龍鹿膠囊通過SIRT1/eNOS 信號(hào)通路對(duì)糖尿病大鼠勃起功能障礙的影響

夏雨果 陳 秋 高 坪 曾文彤 張蜀武

1. 成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院泌尿外科（四川成都 610072）；2. 成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科（四川成都 610072）

由糖尿病誘發(fā)的勃起功能障礙稱為糖尿病勃起功能障礙（diabetes mellitus erectile dysfunction,DMED）[1]，其發(fā)病率逐年升高，成為影響男性性功能的重要因素，目前治療效果欠佳， 中醫(yī)藥對(duì)DMED 有獨(dú)特療效，本文研究龍鹿膠囊對(duì)DMED 大鼠勃起功能的影響并探討其作用機(jī)制，為中醫(yī)藥治療DMED 提供理論基礎(chǔ)。

材料與方法

一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及主要試劑儀器

本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)通過成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，SPF 級(jí)雄性SD 大鼠 （約6-7 周齡， 體重200-350 克）購自成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司；龍鹿膠囊原藥購自天津和治藥業(yè)集團(tuán)有限公司。 實(shí)時(shí)熒光定量儀（ThermoFisher，美國），STZ、焦碳酸二乙酯（DEPC）（sigma， 美國），Trizol （invitrogen 公司），SYBR Premix Ex Taq II Kit、PrimeScript RT reagent Kit （寶生生物工程大連有限公司），Sirt1、β-actin 引物 （上海生工合成）；大鼠NO、SOD、MDA Ellisa 檢測(cè)試劑盒 （上海茁彩生物科技有限公司），Sirt1、eNOS、β-actin 抗體（美國Affinity 公司），BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒 （南京凱基生物公司），ECL 發(fā)光試劑盒 （美國Thermo 公司）， 蛋白Marker （美國NEB 公司），PVDF 膜 （美國Hybond 公司）；濃縮型DAB 試劑盒、羊抗兔二抗（北京中衫金橋生物有限公司）， 大鼠ICP/MAP 測(cè)定使用BL-420 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司），免疫組化采圖及分析使用Image-Pro Plus 6.0 （美國Media Cybernetics 公司）。

二、DMED 大鼠模型的建立

6-7 周齡70 只雄性SD 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，測(cè)大鼠隨機(jī)血糖作為基線， 由電腦隨機(jī)排位抽取10 只大鼠作為正常組， 余60 只作為實(shí)驗(yàn)組。 實(shí)驗(yàn)組腹腔注射60mg/kg STZ 誘導(dǎo)1 型糖尿病，正常組大鼠注射等量的生理鹽水， 注射后7 天取大鼠尾靜脈血測(cè)定隨機(jī)血糖，以血糖＞16.7mmol/L 作為糖尿病成模標(biāo)準(zhǔn)[2]，未成模的大鼠補(bǔ)注射1 次STZ， 注射濃度為30mg/kg， 注射后3天再按以上標(biāo)準(zhǔn)篩選模型。 將大鼠飼養(yǎng)于SPF 環(huán)境，自由飲水，定時(shí)喂養(yǎng)，用燈光行人工晝夜調(diào)節(jié)，糖尿病大鼠飼養(yǎng)10 周后， 依照本課題組前期的篩選方法[3]篩選DMED 大鼠，將APO 按100μg/kg 皮下注射于大鼠頸部皮膚，觀察30 分鐘，攝像機(jī)記錄大鼠有無勃起以及勃起次數(shù)，其中未見勃起者篩選為DMED 大鼠。大鼠陰莖勃起的標(biāo)準(zhǔn)為：龜頭露出充血，包皮后退，陰莖膨大增長。

三、實(shí)驗(yàn)分組及給藥

原隨機(jī)分配的正常組不變， 將篩選成功的DMED大鼠42 只隨機(jī)分為3 組，每組14 只，最終分組情況如下：A：正常組；B：DMED 組，即糖尿病勃起功能障礙模型組，僅對(duì)大鼠灌胃等量的生理鹽水；C：龍鹿膠囊組：即按每日360mg/kg 的龍鹿膠囊原藥(為臨床常用劑量的6 倍)對(duì)DMED 大鼠進(jìn)行灌胃；D：西地那非組：即按每日5mg/kg 的西地那非對(duì)DMED 大鼠進(jìn)行灌胃。 給藥后2 周及4 周測(cè)定大鼠體重及血糖， 給藥4 周后測(cè)定ICP/MAP 評(píng)估大鼠勃起功能，測(cè)量完成后取大鼠陰莖組織進(jìn)行病理學(xué)及分子生物學(xué)檢測(cè)。

