HPLC法測定中藥袋中4種抗氧劑的含量及其遷移

王小艷，張 濤，李 鵬

(安陽市食品藥品檢驗檢測中心，安陽 455000)

中藥袋主要由聚乙烯(polyethylene，PE)和聚對苯二甲酸乙二醇酯(polyethylene terephthalate，PET)材料組成[1]，具有質輕、穩定性好、使用方便等特點。由于PE和PET材料在成型和使用過程中受到熱、光、射線等因素的影響而容易老化，因此在生產過程中常常會加入抗氧劑予以改善、抑制或延緩其老化過程。抗氧劑有明確的生物毒性，對人體肝、脾、肺等均有不良影響。其相對分子質量較小，分散在聚乙烯結構中，可能溶入藥液，產生非預期的不良反應，甚至可與藥物反應降低療效[2]。目前，國內尚沒有中藥袋中抗氧劑的檢測方法，也沒有考慮抗氧劑的遷移量[3]。本實驗采用高效液相色譜(HPLC)法測定中藥袋中抗氧劑1010、330、1076、168的含量及對遷移量進行監測[4-10]，以期為中藥袋的質量研究提供參考依據。

1 材料

1.1 藥品與試劑

抗氧劑1010、168(Sigma-Aldrich公司，批號MKBS0720V、MKBL6586V，純度98%)；抗氧劑330[梯希愛(上海)化成工業發展有限公司，批號HBENN-NK，純度95.0%]；抗氧劑1076(北京百靈威科技有限公司,批號L740Q63，純度99%)；甲醇、乙腈(J.T.Baker公司，色譜純)；其他試劑均為分析純；超純水為 Molecular 純水機制備；樣品購于市場。

1.2 儀器

e2695高效液相色譜儀、2998 PDA檢測器(美國Waters公司)；XS205DU電子天平(瑞士梅特勒-托利多有限公司)；RV10 control旋轉蒸發儀(艾卡儀器設備有限公司)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Waters ZORBAX eclipse XDB C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；甲醇為流動相；采用Waters 2998 PDA檢測器，檢測波長274 nm，流速1.0 ml/min，柱溫25 ℃。色譜圖見圖1。

1:抗氧劑1010；2:抗氧劑330；3:抗氧劑1076；4:抗氧劑168

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取對照品抗氧劑1010、330、1076、168適量，以二氯甲烷與乙腈(1∶1)為溶劑，制備成每 1 ml 分別含10 μg抗氧劑1010、100 μg抗氧劑330、100 μg抗氧劑1076、100 μg抗氧劑168的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1提取試驗供試品溶液的配制

將中藥袋剪成1 cm×1 cm的小塊，精密稱取7.5 g，加入乙腈80 ml，精密稱定。水浴回流5 h，冷卻后用乙腈補足重量，過濾，旋轉蒸發濃縮至近干，用乙腈溶解并定容至2 ml量瓶中，濾過，即得。

2.3.2遷移試驗供試品溶液的配制

取本品，按照標示量分別裝入90 ℃的模擬浸泡液(水、pH 3.5緩沖液、pH 8.0緩沖液)，保溫30 min后放至室溫。分別于0、3和7天取樣。取1藥袋，將模擬浸泡液旋轉蒸發濃縮至近干，用乙腈溶解并定容至1 ml量瓶中，濾過，作為遷移試驗供試品溶液。

2.4 線性關系

分別取4種抗氧劑系列對照品溶液，在“2.1”色譜條件下，精密吸取10 μl，分別注入色譜儀中，測定色譜峰面積。以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線。可知每種抗氧劑在各自范圍內線性關系良好。見表1。

表1 4種抗氧劑線性關系

2.5 精密度試驗

精密吸取混合對照品溶液10 μl，連續進樣6次。測得抗氧劑1010、330、1076、168峰面積的RSD分別為1.5%、1.6%、1.8%、0.8%。

2.6 穩定性試驗

精密吸取同一樣品溶液10 μl，分別在0、2、4、6、8、10和12 h進樣，測得抗氧劑1010、1076、168峰面積的RSD分別為1.4%、0.6%、1.3%。表明樣品溶液在12 h內穩定性良好。

2.7 重復性試驗

精密稱取同一樣品，按照“2.3.1”項下方法平行制備供試品溶液，在“2.1”色譜條件測定峰面積，結果樣品中抗氧劑1010、1076、168含量的RSD分別為0.2%、0.1%、0.5%。

