-8-C1和18-5-B1）與膠孢炭疽復合群、暹羅炭疽復合群以及一個長直孢炭疽聚在一個分支中，暗示這些菌株與膠孢炭疽復合群和暹羅炭疽復合群親緣關系較近；其余復合群都各自聚為一支，暗示ITS序列可以作為一個很好的分子標記用以區分炭疽復合群之間的關系。菌株18-8-C1與NR120142、18-8-D1與 NR144783、18-4-C2與NR120133及菌株18-5-B1與GQ485601關系較近（圖4），但支持率不高。由附錄1，可知NR120142、NR144783及NR120133分別為膠孢炭疽復合群中的C.clidemiae、C.fructicola及C.aeschynomenes的ITS序列，GQ485601為暹羅炭疽復合群中的C.hymenocallidis的ITS序列。分別將本研究中分離到的菌株分生孢子形態大小及菌落形態與C.clidemiae[15]、C.fructicola[15,34]、C.aeschynomenes[15]、C.hymenocallidis[35]的相比較，發現均存在一些差異。因此，本項研究僅可以初步鑒定綏江半邊紅李炭疽病為膠孢炭疽復合群和暹羅炭疽復合群中的炭疽菌引起，具體種類歸屬有待進一步研究。

圖4 基于4個半邊紅李炭疽病菌及Genbank中下載的139條炭疽菌ITS序列的ML系統進化分析

3 討論

炭疽病是糧食、經濟、果樹、花卉、蔬菜等重要作物上的一種比較嚴重的病害，不僅會影響作物的產量，還會影響作物的品質。掌握病害的為害狀況對炭疽病的防控有重要的指導意義。筆者對昭通綏江半邊紅李炭疽病為害狀況調查表明，會儀鎮黃坪村和新灘鎮鰱魚村的半邊紅李果園有不同程度的炭疽病危害，其中新灘鎮鰱魚村比會儀鎮黃坪村的危害程度嚴重，新灘鰱魚村的發病率達到50%，病情指數為78.5；從海拔梯度來看，500～700 m海拔危害程度最嚴重。因此，對炭疽病為害較嚴重的半邊紅李果園要加強防控，且重點關注海拔500 m以上的果園。

病原菌的鑒定對病害的確診及防治有重要的參考價值。炭疽病菌因分布廣泛，寄主范圍復雜多樣，形態特征差異較大而使其系統分類也變得撲朔迷離。其分類歷史經歷了依靠寄主階段、寄主上繁殖體顯微形態特征及純培養特征階段、純培養物上產生的分生孢子和附著孢形態特征大小及純培養物特征和寄主范圍階段，一直到現在的分子生物技術手段結合分生孢子和附著孢的形態特征及大小階段。每個分類階段都對炭疽菌的分類知識有新的認知。由于形態特征穩定性差且易受培養條件的影響，單獨依靠形態特征進行系統分析是不可靠的，所以利用遺傳特征穩定的性狀來研究炭疽菌種間差異和系統學關系非常關鍵。分子標記技術的發展對真菌分類造成了很大的影響。目前炭疽菌的分類依據主要結合前輩的分類系統，以附著孢、分生孢子的形態特征、大小，純培養特征以及進化速率合適的分子片段的序列構建系統進化樹來確定其歸屬。基于ApMat標記，芒果炭疽菌屬于C.siamensesensulato，包括C.jasminisambac、C.hymenocallidis、C.melanocaulon和C.siamensesensustricto等4個種以及3個新的潛在的未定名的系譜[14]。北京4個地區楊樹炭疽病由膠孢炭疽菌(C.gloeosporioideoes)和新種C.populi引起[27]。中國茶樹炭疽病菌基于形態特征和分子系統分析鑒定為尖孢炭疽復合群和膠孢炭疽復合群[36]。比利時蘋果苦腐病果實中分離鑒定了6種炭疽菌，分別是C.godetiae、C.fioriniae、C.salicis、疑似C.kahawae、C.nymphaeae、C.rhombiforme和C.acutatum，分屬膠孢炭疽復合群和尖孢炭疽復合群[37]。其中C.godetiae是比利時果園中最常見的致病菌。不同國家不同地區辣椒約有10多種炭疽菌引起炭疽病[38-43]。例如，美國辣椒炭疽病由C.acutatum、C.coccodes和C.gloeosporioides引起；澳大利亞辣椒炭疽病由C.acutatum、C.dematium、C.gloeosporioides和C.truncatum引起；韓國辣椒炭疽病由C.acutatum、C.coccodes、C.dematium、C.gloeosporioides和C.panacicola等引起[43]。印度辣椒炭疽病是由C.coccodes、C.fructicola、C.siamense和C.truncatum引起的[42]；中國辣椒炭疽病由C.acutatum、C.gloeosporioides、C.truncatum、C.coccodes、C.fioriniae、C.fructicola、C.scovillei、C.conoides、C.grossum、C.liaoningense、C.aenigma、C.cliviae、C.endophytica、C.hymenocallidis、C.incanum、C.karstii和C.viniferum等引起[38-39,41]。因此，炭疽病菌不僅因寄主而多樣復雜，也因不同地域而多樣化。