四、陰莖海綿體內(nèi)壓（ICP）及平均頸動(dòng)脈壓（MAP）的測(cè)定

各實(shí)驗(yàn)組給藥4 周后進(jìn)行ICP/MAP 測(cè)定， 各組大鼠ICP/MAP 測(cè)定前24 小時(shí)停止給藥， 測(cè)定日晨禁食，予以10%水合氯醛6ml/kg 腹腔注射對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉，常規(guī)消毒鋪巾，參考陳婉媚等[4]報(bào)道方法，先暴露頸總動(dòng)脈，將22 號(hào)蝶形插管插入頸總動(dòng)脈固定后與BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)連接測(cè)定MAP 值。 解剖分離大鼠陰莖，將24 號(hào)蝶形針插入陰莖海綿體連接傳感器測(cè)定基礎(chǔ)ICP，再分離出陰莖根部的海綿體神經(jīng)，將BL-420 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的電極鉤住海綿體神經(jīng)， 電刺激神經(jīng)誘導(dǎo)勃起，測(cè)定勃起狀態(tài)下ICP 值。

五、免疫組化測(cè)定eNOS 在細(xì)胞中的表達(dá)

將10%的甲醛固定的組織經(jīng)全自動(dòng)脫水機(jī)脫水，包埋，切片，將切片經(jīng)脫蠟浸入3%甲醇雙氧水10min，PBS 洗3 次， 每次5min， 檸檬酸鹽緩沖液加溫至沸騰，PBS 洗凈后加入封閉液浸泡20min， 然后加入兔抗鼠eNOS 孵育過夜，滴加生物素化二抗，37℃30 min，PBS洗3 次后DAB 顯色，透明樹膠封片，光鏡下采圖，結(jié)果使用Image-Pro Plus 6.0 進(jìn)行分析。

六、qPCR（定量PCR）測(cè)定mRNA 表達(dá)

取出冷凍保存的陰莖組織稱取100mg， 按說明書依次加入Trizol、氯仿、異丙醇等試劑提取總RNA，將提取的總RNA 使用DNA Eraser Buffer 試劑盒去除DNA，純化RNA，將得到的RNA 用PrimeScript RT Enzyme Mix I 試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)完成后加入引物進(jìn)行PCR 擴(kuò)增， 引物序列如下：SIRT1 上游引物：tggcagtaacagtgacagtggcacat，SIRT1 下 游 引 物：tcagctccagatcctccagcacactc；β-actin 上 游 引 物 ：gaagatcaagatcattgctcct，β-actin 下游引物：tactcctgcttgctgatcca； eNOS上 游 引 物：agctggatgaagccggtgac，eNOS 下 游 引 物：cctcgtggtagcgttgctga， 反應(yīng)條件設(shè)置為95℃預(yù)變性30s，95℃變性5s，55℃退火30s，72℃反應(yīng)30s 充分延伸并采集熒光， 以上反應(yīng)循環(huán)40 次， 最終結(jié)果采用2-ΔΔCT 方法進(jìn)行分析。

七、Western blot 檢測(cè)蛋白表達(dá)

取液氮凍存小鼠陰莖組織于37℃水浴中解凍，按1：10 的比例加入RIPA 裂解液后用滅菌后的小剪刀剪碎，置碎冰上裂解10min；收集裂解液并離心取上清液，用BCA 蛋白測(cè)定法檢測(cè)樣品中的總蛋白濃度。 將配制好的30%聚丙烯酰胺凝膠加入電泳液， 根據(jù)所測(cè)蛋白濃度用移液槍按濃度加入60μg 蛋白量加至樣孔中進(jìn)行電泳，電泳結(jié)束后將分離的蛋白轉(zhuǎn)膜至PVDF 膜，將膜置入含有牛奶的TBS-T 中封閉，加入一抗孵育過夜，其中一抗?jié)舛劝处?actin 1:5000、 SIRT1 1:500、eNOS 1:500 的比例進(jìn)行稀釋， 次日加入羊抗兔二抗進(jìn)行孵育，最后進(jìn)行顯影、定影、拍照。 用Quentity One 進(jìn)行目的條帶分析， 目的蛋白相對(duì)表達(dá)量=目的蛋白積分光密度值（IOD）/內(nèi)參積分光密度值（IOD）。