2.8 加樣回收率試驗

取已知含量的樣品6份，精密稱定7.5 g，分別精密加入混合對照品溶液(抗氧劑1010、330、1076、168濃度分別為0.1017、1.012、1.000和1.055 mg/ml)3 ml，按照“2.3.1”項下方法制備供試品溶液，在“2.1”色譜條件下分析。結果抗氧劑1010、330、1076、168的平均加樣回收率分別為82.4%、84.5%、91.6%和95.7%，RSD分別為0.5%、1.1%、1.5%和1.3%。

2.9 檢測限和定量限

取混合對照品溶液用二氯甲烷與乙腈(1∶1)逐步稀釋，按照“2.1”色譜條件進行測定，記錄4種抗氧劑的信噪比，以信噪比為3∶1時的進樣濃度作為檢測限，以信噪比為10∶1時的進樣濃度作為定量限，各抗氧劑的檢測限和定量限濃度如表2所示。

表2 4種抗氧劑的檢測限與定量限試驗結果

2.10 樣品含量測定

2.10.1提取試驗樣品測定結果

取中藥袋8批，按照“2.3.1”項下方法制備供試品溶液，在“2.1”色譜條件下分析，以峰面積計算含量，結果見表3。

表3 中藥袋中抗氧劑的含量測定結果 μg/g

2.10.2遷移試驗樣品測定結果

取中藥袋8批，按照“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.1”色譜條件下分析，以峰面積計算含量，結果見表4。測定結果表明，8批中藥袋中均未檢出抗氧劑330，檢測到抗氧劑1010、1076、168有不同程度的遷移，樣品放置7天后抗氧劑的遷移量沒有明顯增加。

表4 遷移試驗樣品測定結果 ng/cm2

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

取抗氧劑1010、330、1076、168對照品適量，加入二氯甲烷和乙腈(1∶1)制成適當濃度的溶液，以二氯甲烷和乙腈(1∶1)為空白，在190～800 nm波長范圍內進行光譜掃描，結果表明抗氧劑1010、330、1076、168都在274 nm處有最大吸收，干擾少且穩定。

3.2 提取方法的選擇

本實驗以甲苯、乙腈∶四氫呋喃(1∶1)、乙腈為溶劑進行提取，以抗氧劑1010、330、1076、168回收的含量分別為指標，觀察回流(1、2、5和6 h)、超聲(20、30和40 min)不同的提取方法，結果表明乙腈為提取溶劑時，回流5.0 h，抗氧劑1010、330、1076、168含量均達到最高且能提取完全。

3.3 流動相的選擇

本實驗考察了水-四氫呋喃-乙腈、乙腈-水、乙腈、甲醇為流動相，發現以甲醇為流動相的色譜圖基線更平穩，峰型和分離度均較好，所以確定其為流動相。

3.4 遷移試驗浸泡液的選擇

中藥合劑的pH一般為3.5～7.0，又考慮到中藥液在放置過程中微生物的滋長易導致酸敗現象，所以選擇水、pH 3.5緩沖液和pH 8.0緩沖液作為浸泡液模仿灌裝和使用。

3.5 遷移試驗提取方法的選擇

分別用Cleanert PEP-SPE固相萃取小柱吸收提取液，并用乙腈洗脫，收集洗脫液；旋轉蒸發儀濃縮提取液近干，用乙腈溶解并定容；用正己烷提取浸泡液，收集正己烷提取液，用氮氣吹干，正己烷定容。用3種提取方法對4種抗氧劑做加樣回收，發現用旋轉蒸發儀濃縮提取液近干，用乙腈溶解并定容回收率最高。

3.6 抗氧劑330的情況分析

本次收集的樣品中檢測到抗氧劑1010、1076、168，未檢測到抗氧劑330。抗氧劑1010、1076、168在不同的提取液有所遷移，所以建議在生產加工中藥袋時，選用合格的藥品包裝材料。這樣才能降低抗氧劑帶來的風險，保障人民群眾用藥安全。

綜上所述，本實驗所建立的HPLC法測定中藥袋中4種抗氧劑含量的檢測方法，4種抗氧劑在一定濃度范圍內呈線性，回收率、精密度和重復性等均達到要求。可滿足藥包材中抗氧劑1010、330、1076、168的定性與定量分析，為藥包材的質量控制提供一定的依據。