本研究首次對中國李樹地方品種半邊紅李上的炭疽病病原菌進行了分離，獲得4種類型分生孢子，經回接驗證均對李子葉片致病。僅從半邊紅李炭疽菌分生孢子形態來看，18-4-C2與其他菌株形態差異較大，分生孢子具1～3根附屬絲。附屬絲被認為是尾狀炭疽復合群中炭疽菌特有的形態特征[16]，但ITS序列分析暗示18-4-C2并不屬于尾狀炭疽復合群。由于附屬絲環境條件的不同而變化[44]，其作為炭疽菌的分類特征存在爭議，因此18-4-C2是否是膠孢炭疽復合群的新種有待進一步研究。結合分生孢子形態大小、菌落特征及其ITS序列構建的系統樹，初步將所分離到的炭疽菌歸入膠孢炭疽復合群C.gloeosporioidescomplex species和暹羅炭疽復合群C.siamensecomplex species。系統樹表明半邊紅李炭疽菌與膠孢炭疽復合群中的C.clidemiae、C.fructicola、C.aeschynomenes及暹羅炭疽復合群中的C.hymenocallidis有一定的聯系（圖4），但支持率不高，且分生孢子形態及菌落與這些相關種之間存在一定差異。僅從涉及的復合群可以看出，半邊紅李炭疽菌與韓國日本李炭疽菌部分相同。這個結果與辣椒炭疽菌結果類同，即不同區域相同寄主炭疽菌種類不同。為明確中國李樹炭疽病的種類，還應對其他地區的李樹炭疽病進行鑒定。

膠孢炭疽復合群包括C.asianum、C.cordylinicola、C.fructicola、C.gloeosporioides、C.horii、C.kahawaesubsp.Kahawae、C.musae、C.nupharicola、C.psidii、C.siamense、C.theobromicola、C.tropicale、C.xanthorrhoeae、C.aenigma、C.aeschynomenes、C.alatae、C.alienum、C.aotearoa、C.clidemiae、C.kahawaesubsp.Ciggaro、C.salsolae、C.ti和C.queenslandicum等22種1個亞種[15]，暹羅炭疽復合群包括C.jasmini-sambac、C.hymenocallidis、C.dianesei、C.siamense、C.endomangiferae、C.communis及身份模糊的C.murrayae等7個種[45]。由于膠孢炭疽復合群和暹羅炭疽復合群所涉及的種類較多，且ITS標記并不能很好地區分膠孢炭疽復合群和暹羅炭疽復合群內一些種間的關系[14-15]，因此綏江半邊紅李炭疽菌的鑒定還有待聯合多個分子標記對其進行分析。

4 結論

云南省綏江半邊紅李炭疽病為害狀況調查表明半邊紅李果園有不同程度的炭疽病危害，其中新灘鎮鰱魚村比會儀鎮黃坪村的危害程度嚴重，新灘鰱魚村的發病率達到50%，病情指數為78.5，會儀鎮黃坪的發病率達到20%，病情指數為20.4；且500～700 m海拔危害程度最嚴重。

單孢分離獲得15株李炭疽病分離株，各分離株平板菌落形態略有差異，獲得4類不同的分生孢子，經回接驗證均致病。rDNA ITS序列系統進化分析初步推定半邊紅李炭疽病的病原菌為膠孢炭疽復合群Colletotrichumgloeosporioidesspecies complex和暹羅炭疽復合群C.siamensespeciescomplex。

與韓國研究人員對日本李樹炭疽菌所屬種類比較，半邊紅李炭疽菌不涉及尖孢炭疽復合群中的種類，涉及的膠孢炭疽復合群和暹羅炭疽復合群中的種類是否與韓國的相同有待半邊紅李炭疽菌種類確定后再做討論。僅從涉及的復合群可以看出，半邊紅李炭疽菌與韓國日本李炭疽菌部分相同。