八、ELLISA 測(cè)定SOD、MDA、NO 的表達(dá)

將冷凍保存的組織解凍并勻漿，按照ELLISA 說明書于空白孔加入顯色劑A、B 和終止液。 標(biāo)準(zhǔn)品中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL，待測(cè)樣品孔中加入樣本50μL，然后均加入辣根過氧化物酶100μL，37℃溫育60 min，洗滌后加入TAB 底物顯色，以空白孔調(diào)零，用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

九、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

一、體重與血糖變化

建模開始前， 各組大鼠基線體重、 血糖無明顯差別，無基線誤差，隨著大鼠生長周期的延長，大鼠的體重逐漸增加，但正常組大鼠體重增加更多，注射STZ4周后糖尿病大鼠體重明顯低于正常組， 而在相同時(shí)間點(diǎn)，DMED 組、龍鹿膠囊組、西地那非組大鼠體重均明顯低于正常組（P＜0.01），但DMED 組、龍鹿膠囊組、西地那非組大鼠體重?zé)o明顯差別。 注射STZ 后1 周DMED 組、 龍鹿膠囊組、 西地那非組大鼠血糖明顯升高，高于正常組（P＜0.01），其值達(dá)到大鼠糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，使用龍鹿膠囊后，大鼠血糖值無明顯變化。

表1 各組大鼠體重的變化

表2 各組大鼠血糖變化

二、各組大鼠陰莖組織中SOD、MDA、NO 的表達(dá)水平

與正常組相比，DMED 組大鼠陰莖組織中MDA的含量明顯升高 （P＜0.01），SOD、NO 的含量明顯降低（P＜0.01）。 與DMED 組相比，龍鹿膠囊組SOD、NO 水平明顯升高（P＜0.05,P＜0.01）、同時(shí)也高于西地那非組（P＜0.05）。 但龍鹿膠囊組MDA 水平低于DMED 組（P＜0.05），與正常組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，如表3 所示。

表3 ELLISA 檢測(cè)各組大鼠SOD、MDA、NO 的表達(dá)水平

三、ICP/MAP 測(cè)定結(jié)果

經(jīng)頸動(dòng)脈測(cè)得各組大鼠動(dòng)脈血壓無明顯差異（P＞0.05）， 西地那非組DMED 組及龍鹿膠囊組的基礎(chǔ)ICP 值低于正常組（P＜0.01）。誘導(dǎo)勃起后DMED 組ICP值仍明顯低于正常組（P＜0.01）；龍鹿膠囊組勃起后ICP值雖低于正常組（P＜0.05），但明顯高于DMED 組（P＜0.01），而且也高于西地那非組（P＜0.01），如表4 所示。

表4 各組治療后ICP/MAP 比較結(jié)果

四、各組大鼠陰莖組織SIRT1、eNOS mRNA 表達(dá)的變化

定量PCR 結(jié)果顯示，DMED 組陰莖組織SIRT1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量低于正常組（P＜0.01），但龍鹿膠囊組SIRT1 mRNA 表達(dá)水平明顯高于DMED 組 （0.79±0.12 vs 0.39±0.14，P＜0.01），與正常組表達(dá)水平無明顯差別（P＞0.05）。龍鹿膠囊組的eNOS mRNA 表達(dá)量雖低于正常組（P＜0.05），但明顯高于DMED 組（P＜0.01），也高于西地那非組（P＜0.05），如圖1 所示。

圖1 SIRT1、eNOS 的mRNA 表達(dá)柱狀圖

五、SIRT1、eNOS 蛋白在各組大鼠陰莖組織的表達(dá)水平

結(jié)果顯示DMED 組的SIRT1 及eNOS 的表達(dá)量顯著低于正常組（P＜0.01），龍鹿膠囊組SIRT1 的表達(dá)量雖低于正常組（P＜0.05），但高于DMED 組及西地那非組（P＜0.05）。龍鹿膠囊組eNOS 蛋白表達(dá)量顯著高于DMED 組（0.99±0.05 vs 0.50±0.19，P＜0.01），也高于西地那非組（0.99±0.05 vs 0.76±0.06，P＜0.05），與正常組無明顯差別（P＞0.05），如圖2 所示。

圖2 western blot 檢測(cè)SIRT1、eNOS 蛋白表達(dá)

六、免疫組化評(píng)估eNOS 在陰莖海綿體中的分布

大鼠陰莖eNOS 免疫組化切片中底物為白色，陰性細(xì)胞呈藍(lán)色，陽性細(xì)胞呈黃色或棕黃色，正常組eNOS陽性細(xì)胞表達(dá)較多，主要分布于血管周圍內(nèi)皮細(xì)胞，位于細(xì)胞漿。 DMED 組eNOS 平均光密度值較正常組明顯降低（P＜0.01），龍鹿膠囊組eNOS 平均光密度值明顯高于DMED 組（P＜0.05），與正常組無明顯差別（P＞0.05）。

圖3 eNOS 免疫組化圖

討 論

近年來隨著我國社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展以及人們生活方式的改變， 高脂飲食及缺少運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致越來越多的人群患有糖尿病，糖尿病患病率升高且患病年齡年輕化，更易誘發(fā)勃起功能障礙， 成為影響男性生活健康及家庭和諧的重要因素， 受到社會(huì)學(xué)家和醫(yī)學(xué)研究者極大關(guān)注。DMED 的發(fā)病機(jī)制還不是很清楚，目前國內(nèi)外的研究主要集中在陰莖血管內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)功能損害、神經(jīng)因素、內(nèi)分泌因素及心理社會(huì)因素等四個(gè)方面， 特別是陰莖血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能障礙與DMED關(guān)系最為密切[5]。 陰莖勃起實(shí)質(zhì)上是神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)下的血管活動(dòng)過程， 正常的陰莖勃起依賴于完整的血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)及良好的功能， 完整的血管內(nèi)皮細(xì)胞可有效地通過NO/cGMP 途徑擴(kuò)張陰莖血管使海綿體充血從而達(dá)到有效的勃起[6]。 而糖尿病病人體內(nèi)的高血糖環(huán)境激活氧化應(yīng)激反應(yīng)， 過量的氧化應(yīng)激產(chǎn)物損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞引起氧自由基超載、線粒體功能障礙，使內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO 功能障礙，甚至引起內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，從而影響到陰莖的勃起功能[7]。 本研究也證實(shí)在糖尿病大鼠陰莖組織中抗氧化物SOD 明顯減少，產(chǎn)生過量的MDA，增多的氧化應(yīng)激產(chǎn)物損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞， 使其產(chǎn)生的NO 明顯降低， 進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)其上游抗氧化基因SIRT1 表達(dá)被抑制。 因此，通過抑制氧化應(yīng)激損傷保護(hù)陰莖血管內(nèi)皮細(xì)胞是治療DMED 的有效方法。 目前臨床廣泛使用的治療ED 的藥物如西地拉非、他達(dá)拉非等屬PDE5 抑制劑， 主要通過抑制cGMP 的降解松馳平滑肌從而誘導(dǎo)勃起[8]，其前提是陰莖血管內(nèi)皮細(xì)胞要產(chǎn)生足夠量的NO， 但由于糖尿病患者陰莖內(nèi)皮損傷嚴(yán)重，大量內(nèi)皮細(xì)胞因氧化應(yīng)激損傷而凋亡，一氧化氮合酶（eNOS）嚴(yán)重缺乏，而eNOS 在一氧化氮NO 的合成、陰莖勃起的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)中起決定性作用。 因而對(duì)PDE5 抑制劑藥效不敏感，治療效果欠佳[9]，臨床上亟需尋找一種能保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的藥物， 更有效的治療DMED。 祖國傳統(tǒng)中醫(yī)藥源遠(yuǎn)流長，治療ED 有著悠久的歷史和豐富的經(jīng)驗(yàn)，在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中以“陰痿”、“筋痿”指陽痿一病，如“經(jīng)筋之病，寒則反折筋急，熱則筋弛縱不收，陰痿不用”，“思想無窮，所愿不得，意淫于外，入房太甚，宗筋馳縱，發(fā)為筋痿”均是其論述。 “陽萎”之名首見于明代周之干所著《慎齋遺書》：“陽萎多屬于寒，鎖陽固精，肉蓯蓉壯陽，菟絲子添精，杞子升發(fā)陽氣，或建中湯以溫之”等相關(guān)的論述。 糖尿病在中醫(yī)稱之為“消渴”，消渴所致陽萎在古籍中亦有論述[10]，明代趙獻(xiàn)可在《醫(yī)貫》中論述消渴時(shí)就提及“或心煩躁渴，小便頻數(shù)，或白濁陰痿”；《雜病源流犀燭·三消源流》亦有所述：“有腎消大渴便數(shù)，腰膝痛者化源既病，則陽道外衰，故不得隱曲而枯澀，女子不月”[11]。 從古籍中可以看出對(duì)陽萎的治療主要以“腎”為主，以“補(bǔ)”為治法的辨治理論，治腎又以腎氣、腎精為著手點(diǎn)，如人參、杜仲、淫羊霍、鹿茸等動(dòng)植物藥成為治療陽萎的常用中草藥，符合“腎藏精，主生殖”的理念。

龍鹿膠囊由人參、鹿茸、淫羊藿、狗鞭、驢鞭、熟地黃、山茱萸、五味子、海龍、附子、補(bǔ)骨脂、肉蓯蓉、鎖陽、巴戟天、枸杞子、麥冬、山藥、當(dāng)歸、黃芪、白術(shù)、茯苓、菟絲子、覆盆子、牡丹皮、杜仲、續(xù)斷等中藥組成，具有溫腎壯陽、益氣滋腎、澀精止遺的功效，臨床主要用于元?dú)馓澨撝裎摇⑹秤徽瘛⑦z精陽痿、精寒無子；女子宮寒、久不孕育。全方以人參、黃芪大補(bǔ)元?dú)猓灰蜣健⑷馍惾亍完臁⒏阶拥葴匮a(bǔ)腎陽；熟地黃、枸杞子、麥冬等滋養(yǎng)腎陰；黃芪、白術(shù)、當(dāng)歸、牡丹皮健脾補(bǔ)血改善微循環(huán)；全方兼顧氣、血、陰、陽，并于陰中求陽，所謂善補(bǔ)陽者，必于陰中求陽，則陽得陰助而生化無窮，縱觀全方補(bǔ)而不燥，滋而不膩，特別是方中鹿茸、海龍、狗鞭、驢鞭等血肉有情之品的運(yùn)用，不僅增強(qiáng)了補(bǔ)腎生精之功，也符合張景岳“精不足者補(bǔ)之以味”之理念。 金保方[12]等研究表明龍鹿膠囊不僅具有補(bǔ)腎助陽功效，還能增強(qiáng)機(jī)體抗氧化作用， 龍鹿膠囊能有效提高少弱精子患者的精子質(zhì)量，降低精子DFI，提高精液SOD 水平，有效抗氧化應(yīng)激損傷。龍鹿膠囊遵循中醫(yī)理論、組方精妙，其中多種單味中藥及其提取物具有明顯的抗氧化作用，如人參具有益氣補(bǔ)中、生津止渴等功效，常被用來治療消渴病，其提取物人參皂苷Rg1 有明顯的抗氧化及保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，能降低氧化應(yīng)激產(chǎn)物的生成，提高機(jī)體的抗氧化功能，減少糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生[13]。 本方中的其它中藥提取物如黃芪多糖、地黃多糖、當(dāng)歸多糖、枸杞多糖等都與細(xì)胞的抗氧化能力及抗凋亡密切相關(guān)，在試驗(yàn)設(shè)計(jì)之初我們就推測(cè)龍鹿膠囊可能通過保護(hù)陰莖血管內(nèi)皮細(xì)胞改善DMED 大鼠的勃起功能。 本課題組前期實(shí)驗(yàn)將攜帶多效生長因子（PTN）基因的脂肪干細(xì)胞注射到DMED 大鼠的陰莖海綿體1 周后即能檢測(cè)PTN 基因高表達(dá)，大鼠陰莖新生血管增多，DMED 大鼠受損的勃起功能得到有效恢復(fù)[14]。 本課題組通過注射鏈脲霉素成功構(gòu)建糖尿病勃起功能障礙動(dòng)物模型，并用龍鹿膠囊進(jìn)行灌胃，雖未觀察到龍鹿膠囊對(duì)糖尿病大鼠血糖有明顯影響，但明顯增加了抗氧化應(yīng)激物SOD 的產(chǎn)生、降低氧化應(yīng)激產(chǎn)物MDA 的生成， 保護(hù)了陰莖血管內(nèi)皮細(xì)胞，上調(diào)eNOS 的產(chǎn)生，增加血管舒張因子NO 的產(chǎn)生，從而改善DMED 大鼠的勃起功能。

沉默信息調(diào)節(jié)因子2 相關(guān)酶1 (silent information regulator 2-related enzymes 1，Sirtuin 1，SIRT1)是一種依賴煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucletide，NAD)的Ⅲ類組蛋白去乙酰化酶，屬于哺乳動(dòng)物Sirtuin 家族， 有充分證據(jù)表明SIRT1 在許多病理生理過程中起著關(guān)鍵作用，如氧化應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)胞能量代謝及細(xì)胞周期調(diào)節(jié)等， 近來研究表明其具有延緩血管內(nèi)皮細(xì)胞衰老，維持血管內(nèi)皮功能穩(wěn)定等作用[15]。 它可通過調(diào)節(jié)內(nèi)皮源型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide syntheses，eNOS)等的活性促進(jìn)NO 的生成， 改善內(nèi)皮依賴的血管舒張活性并延緩內(nèi)皮細(xì)胞的衰老[16]。 因此，對(duì)于以內(nèi)皮功能障礙為主要發(fā)病原因的DMED，SIRT1是其潛在的治療靶點(diǎn)之一，Sener TE 等[17]研究發(fā)現(xiàn)白黎蘆醇能夠改善放療所致前列腺癌病人的勃起功能，其作用機(jī)制就是白黎蘆醇可以激活SIRT1 基因， 增加抗氧化應(yīng)激產(chǎn)物GSH（谷胱甘肽）、SOD 的表達(dá)，減少氧化應(yīng)激產(chǎn)物8-OHdG 的產(chǎn)生， 保護(hù)了陰莖血管內(nèi)皮細(xì)胞，使海綿體nNOS 及eNOS 的表達(dá)增加，在勃起過程中產(chǎn)生更多的NO 及cGMP，改善放療所致前列腺癌病人的勃起功能障礙。 本研究中龍鹿膠囊能明顯減輕DMED 大鼠陰莖組織的氧化應(yīng)激損傷， 上調(diào)SIRT1 的表達(dá)，保護(hù)陰莖血管內(nèi)皮細(xì)胞，并激活下游基因eNOS的表達(dá)，增加了NO 的產(chǎn)生，同時(shí)免疫組化顯示上調(diào)表達(dá)的eNOS 主要分布于海綿體的血管內(nèi)皮細(xì)胞， 體現(xiàn)了結(jié)構(gòu)與功能的一致性，與文獻(xiàn)報(bào)道相符，同時(shí)我們也可觀察到陰莖海綿體部分肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂甚至纖維化，可能也是影響勃起功能的重要因素，這也是我們下一步研究的重點(diǎn)。

綜上，本課題組通過腹腔注射STZ 建立DMED 大鼠模型， 用龍鹿膠囊對(duì)DMED 大鼠進(jìn)行灌胃治療，結(jié)果證明龍鹿膠囊能減輕DMED 大鼠陰莖組織的氧化應(yīng)激損傷，有效改善DMED 大鼠勃起功能，其主要作用機(jī)制是激活了Sirt1/eNOS 信號(hào)通路， 改善血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生NO 的能力。